Нанокапсулы для наращивания волос: Нано-микро наращивание волос в Москве | микрокапсульное

Nano наращивание

Нанонаращивание — это усовершенствованная процедура, в которой учтены ошибки прошлых капсульных методов, Нано размеры, которые дают больше возможностей наращивать на любых участках головы и даже на самую короткую длину. Материал для крепление наращенных прядей намного прочнее, натуральнее и не вызывает раздражения кожи и запутывания.

Запишитесь на консультацию в Академию наращивания волос Лилии Мамутовой +7(978)801-77-71

Достоинства методики:

1. Безопасность.
2. Безболезненность.
3. Применение сравнительно низких температур во время проведения процедуры. Около 90 градусов, при стандартном наращивании работают с температурой до 200 градусов.
4. Нанокапсулы  незаметны на волосах.
5. Малый размер капсул позволяет прикреплять их к каждому волоску.
6. Нанонаращивание можно проводить частично, на какую-либо часть головы.
7. Метод применим на мужчинах и женщинах.
8. Нанокапсулы  не повреждают природную структуру.
9. Волосы после процедуры утяжеляются по минимуму.

Единственным минусом процедуры является высокая стоимость, однако, она доказывает её высокую эффективность.

Правильный уход

Несмотря на высокое качество и отзывы о нанонаращивании, только правильный уход поможет поддерживать наращенные волосы в хорошем состоянии.

1. Коррекция наращенных прядей обязательна. Её проводят через три или четыре месяцев.
2. Шампунь и кондиционеры должны иметь специальную отметку, о том, что они разработаны для наращенных волос.
3. Расческа для ухода должна быть специальная, желательно с натуральной щетиной.

Нанонаращивание обеспечит женщине или мужчине роскошную шевелюру, не доставляющую лишних неудобств. С такими волосами можно посещать бани, сауны, бассейны, их можно выпрямлять утюжком и завивать. Риск отпадения локонов становится минимальным, с такой процедурой беспокоиться об этом не придется.

Капсульное или микрокапсульное наращивание? Что лучше?

— Капсулы и микрокапсулы. В чём их отличие? Что лучше и для кого?
— Стандартные капсулы. Капсульное наращивание волос.
— Микрокапсульное наращивание волос.
— Кому нужны микрокапсулы?
— Комбинированное наращивание волос — идеальный вариант для всех.
— P.S.

Капсулы и микрокапсулы. В чём их отличие? Что лучше и для кого

Самый часто задаваемый вопрос: в чём же отличие капсул стандартных от микрокапсул? И как бы ни звучало, на самом деле всё легко и просто: они отличаются размером. И всё.
Но всё же расскажу, какой вид капсул для какого наращивания, и каким клиентам подходит больше всего. Капсулы и микрокапсулы являются совершенно безопасным видом наращивания донорских волос, с учётом, если соблюдается технология наращивания волос, индивидуально подбирается объём (без перегруза) — у мастера не должно быть желания натыкать в голову миллион капсул. Также немаловажен правильный домашний уход, дабы избежать запутываний и сохранить качество своих и наращённых волос, ну и конечно же, своевременная коррекция (раз в 2-3 мес.

). Отчего это зависит кому и сколько ходить с наращёнными волосами от коррекции до коррекции, опишу ниже.

Стандартные капсулы. Капсульное наращивание волос

_{Связка волос для капсульного наращивания.}

Размер капсулы в среднем, чуть больше рисового зерна, капсула в общем и похожа на рисовое зёрнышко по форме, такая же пузатенькая в середине и чуть тоньше к концам.

Капсулы удобны в носке, не доставляют болезненных ощущений, максимум у клиентов с чувствительной кожей головы могут быть 2-3 дня дискомфорта во время сна, так как кожа не привыкла и повторюсь чувствительна. Но через 2-3 дня, все неприятные ощущения проходят и 

клиент забывает о том, что у него наращённые волосы и получает удовольствие. Уход за капсульным наращиванием волос, очень лёгкий и ничем не отличается, практически ничем от ухода за своими родными волосами.
Уход за наращёнными волосами:

• Мытьё стоя под душем. Шампуни, кондиционеры, маски, какие вашей душе угодно. Исключение только, если у вас на волосы перед наращиванием волос было сделано кератиновое выпрямление, ботокс для волос, «нанопластика», реконструкция волос. В таких случаях — строго безсульфатные шампуни и кондиционеры, бальзамы.
• Масла для волос, косметические, любые по длине (строго не попадая на капсулы).
• Термозащита перед укладкой, это для ваших волос в первую очередь, а не для наращённых.
• Сушка феном и брашингом (круглая расчёска) или массажной расчёской (без шариков на концах чтобы не цепляли капсулы).
• Возможно самостоятельное высыхание без укладки, если свои волосы от природы идеальны по структуре и не испорчены.
• Мытьё головы может происходить так часто, как вам это необходимо, ограничений нет.
• Накрутка волос на плойку/утюг возможны и безопасны. Но помним — термозащита при этом жизненно необходима, берегите свои волосы.

_{Так выглядят правильные расчески для наращенных волос}

_{Так выглядит правильный утюжек для наращенных волос}

_{Идеальное масло для волос. Можно купить у нас в Студии 🙂}

С капсульным наращиванием можно окрашивать волосы, делать уходы (кератин, ботокс, реконструкцию, нанопластику), любые укладки и собирать волосы. Но окрашиваем волосы строго в том салоне, где наращивали волосы, иначе Студия не несёт ответственности за дальнейшее качество волос после наращивания. Стандартные капсулы подходят практически всем клиентам, за исключением клиентов, у которых очень тонкие и негустые волосы (очень негустые, истощённые). Стандартными капсулами можно перекрыть любые стрижки и длины волос начиная от 5-6 см, иногда берёмся и за более короткие варианты, но это редкость.

Уход за капсульным наращиванием волос, очень лёгкий и ничем не отличается, практически ничем от ухода за своими родными волосами.

_{Идеальное наращивание на короткие волосы}

_{Идеальное наращивание на короткие волосы, вид 2.}

Можно как удлинить собственные волосы, так и увеличить густоту волос. Идеально перекрыть каре и боб каре, сделать ещё длиннее и гуще волосы длинной от плеч и лопаток. Можно удлинить на 30-50 см от своей длины, а иногда и больше, если позволяет густота и состояние своих волос. Капсулы очень легко и безболезненно корректируются, легко снимаются жидкостью для снятия наращённых волос и щипчиками.

Сама коррекция наращённых волос происходит очень быстро: мастер снимает, ассистент в это время уже капсулирует, мастер наращивает следом. Для капсул используется кератин (биополимер), который совершенно безвреден для волос. Температура аппарата (щипцов) для наращивания составляет 170 градусов и соприкосновения с волосами не происходит, только непосредственно с кератиновой капсулой для её расплавления и формирование в «рисовое зёрнышко».

_{Идеальное наращивание волос}

Волосы можно носить и перенаращивать до тех пор, пока этого хочется или пока под наращёнными не отрастёт желаемая длина. Многие отращивая свои волосы потом наращивают для густоты 40-60 прядочек и ходят так на постоянной основе. Далее, поговорим немного о микрокапсулах.

Микрокапсульное наращивание волос

_{Волнистые волосы для микрокапсульного наращивания}

Размер капсул ровно в два раза меньше от размера стандартных капсул. Микрокапсула — это стандартная капсула для наращивания, но поделённая на два. Соответственно, если стандартных нарастить можно 150 капсул, допустим, то микрокапсул это будет уже 300.

Кому нужны микрокапсулы

Микрокапсулы очень нужны клиентам с очень истончёнными, «убитыми», сожжёнными волосами, у которых очень жидкие волосы, волосы подверженные лёгкому выпадению.
С сильной «линькой» не наращивают вообще (ну мы не наращиваем, не знаю, как у остальных, конечно). Также микрокапсулы идеально подходят для густоты волос, их вообще не найти, не увидеть, не нащупать практически. Коррекция происходит с микрокапсулами ровно так же, как со стандартными и уход за ними точь-в-точь такой же.

Единственный минус в микрокапсулах — это более долгое снятие из-за большого количества капсул, пожалуй, все.

Комбинированное наращивание волос — идеальный вариант для всех

Комбинированное наращивание волос — идеальный вариант, в общем, его мы практически всегда и используем это, комбинируем стандартные и микрокапсулы в одном наращивании. Всю затылочную зону наращиваем стандартными, всю височно-боковую зону, наращиваем микро, так как височная зона чаще всего с более тонкими волосами и меньшей густотой. Плюс с микрокапсулами на височно-боковых зонах можно вообще, как угодно собирать волосы. На мой взгляд, вариант комбинированного наращивания волос, самый идеальный. Количество капсул всегда подбирается индивидуально исходя из густоты волос, стрижки, состояния волос, желания клиента и усмотрения профессионального взгляда мастера по наращиванию волос.

Для нас очень важно сделать красиво, угодить клиенту, но при этом не перестараться с количеством капсул, дабы сохранить ваши волосы не перегрузив их. Почему кому-то коррекция капсульного наращивания необходима раз в два месяца, а кому-то раз в три месяца? Если волосы в хорошем и нормальном состоянии до наращивания, с длиной от каре и ниже плеч, со средней густотой — то коррекция раз в 3 месяца вполне достаточно, а при хорошем домашнем уходе и раз в 3.5 месяца. Если волосы очень истончены, волосы не очень густые, короткая стрижка до наращивания волос, очень быстрый рост собственных волос — то тут раз в 2 месяца коррекция, чтобы избежать запутывания (колтунов).

_{Пример комбинированного наращивания волос 🙂}

Мастер всегда подберёт именно тот вариант наращивания волос, густоту и длину, которые будут идеальны для вас. В студии «Грива» всегда имеются все тона и длины волос для наращивания. Вы записываетесь, приезжаете, обсуждаете и сразу наращиваете. Если возникают вопросы по уходу дома или какие-то непредвиденные ситуации с волосами, вы нам звоните/пишите, приходите и мы всё рассказываем и решаем.

Выдаём на волосы и работу гарантийный талон. Несём полную ответственность за свою работу.

P.S. На всякий случай: видео про ленточное и капсульное наращивание

Я думаю, что видео про ленточное и капсульное наращивание, в данной статье будет не лишним. Но уверена, что про капсульное или микрокапсульное наращивание мы снимем отдельное видео, совсем скоро. Приятного просмотра.

Студия «Грива».
Кристина Храмойкина.

Нано-наращивание аппаратным способом – Иванна Фарисей

Быстро и идеально – это сочетание встречается нечасто. Профессиональный подход предусматривает такой метод, при котором процедура удлинения волос будет выполняться в оптимальные временные сроки, клиентка сможет без сложностей ухаживать за новой и собственной шевелюрой, а также нечасто посещать парикмахера для коррекции. Узнай, что представляет собой нано-наращивание аппаратным способом Nano Laserbeamer в Лондоне.

Как думаешь, какой результат получится, если использовать разработку, в которой принимали участие трихологи, стилисты, технологи? Комплексная работа специалистов дала возможность получить аппарат, способный за счёт действия лазера бережно и быстро присоединять донорский материал к собственным прядям.

Используются волосы типа «премиум», которые поступают в работу после лабораторного исследования и присвоенных сертификатов качества. К ним присоединяются капсулы 3-х размеров и типов: полностью гладкие, кудрявые или аккуратно окрашенные. Лазер работает в щадящем температурном режиме, исключая появление вреда для волос. Полимерный состав максимально приближен по характеристикам к живым волосам, поэтому исключается несовместимость и термический перегрев. И самое главное: наращивание не требует частой коррекции!

Преимущества метода Nano Laserbeamer.

1. Изначально высокое качество донорского материала. После наращивания они выглядят естественно и привлекательно.

2. Быстрота фиксации прядей. За один раз мастер с помощью прибора крепит 5 капсул, поэтому весь процесс занимает до 1 часа.

3. Оптимальный выбор теплового воздействия, используемого для разогрева капсул и надёжного крепления не вызывает нарушения структуры собственных волос.

4. Отменный результат: капсулы располагаются на близком расстоянии к корням волос. В местах присоединения прядей образуются плоские участки, которые формируют крепкую фиксацию и невидимы со стороны.

5. Вам не нужно ограничивать себя во времяпрепровождении: можете заниматься спортом, посещать бассейн, танцевать, ходить в тренажёрный зал. Намоченные дождём волосы не пострадают.

6. Наращивание Nano Laserbeamer позволяет иметь любые причёски: с распущенными, приподнятыми, заплетенными, закрученными волосами.

7. Быстрота процесса уникальна, когда хочется изменить внешний вид после работы, заскочить в салон на час-полтора и выйти в совершенном ином образе, удивить своего любимого роскошным блеском и замечательной длиной шевелюры.

8. Возможность увеличить густоту волос на темени и в области висков.

9. Допускается работа с тонкими и ломкими волосами: миниатюрные пряди не способствуют выпадению собственной шевелюры.

10. Очень важным моментом для дам является длительность ношения волос. А она ─ довольно приличная, целых полгода. Ни один из методов наращивания волос не обеспечивает столь продолжительный период времени без коррекции.

Остались вопросы? Хотите изменить свой образ с помощью метода Nano Laserbeamer или другого продуктивного способа? Иванна Фарисей готова поработать с вашей шевелюрой и предложить капсульную технологию наращивания.

Наращивание волос, нарастить волосы в СПб

Почему наращивание волос в СПб  делают у меня?

Я сама наращиваю волосы и пользуюсь этой услугой, занимаюсь обучением и знаю о ней всё. В своем ремесле я противник использования шаблонных техник и салонных подходов.

Бесплатная и подробная консультация;

Огромное портфолио сложных работ;

Волосы в наличии;

Авторские техники и нанокапсулы;

Индивидуальная студия;

Изготовление капсул под клиента;

Без боли и вреда для родных волос;

Факт наращивания будет незаметен;

Работа будет смотреться естественно;

Гарантия на работу и люкс волосы;

Какие проблемы решает моё наращивание волос?

Благодаря постоянной практике и отточенным до идеала авторским техникам, мое наращивание волос позволяет решать конкретные проблемы моих клиентов.

Удобно и практично — забудьте про укладки с утра;

Возможность загущения — установка для объема;

Возможность нарастить челку, загустить и удлинить височную зону;

Возможность нарастить на короткие от 3 сантиметров;

Исправить неудачное окрашивание или стрижку под каре;

Быстро вернуть длинные волосы после болезни;

Что может дать наращивание волос?

По результатам опроса, который я проводила среди своих постоянных клиенток в 2019-2020 году на этом сайте, 72% отметили “длинные волосы = красиво”, и 28% отмечали “придаёт уверенности в себе”.

Всего за 1 посещение получите потрясающий обновленный образ;

Повышение уверенности в себе;

Умножение комплиментов и внимания;

Уверенность в незаметности капсул и перехода;

Уверенность в безопасности и безвредности;

Ваши родные волосы будут расти!

Своё видение наращивания волос

При наращивании волос я использую свои авторские микрокапсулы и схемы распределения прядей на голове. Это необходимо для комфортного, безболезненного и незаметного ношения волоса после процедуры. Минимальная нагрузка авторских капсул с использованием в работе специального био-кератина не наносит вред родным прядям при установке, ношении и их снятии. Мои клиенты действительно отращивают свои родные волосы и не подсаживаются на бесконечную процедуру под названием наращивание волос.
Я более НЕ применяю в работе холодное клеевое и ультразвуковые наращивания. Сами процессы этих процедур и периоды ношения не соответствуют моим стандартам безопасности для родных прядей клиента. Запись на ленточное наращивание волос не ведется.

Что я не делаю при наращивании волос?

Иногда достаточно написать о том, что НЕ делаешь в своей работе. В отличии от обычных салонов и студий, где мастера работают на том “что дали”, у себя я контролирую все процессы и качество материалов самостоятельно.

Не использую низкосортные волосы в работе;

Не использую стандартный кератин;

Не использую заводские большие капсулы;

Не работаю салонными техниками крепления;

Не использую шаблонные техники распределения;

Не наношу перевесом вреда родным прядям;

Не навязываю услуги.

Нанокапсулы: их преимущества и использование

Индустрия красоты постоянно развивается. Казалось бы, что микрокапсульное наращивание усовершенствовать уже невозможно, но обнаружилась новая технология, которая позволяет добиться еще более естественного результата без вреда для натуральных волос.

Особенности нанокапсул и работы с ними

Новая разработка трихологов, технологов и стилистов привела к тому была направлена на то, чтобы процедура по удлинению волос выполнялась в короткие сроки, не обременяла частыми походами в салон и каким-то сложным уходом. Естественно, при разработке нанокапсул специалисты в первую очередь думали о здоровье волос и их состоянии.

В результате такой работы размер капсул стал еще меньше, поэтому уменьшается и давление на прикорневую область. Для этой процедуры используются волосы класса премиум. Донорский материал проходит обработку, после чего ему присуждают знак качества. Волосы сортируют на несколько типов в зависимости от структуры, волнистости, цвета и других параметров.

Во время наращивания мастер используется специальный аппарат, который работает в щадящем температурном режиме — всего 90°C. Полимерный состав, благодаря которому происходит фиксация, приближен к натуральному материалу, поэтому перегрев или несовместимость исключаются.

Преимущества нанокапсул

У нанонаращивания есть ряд преимуществ, благодаря которым процедура приобретает широкую популярность:

• безопасность для натуральных волос и прикорневой области;
• скорость и безболезненность метода;
• использование щадящего температурного режима, который исключает даже локальный перегрев;
• комфортное ношение нанокапсул, поскольку даже при прощупывании они почти не чувствуются;
• после наращивания материал становится незаметным, поэтому можно без опасений делать любые прически;
• маленький размер материала позволяет использовать его локально для решения каких-то проблем, например, при алопеции;
• отсутствие повреждений даже в месте крепления;
• процедура подходит даже девушкам с тонкими или ослабленными волосами;
• используемый термостойкий материал долго носится и надежно фиксируется, поэтому ограничивать себя в посещении сауны, бани или бассейна не придется.

Уход за волосами после наращивания       

Соблюдение простых правил по уходу за волосами позволит отсрочить следующий поход к мастеру и в полной мере сохранить наращиваемый материал. После нанонаращивания коррекция выполняется только через 3–4 месяца.

В этот период рекомендуется пользоваться специальной расческой, при этом наличие натуральной щетины положительно скажется на состоянии локонов. Все уходовые средства, которые наносятся на прикорневую зону, подбираются профильные (для нарощенных волос). Если соблюдать эти простые правила, то риск преждевременного повреждения нанокапсул сводится к минимуму.

 

Голосуй! Votes: 4938

Нанокапсулы: их преимущества и использование

Королевство волос АНАСТАСИИ ПОГУЛЯЕВОЙ

Один из способов кардинально изменить свой образ – нарастить волосы. Ведь всего за несколько часов из скромной девушки вы превратитесь в яркую длинноволосую красавицу. Мы решили побеседовать с гуру в своем деле – Анастасией Погуляевой.

Анастасия, вы занимаетесь наращиванием волос. Как вы пришли к этому?

– Пришла к этому пять лет назад. Я постоянно занималась поиском мастера по наращиванию волос. Тогда я поняла, что у нас нет мастеров, которые делали бы наращивание так, чтобы его никто не видел, чтобы было натурально и красиво. Наращивать стремится кто угодно, пройдя даже самый простой базовый курс, а делать это на «отлично» может, увы, не каждый. Мне нравится получать эмоции от моей работы, видеть восхищенные взгляды и принимать благодарность клиентов. Я ежедневно развиваюсь, прохожу как онлайн, так и обычные семинары по всему миру.

– Существует большое количество технологий наращивания волос, некоторые из них появились совсем недавно, например, нанокапсулы – одна из самых современных и продвинутых методик. Расскажите, в чем их преимущество.

– Способов наращивания волос много, и все они по-своему хороши.

Их преимущество в незаметности, долгой носке и, конечно же, в полной свободе действий клиентов. С нанокапсулами нет ограничений: можно наносить бальзамы и маски, не боясь потерять капсулы. Также еще один мой фаворит – это холодное бионаращивание. И именно эти два метода я привезла из России от топовых мастеров к нам в студию «Королевство волос by Pogulyaeva A.S.».

– А если говорить о натуральности, нанокапсулы сильно заметны?

– Нанотехнологии сейчас очень продвинуты, и название «нанокапсулы» говорит само за себя, они очень-очень маленькие и комфортные в носке, а качественный нанокератин имеет 12 оттенков, каждый из которых индивидуально подбирается под корни волос, делая их максимально незаметными на сегодняшний день.

– Вы основали студию «Королевство волос by Pogulyaeva A.S.», как вы этого достигли?

– Изначально, пройдя обучение, я применяла свой опыт и знания в этой области на своих друзьях и знакомых, они же и стали живой рекламой, рекомендуя меня. Количество новых клиентов росло с каждым днем, передо мной встал вопрос: как обеспечить им не только качественную процедуру наращивания волос, но и сервис. Так я основала свою первую студию, где каждая женщина после моих процедур может почувствовать себя неотразимой и уверенной в себе. Выходя из моей студии окрыленными в новом образе, мои клиентки несут красоту в мир.

Нанокапсулы – это ноу-хау, которое пришло к нам из России.

– Делитесь ли вы своим опытом?

– Я с большим удовольствием делюсь своими знаниями: провожу обучение и веду девочек, в дальнейшем давая им профессию топ-мастера.

Чем больше красивых девушек на Земле, тем лучше она будет. Ведь красота спасет мир!

@narashivanie_volos_by_tigra

Наращивание волос нанокапсулы: 1000 грн

1. Все услуги
2. Услуги красоты и здоровья
   1. Курьерские услуги
   2. Домашний мастер
   3. Клининговые услуги
   4. Логистические и складские услуги
   5. Мебельные работы
   6. Ремонт техники
   7. Отделочные работы
   8. Строительные работы
   9. Бытовые услуги
   10. Фото- и видео- услуги
   11. Дизайн
   12. Работа в Интернете
   13. Реклама и маркетинг
   14. Разработка сайтов и приложений
   15. Услуги для животных
   16. Бюро переводов
   17. Организация праздников
   18. Услуги репетиторов
   19. Услуги тренеров
   20. Деловые услуги
   21. Ремонт авто
   22. Услуги для Prom. ua
3. Парикмахерские услуги
   1. Массаж
   2. Уход за ногтями
   3. Косметология
   4. Уход за ресницами
   5. Уход за бровями
   6. Депиляция
   7. Услуги визажиста-стилиста
   8. Макияж
   9. Психолог
   10. Диетолог
   11. Другой уход за собой
4. Наращивание волос
   1. Стрижка
   2. Окрашивание волос
   3. Укладка волос
   4. Химическая завивка
   5. Полировка волос
   6. Выпрямление и ламинирование волос
   7. Другие парикмахерские услуги

Привет! Меня зовут Таня. Как вы уже поняли, я – мастер по наращиванию волос. ⁣⁣⠀ Моя цель – дарить вам красоту, ухоженность и уверенность в себе.⁣⁣⠀ В каждую свою работу я вкладываю частичку себя, кайфую от процесса, ведь счастливые глаза моего клиента являются для меня наивысшей благодарностью за мой труд😌❤️⁣⁣⠀ ⁣⁣⠀ Поэтому, милые, прекрасные девушки, я хочу вас пригласить к себе на процедуру наращивания волос!⁣⁣⠀ Я работаю в скрытой технике крепления, что делает наращивание максимально незаметным и невесомым. В моих интересах сохранить здоровье ваших волос и сделать красивую, качественную работу.⁣⁣⠀ ⁣⁣⠀ А на консультации мы подберем тебе нужный цвет, длину, обьем и нарастим тебе волосы о которых ты мечтала😍✨ Консультация абсолютно бесплатна!)⁣⁣⠀ Также ко мне можно записаться на укладки и несложные стрижки.⁣⁣⠀ Я работаю на дому и в салоне, как Вам будет удобно!) ПРАЙС НА НАРАЩИВАНИЕ НА ДОМУ: Наращивание 1000грн – до 150грамм 1500грн – до 200 грамм Коррекция +300 грн Снятие – 300 грн ( распутывание колтунов обговаривается отдельно) ПРАЙС НА НАРАЩИВАНИЕ В САЛОНЕ: Наращивание 1500грн – до 100грамм 1800грн – до 150грамм 2200грн – до 200грамм Коррекция 1800грн – до 100 грамм 2100грн – до 150грамм 2500 – до 200 грамм Снятие – 500грн В стоимость наращивания волос В САЛОНЕ входит мойка головы. По времени наращивание занимает около 4-5 часов в зависимости от обьема. Все детали в Вайбер или по телефону😊

Похожие объявления

• Лейла Б.

  Наращивание волос

  800 грн- наращивание (до 100 гр) 200 грн- капсулирование (до 100 гр) 300 грн- снятие (колтуны- от 100 грн) 1300 грн- коррекция (до 100 гр) Приглашаю Вас на наращивание, коррекцию, загущение волос капсулами нано, микро и стандарт. Процедура наращивания занимает около 3 часа Если нет волос-помогу п…

• Александра Г.

  Микрокапсульное наращивание волос

  Милые девушки предоставляю услуги по наращиванию волос. Наращивание -1100 грн (любой бьем) Снятие -500 грн (с распутыванием колтунов) Подбор арлос под структуру ваших волос. Работаю со словянскими волосами Консультация в вайбере .вотсапе а так же личная встреча. Пишите.Буду рада:)

• Анна Г.

Плюсы и минусы наращивания волос с нано-кольцом

Наращивание волос с помощью нано-кольца – фантастический метод, особенно для тех, у кого более тонкие волосы.

Но что такое наращивание волос с помощью нано-кольца, чем они отличаются от других методов наращивания волос и каковы их плюсы и минусы?

Процесс наращивания волос с нанокольцом включает в себя размещение отдельных прядей на небольших участках волос и закрепление их металлическим нанокольцом. Само нанокольцо (как следует из названия) крошечное и на 90% меньше традиционного микрокольца, поэтому оно часто больше подходит для тех, у кого более тонкие волосы.

Насколько велико наращивание волос с нано-кольцом?

Основным преимуществом наращивания волос с нанокольцом является то, что его связи невероятно малы. На самом деле они примерно на 90% меньше микрокольца, в результате чего они имеют одну из самых маленьких доступных облигаций.

Они также доступны в различных цветах, что упрощает сопоставление их с корневым цветом, который они также фиксируют.

При профессиональном применении, наращивание волос с нанокольцом будет чрезвычайно безопасным благодаря методу прядь за прядью.Чтобы правильно закрепить кольца, нужно собрать нужное количество натуральных волос и поместить их в кольцо. Кольца будут идеально закреплены, если натуральные волосы не будут чрезмерно жирными или мягкими.

Наращивание волос с нано-кольцом

должно длиться при регулярном уходе от трех до четырех месяцев, что намного дольше, чем другие методы наращивания волос.

Наращивание волос с нано-кольцом для тонких волос

Часто те, у кого более тонкие волосы, в прошлом, возможно, изо всех сил пытались найти правильное наращивание волос и метод, соответствующий их типу волос.

Другие методы наращивания волос, такие как утки, часто просвечивают на тонких волосах, делая их видимыми для других, что ваш клиент сделал наращивание волос. Поскольку нанокольца такие маленькие, их намного легче скрыть, даже если волосы тонкие и редкие.

Вредны ли наращивание волос с нано-кольцом?

Наращивание волос с нано-кольцами не повреждает естественные волосы, если их устанавливает обученный профессионал. На самом деле, это один из наименее повреждающих методов наращивания волос.

Они не требуют тепла или клея для их закрепления, а это значит, что они будут мягче и мягче на волосах. Когда пришло время их удалить, они не потребуют стандартного средства для удаления раствора на спиртовой или ацетоновой основе, в отличие от метода наращивания волос с предварительной связкой.

Как и в случае любого салонного наращивания волос, мы не можем не подчеркнуть важность того, чтобы наращивание волос, поддержание и удаление волос производилось авторитетным, обученным профессионалом.

Как долго длится наращивание волос с нано-кольцом?

Расширение кольца

Nano должно длиться от трех до четырех месяцев с регулярными встречами на техническое обслуживание.

Они требуют большего количества процедур по уходу, чем другие методы наращивания волос, потому что нанокольца такие крошечные. В идеале следует записываться на прием на техническое обслуживание каждые три-четыре недели, чтобы поддерживать их в наилучшем состоянии и продлиться как можно дольше.

Традиционные приемы по уходу за наращиванием волос, такие как предварительно склеенные и микрошарики, обычно заказываются каждые четыре-шесть недель.

Нано-кольцо для наращивания волос, проскальзывание

Из-за размера нано-колец могут быть случаи, когда некоторые из них соскальзывают и даже теряются между приемами по уходу за волосами, что совершенно нормально и вполне ожидаемо.Некоторые более предрасположены к этому, чем другие. Как мы уже упоминали ранее, если волосы, на которые накладывается наращивание, чрезмерно жирные или мягкие, то это может случиться и чаще. Так что не огорчайтесь, если после подходящей встречи вы обнаружите, что кто-то оторвался.

Наращивание волос с кольцом

Nano – отличное изобретение, но, увы, как и большинство вещей в жизни, подходят не всем. Все зависит от потребностей и требований человека, поэтому обязательно обсудите со своим парикмахером, какой метод наращивания волос лучше всего подходит вам и вашим потребностям.

Если вы хотите узнать больше о наращивании волос с помощью нано-колец или получить совет по всем вопросам, связанным с наращиванием волос, обязательно загляните на нашу страницу советов по наращиванию волос. Он полон интересных и полезных статей, посвященных большинству запросов по наращиванию волос.

Если вы хотите получить дополнительную информацию или задать вопрос о наших накладках для волос и аксессуарах, свяжитесь с нами через нашу страницу в Facebook и не забудьте подписаться на нас в Instagram.

Каковы преимущества и недостатки наращивания волос с нано-кольцом и нано-кончиком

Нано-кольцо для наращивания волос, иногда называемое просто «нано-кольцом», является недавней разработкой в ​​технике наращивания волос. Но, боже, они быстро взлетели! Метод был разработан с целью найти самые незаметные способы наращивания волос. Нано-кольца (например, микрокольца) сделаны из меди. Существенное отличие состоит в том, что нано-кольца на 90% меньше обычных колец для наращивания волос.Обычно они размером с острие шариковой ручки.

Пряди для наращивания волос, которые прикрепляются с помощью нано-колец, известны как волосы с нано-кончиком. Эти волосы имеют прочный кератиновый кончик, который удерживает тонкую металлическую петлю, которая сжимается, образуя прочный кончик, который вставляется в кольцо перед зажимом плоскогубцами. Альтернативный материал наконечника – пластиковый наконечник. Компания Secret Hair Extensions UK предложила в своем ассортименте оба материала для кончиков волос. Тем не менее, конструкция металлического наконечника оказалась более популярной, поскольку он значительно упрощает повторное нанесение прядей для наращивания волос во время профилактических осмотров, чем повторная установка пластикового наконечника в новое нано-кольцо.

Чтобы сделать эту форму укладки менее заметной, волосы укладываются за прядь собственных волос клиента перед зажимом для фиксации. При нанесении не используется тепло или клей. Необходимое оборудование: волосы для наращивания наноразмеров, нанокольца, меньший инструмент для вытягивания петель с нанокольцом и меньший набор плоскогубцев. Наши плоскогубцы для наращивания волос с острыми кончиками облегчают точный зажим крошечного нано-кольца!

Следует проявлять осторожность с удлинителями нанокольца, чтобы не подвергать кератиновую связку, фиксирующую нанонаконечник, теплом или маслом, поскольку они могут испортиться или даже расплавиться.Как установку, так и удаление – как и все другие методы наращивания волос – должен выполнять обученный профессионал.

Примерно через 6-8 недель кольца следует снять, а удлинители сдвинуть вверх, чтобы избежать обнаружения или напряжения опорной пряди волос клиента. Нано-кольца могут быть либо из меди без футеровки, которые будут зажимать наиболее плоско, либо из медных нанокольцов с силиконовой футеровкой, чтобы избежать скольжения и повреждения волос клиентов.

Преимущества нано-колец и наращивания волос с нано-кончиком
Преимущества наращивания волос с нано-кончиком и наращивания с нано-кольцом заключаются в том, что они настолько малы и не поддаются обнаружению.Во время установки не используются тепло или химические вещества. Кольца с силиконовой подкладкой помогут предотвратить повреждение волос.

Недостатки нано-колец и наращивания волос с нано-кончиком
Недостатками наращивания волос с нано-кольцом является тот факт, что меньшее количество волос клиента можно протянуть через меньшее нано-кольцо, что означает, что при нанесении необходимо соблюдать осторожность, чтобы использовать самые толстые. возможна прядь из волос клиента, чтобы поддерживать 0,8 г или 1 г наращиваемых волос.Очевидно, что мокрые волосы становятся тяжелее.

Кроме того, поскольку человеческая голова естественным образом теряет до 100 волос в день, даже до того, как вы начнете наращивать волосы, необходимо посещать профилактические приемы каждые шесть недель. За это время меньше натуральных волос прикрепляется к коже головы (в естественном цикле выпадения), поэтому значительно меньше волос клиентов доступно для поддержки нано-прядей для наращивания волос, прикрепленных к каждой секции.

Еще один недостаток наноколец перед микрокольцами – обнаженная наносвязь.При наращивании волос с микрокольцом кератиновый кончик находится внутри кольца. Это обеспечивает некоторую форму защиты от натуральных масел, шампуней и кондиционеров для кожи головы, которые могут смягчить связь.

При наращивании волос с нано-кольцом эта связь находится снаружи (под) нано-кольца. Поэтому он подвержен воздействию продуктов. Они также уязвимы для клиентов, которые ошибочно нагревают их во время выпрямления или сушки феном.

Связанные

Нагруженные паклитакселом плюронические нанокапсулы диоксида кремния F127 / P123 с поверхностно-конъюгированным rhTRAIL для направленной терапии рака

Был разработан и синтезирован новый противораковый препарат PFPSNT, полимерные нанокапсулы диоксида кремния F127 / P123, нагруженные паклитакселом (PTX), конъюгированные с TRAIL (лиганд, индуцирующий апоптоз, связанный с фактором некроза опухоли (TNF)).Просвечивающая электронная микроскопия (ТЕМ), динамическое рассеяние света (DLS), поглощение в УФ-видимом диапазоне и анализ размера частиц показали, что синтезированный PFPSNT представляет собой сферическую частицу размером 24 нм с превосходной коллоидной стабильностью. Эффективность загрузки лекарственного средства (DL%) и коэффициент инкапсуляции (ER%) составляли 0,39% и 26,5%, а его совокупный профиль высвобождения был линейным. Исследование in vitro показало, что PFPSNT обладает выраженной цитотоксической и апоптотической активностью в отношении клеток HepG2 (линия клеток рака печени) и CaSki (линия клеток шейки матки) со значениями IC ₅₀ , равными 921.07 нг мл ^-1 и 236,24 нг мл ^-1 соответственно. Противоопухолевую эффективность PFPSNT оценивали с использованием модели мышей BALB / c nu / nu с ксенотрансплантатом HepG2. In vivo исследование показало, что PFPSNT заметно ингибирует гепатоцеллюлярную карциному HepG2, и его противоопухолевая эффективность была выше, чем у нанокапсул кремнезема TRAIL, PTX или PTX / F127 / P123. Наши исследования предоставили новую стратегию синтеза противоопухолевых нанопрепаратов с множеством функций и продемонстрировали, что PFPSNT является очень эффективным противоопухолевым препаратом.Этот новый нанопрепарат должен стать многообещающим лекарством для таргетной терапии рака для лечения сложных видов рака.

Эта статья в открытом доступе

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуй еще раз?

Обогащающие продукты с капсулами | Human World

Йохен Вайс, профессор пищевых наук в Университете Хоэнхайма в Германии, использует нанотехнологии для обогащения пищевых продуктов питательными веществами.

Йохен Вайс: Во многих системах, которые нас интересуют, вы пытаетесь добавить омега-3 жирные кислоты – они выполняют множество полезных функций с точки зрения здоровья. Очень сложно включить их в систему питания и убедиться, что они по-прежнему активны, а еда по-прежнему приятна на вкус.

Лаборатория

Вайс разработала способ заключать жирные кислоты омега-3 в капсулы, которые примерно в 2000 раз меньше ширины человеческого волоса.

Йохен Вайс: Если вы думаете об этих системах как о таблетках, это будет очень неправильный масштаб вещей.Мы пытаемся поместить эти соединения в очень и очень крошечные системы. Они такие крошечные, что после инкапсуляции вы даже не сможете их увидеть.

Наноразмерные капсулы безвкусны и сохраняют активные ингредиенты омега-3 жирных кислот.

Jochen Weiss: Их можно добавлять в самые разные продукты. Вы можете добавить их в напитки. Цель инкапсуляции – сделать их совместимыми с очень широким спектром пищевых продуктов.

Сегодня благодарим Национальную исследовательскую инициативу Государственной исследовательской, образовательной и консультативной службы Министерства сельского хозяйства США и Корнельский университет.

Благодарим:
Йохен Вайс
Университет Хоэнхайма
Германия

Хорхе Салазар

Просмотр статей

Об авторе:

За годы работы с EarthSky Хорхе Салазар провел тысячи подробных интервью с учеными.Он много знает о таких разнообразных вещах, как нанотехнологии, экосистемное управление, изменение климата, глобальное здоровье, международные экологические договоры, астрофизика и космология, а также экологическая безопасность. В настоящее время Хорхе работает техническим писателем / редактором в Техасском центре передовых вычислений, который разрабатывает и внедряет мощные передовые вычислительные технологии и инновационные программные решения для научных исследователей.

Защита нейронов для оптимизации кохлеарного имплантата

Int J Nanomedicine.2012; 7: 2449–2464.

Hartwig Meyer

¹ Отделение отоларингологии, Ганноверская медицинская школа, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

² Институт фармакологии, токсикологии и фармации, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

Тимо Стёвер

¹ Кафедра отоларингологии, Ганноверская медицинская школа, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

³ Кафедра отоларингологии, Университет Иоганна Вольфганга Гете, Франкфурт, Германия

Флориан Фуше 900 4952

Laboratoire d’Ingénierie de la Vectorisation Particulaire, University of Angers, Angers, France

Guillaume Bastiat

⁴ Laboratoire d’Ingénierie de la Vectorisation Particulaire, University of Angers, Angers, France

Patrick Saulnier

Laboratoire d’Ingénierie de la Vector isation Particulaire, Университет Анжера, Франция

Wolfgang Bäumer

² Институт фармакологии, токсикологии и фармации, Университет ветеринарной медицины, Ганновер, Германия

Thomas Lenarz

¹ Отделение отоларингологии, Ганновер Медицинская школа, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

Верена Шепер

¹ Отделение отоларингологии, Ганноверская медицинская школа, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

¹ Отделение отоларингологии, Ганноверская медицинская школа , Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

² Институт фармакологии, токсикологии и фармации, Университет ветеринарной медицины Ганновера, Ганновер, Германия

³ Кафедра отоларингологии, Университет Иоганна Вольфганга Гете, Франкфурт, Германия

^{4 90 095 Laboratoire d’Ingénierie de la Vectorisation Particulaire, Университет Анжера, Анже, Франция}

Для корреспонденции: Верена Шепер, Отделение отоларингологии, Carl-Neuberg-Str.1, Hannover Medical, School, 30625, Ганновер, Германия, тел. +49 511 532 4369, факс: +49 511 532 3293, электронная почта: [email protected] Авторские права © 2012 Meyer et al, издатель и лицензиат Dove Medical Press Ltd.

Это статья в открытом доступе, разрешающая неограниченное некоммерческое использование при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Дополнительные материалы

Рисунок S1: При частотно-зависимых измерениях AABR в день 0 у всех животных был обнаружен нормальный порог слуха (синяя и розовая линии; среднее значение ± стандартное отклонение).

Примечания: Результаты измерений на 7 и 21 день показаны красной линией. После оглушения ни у одного из животных не сохранился остаточный слух. Порог слышимости всех животных составлял 90 дБ SPL или выше на 7 день и не восстанавливался до последнего измерения на 21 день.

Сокращения: AABR, акустически вызванная слуховая реакция ствола мозга; SD, стандартное отклонение.

GUID: A7D65FB2-F298-40A8-920A-16918A9137B4

Таблица S1

Значения жизнеспособности дендритных клеток после инкубации с тестируемыми соединениями и стимуляции LPS; n = 3 на вещество и концентрацию

9024 90ITC LN242 F0247 0,784493 0,1 мкмоль Реферат

Объектив

Нейросенсорная тугоухость приводит к прогрессирующей дегенерации спиральных ганглиозных клеток (SGC). Наряду с послеоперационным ростом фиброзной ткани, который необходимо подавлять для обеспечения тесного взаимодействия нерв-электрод, плотность здорового SGC является одним из факторов, влияющих на эффективность кохлеарных имплантатов (CI), выбор лечения для пораженных пациентов.Ролипрам, ингибитор фосфодиэстеразы-4, доказал нейропротекторное и противовоспалительное действие, а также может уменьшить дегенерацию SGC и фиброз, но он должен проходить через клеточную мембрану, чтобы быть биологически активным.

Методы

Липидные нанокапсулы (LNC) могут использоваться в качестве биоразлагаемых носителей лекарств для повышения эффективности традиционных методов нанесения. Мы исследовали биологические эффекты ролипрама и инкапсулированного в ядре LNC ролипрама на SGC и продукцию фактора некроза опухоли-α (TNF-α) дендритными клетками (DC) in vitro, а также на выживаемость SGC у морских свинок с системной глухотой in vivo.

Результаты

Наши результаты доказывают, что ролипрам не оказывает положительного воздействия на культивированный SGC. Включение ролипрама в LNC значительно увеличило выживаемость SGC. В исследовании DC ролипрам значительно ингибировал TNF-α в зависимости от дозы. Нагруженные ролипрамом LNC также обеспечивали значительное ингибирование цитокинов. Данные in vivo не подтверждают результаты in vitro.

Заключение

Транспортируя ролипрам в цитоплазму SGC, LNC активировал нейропротекторный эффект ролипрама in vitro, но не in vivo.Это может быть связано с разбавлением исследуемых веществ перилимфой или недостаточным высвобождением ролипрама из-за различий в условиях in vivo и in vitro. Тем не менее, основываясь на результатах in vitro, доказывающих значительно повышенную выживаемость нейронов при использовании LNC-ролипрама по сравнению с чистым ролипрамом и применением чистого LNC, мы считаем, что комбинация ролипрама и LNC потенциально может снизить дегенерацию нейронов и фиброз после имплантации CI. Мы пришли к выводу, что ролипрам является многообещающим препаратом, который можно использовать в терапии внутреннего уха, и что LNC потенциально могут использоваться в качестве системы доставки лекарств во внутреннее ухо.Дальнейшие эксперименты с измененными условиями могут выявить биологические эффекты in vivo.

Ключевые слова: ролипрам, наночастица, потеря слуха, спиральные ганглиозные клетки, внутреннее ухо

В промышленно развитых странах нейросенсорная потеря слуха является распространенным заболеванием и обычно вызывается первичной потерей слуховых волосковых клеток, которые являются внутренним ухом. сенсорные клетки. Помимо наследственных факторов, приобретенные причины, такие как повышенное шумовое воздействие или применение ототоксичных препаратов, играют решающую роль в развитии нейросенсорной тугоухости. ^{1 , 2}

Эффективное лечение поврежденных волосковых клеток или регенерации уже дегенерированных сенсорных клеток внутреннего уха у людей пока невозможно. Вместо этого используются протезные формы терапии для восстановления функции поврежденного органа. Для лечения пациентов с тяжелыми нарушениями слуха и глухоты применяется имплантация электронных протезов внутреннего уха, называемых кохлеарными имплантатами. Глухие пациенты, которым установили кохлеарные имплантаты, обретают обновленное чувство слуха и имеют больше возможностей общаться с помощью звуковой речи. ³ Это приводит к улучшению социальной интеграции и значительному повышению качества жизни пациента.

В кохлеарных имплантатах используется многоканальный электрод, который вставляется в барабанную лестницу для восстановления функции отсутствующих волосковых клеток. Благодаря формированию и передаче потенциалов действия спиральных ганглиозных клеток (SGC) возможно создание искусственно созданного звукового впечатления. Однако после первичной потери волосковых клеток наблюдается прогрессирующее снижение плотности SGC. ⁴ Это вызвано отсутствием электрической и нейротрофической стимуляции, а также других форм стимуляции. ^{5 , 6} Чтобы добиться лучшего распознавания речи с помощью кохлеарных имплантатов, необходимо обеспечить высокое количество SGC. ⁶

Большое количество нейротрофических факторов оказывает защитное действие на SGC после первичной потери волосковых клеток. Системное лечение заболеваний внутреннего уха осложняется наличием гемато-улиткового барьера.Адекватные уровни лекарств достигаются только при применении очень высоких доз лекарств, что приводит к повышенному риску побочных эффектов. Посредством местного применения нейротрофических факторов прогрессирующая дегенерация SGC может быть уменьшена. Важными представителями этой группы веществ являются нейротрофический фактор головного мозга (BDNF), нейротрофический фактор линии глиальных клеток и фактор роста фибробластов. ^{7 , 8} Тем не менее, непрерывная терапия необходима, потому что предыдущие исследования выявили прогрессирующее снижение SGC после прекращения терапевтического применения BDNF. ⁹ Первые попытки создания систем непрерывной доставки лекарств были реализованы с использованием осмотических насосов. Эти насосы позволяли непрерывно вводить во внутреннее ухо в течение нескольких недель. Из-за ограничений по времени доставки и необходимости замены помпы, которая позволила бы увеличить продолжительность применения, этот подход не применим для терапевтических применений на людях.

Другой вариант лечения хронических нейротрофов – генная терапия. Путем введения генных последовательностей нейротрофических факторов в клеточное ядро ​​трансфицированные клетки могут обеспечивать устойчивую эндогенную продукцию нейрозащитных веществ. ^{10 , 11} Посредством вирусного переноса гена эти факторы уже были реализованы во внутреннем ухе, хотя экспрессия введенных последовательностей не продемонстрировала клеточно-специфический перенос гена. ^{12 , 13} Кроме того, была достигнута только временная экспрессия около 3 недель, что нежелательно с точки зрения долгосрочной терапии. ¹⁴ Кроме того, использование вирусных векторов имеет значительные недостатки, такие как потенциальная инфекция и способность запускать воспалительные или иммунологические процессы. ¹⁵

В дополнение к вирусным векторам искусственно созданные наночастицы предлагают многообещающую способность транспортировать лекарства и последовательности генов с возможностью высвобождения груза в течение длительного периода времени. Сегодня можно собирать множество промышленных наночастиц, которые состоят из органических и неорганических частей. В дополнение к их обычному использованию в промышленности, наночастицы можно найти в широком спектре применений в здравоохранении и медицине. ¹⁶ Преимущества наночастиц заключаются в невозможности инфицирования и производстве биоразлагаемых каркасов, для которых ожидается низкий ответ иммунной системы.Кроме того, наночастицы можно производить недорого. Принимая во внимание свойство производства принципов биологического строительства, наночастицы идеально подходят для транспортировки медицинских препаратов или генов. В дополнение к транспортной функции можно модифицировать поверхность наночастиц с помощью определенных рецепторов, чтобы они избирательно связывались с конкретными клетками. Использование наночастиц в качестве целевого лечения определенных популяций клеток приводит к значительному снижению побочных эффектов. ¹⁶

Недавние исследования доказали, что липидные нанокапсулы (LNC), меченные флуоресцеин-5-изотиоцианатом (FITC), локально вставленные в барабанную лестницу морских свинок, инфильтрируют популяции клеток внутреннего уха, не вызывая функциональных или анатомических повреждений. ¹⁷ Эти данные были первыми, продемонстрировавшими способность LNC без лекарственного вещества проникать в клетки внутреннего уха. Однако в этом исследовании LNC-опосредованная доставка лекарств не изучалась.

Помимо плотности здорового SGC, на оптимальную эффективность кохлеарных имплантатов влияет еще один важный фактор.В послеоперационном начале реакции на инородное тело организм инкапсулирует имплантат за счет роста фиброзной ткани. Это приводит к уменьшению взаимодействия между нервом и электродом, увеличению распространения нейронального возбуждения, снижению частотной избирательности и увеличению импедансов. ¹⁸

Ролипрам, внутриклеточный ингибитор фосфодиэстеразы-4, показал нейропротекторные свойства в предыдущих исследованиях. ^{19 , 20} Кроме того, противовоспалительные эффекты также были доказаны на животных моделях. ²¹ Мы предполагаем, что ролипрам потенциально может защитить SGC и уменьшить воспалительные реакции. При системном, внутривенном или пероральном применении биодоступность ролипрама составляет 74–77%. ²² Однако из-за гематоэнцефалического барьера системные препараты, которые используются для лечения внутреннего уха, должны вводиться в таких высоких дозах, чтобы иметь биологический эффект на их клетки-мишени во внутреннем ухе, что может вызвать побочные эффекты. . Чтобы избежать серьезных побочных эффектов, предпочтение отдается местному лечению внутреннего уха.Чтобы уменьшить количество лекарств, наносимых локально на внутреннее ухо, предпочтительна адресная доставка лекарств. Инкапсулируя ролипрам в носителе, таком как LNC, в будущем может быть реализована адресная доставка лекарств. Это уменьшит количество лекарств, необходимых для лечения человека. Во внутреннем ухе целенаправленная доставка лекарства приведет к значительному снижению дозировки и, как следствие, к более низкому риску побочных эффектов по сравнению с системным лечением. Кроме того, более низкая доза также экономически выгодна.Мы предполагаем, что LNC представляют собой возможную систему доставки лекарств, которая может использоваться для транспортировки ролипрама в цитоплазму. Попав в цитоплазму, ролипрам высвобождается и вызывает свои биологические эффекты.

В этом исследовании изучается влияние ролипрама и ролипрама, инкапсулированных в LNC, на выживаемость, диаметр сомы и длину нейритов SGC, полученных неонатально, с целью определить, усиливается ли эффект препарата при использовании LNC в качестве системы доставки лекарства.

Кроме того, оценивается влияние ролипрама и комбинации LNC и ролипрама на секрецию дендритных клеток (DC), стимулированных фактором некроза опухоли-α (TNF-α).Этот эксперимент косвенно предоставляет информацию о высвобождении полезной нагрузки и может продемонстрировать потенциал LNC как системы доставки ролипрама. Кроме того, результаты позволяют лучше понять противовоспалительный эффект ролипрама. Этот эффект обусловлен ключевой ролью TNF-α в провоспалительных процессах, что значительно снижает послеоперационные реакции на кохлеарные имплантаты.

Основываясь на результатах in vitro, мы провели эксперименты на морских свинках с системной глухотой, чтобы изучить пригодность LNC для доставки ролипрама in vivo.

Материалы и методы

Липидные нанокапсулы

Для создания LNC лаборатория «Ingénierie de la Vectorisation Particulaire» Университета Анже (Анже, Франция) использовала новый метод, основанный на фазовой инверсии. ²³ Наночастицы, которые состояли из жидкого ядра, были окружены когезионным поверхностно-активным слоем на границе раздела масло-вода (). Липофильный Labrafac ^® WL 1349 (Gattefossé SA, Saint-Priest, Франция), который состоит из триглицеридов каприновой и каприловой кислот, использовали для получения масляной фазы частиц, тогда как водная фаза включала NaCl (Prolabo, Fontenay -sous-Bois, Франция), который растворяли в очищенной воде Milli-Q-plus ^® (Millipore, Billerica, MA).Следовательно, для приготовления LNC требовалось два тензиоактивных поверхностно-активных вещества: Lipoïd ^® S75-3 (Lipoïd GmbH, Людвигсхафен, Германия), соевый лецитин из фосфатидилхолина (69%), фосфатидилэтаноламин (10%) и другие фосфолипиды и солутол ^{. ®} HS 15 (BASF, Людвигсхафен, Германия), композиция свободного полиэтиленгликоля (PEG) 660 и PEG 660-гидроксистеарата. Для приготовления LNC со средним диаметром 50 нм соединения использовали в следующих количествах: 1,028 г Labrafac ^® , 0,0.075 г Lipoïd ^® , 0,846 г Solutol ^® , 0,089 г NaCl и 2,962 г чистой воды. Магнитное перемешивание (200 об / мин) при комнатной температуре привело к образованию эмульсии масло-в-воде всех соединений. При прогрессивной скорости нагрева 4 ° C / мин была получена инвертированная фаза (вода-в-масле) при температуре 85 ° C с зоной инверсии фаз приблизительно 70 ° C. Эта зона инверсии фаз соответствовала состоянию микроэмульсии, и были выполнены три температурных цикла в диапазоне от 60 ° C до 85 ° C для обеспечения стабильной эмульсии масло-в-воде.Состав LNC был получен с использованием процесса быстрого охлаждения-разбавления во время зоны инверсии фаз с 12,5 мл холодной воды в соотношении 1: 2,5. Полученные LNC имели диаметр 50 нм. Для этого разведение перемешивали в течение 5 минут при 2 ° C.

( A ) Липидная нанокапсула; ( B ) липидная нанокапсула, меченная FITC, и ( C ) липидная нанокапсула с инкапсулированием ролипрамом и этикеткой FITC.

Сокращения: DSPE-PEG2000-амино, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N- [амино (PEG) 2000]; FITC, изотиоцианат флуоресцеина.

Для инкапсулирования ролипрама (Sigma-Aldrich, Лион, Франция) препарат добавляли перед началом трех температурных циклов в концентрации 1 мг / мл в Labrafac ^® .

Поверхность LNC была модифицирована с использованием процесса пост-вставки 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N- [амино (PEG) 2000] (DSPE-PEG2000-амино). 1,75 мл LNC (10 ¹⁷ частиц / мл) инкубировали с 1,25 мл водным мицеллярным раствором (15 мг / мл) DSPE-PEG2000-амино (Avanti ^® ; Polar Lipids Inc, Алебастр, Алабастр) в течение 90 минут. при 60 ° С. ²⁴ Полученную суспензию встряхивали каждые 15 минут и гасили в ледяной воде в течение 60 секунд.

FITC-мечение LNC было выполнено с помощью FITC (), приобретенного у Sigma-Aldrich. 1 мл FITC (2 мг / мл) добавляли к 2,95 мл суспензии LNC. Путем добавления соответствующего количества 0,1 М Na ₃ PO _4, pH был увеличен до 9. Образец, который был помещен на водяную баню и защищен от света, перемешивался при температуре 37 ° C в течение 45 минут. минут перед охлаждением на ледяной бане в течение 3 минут, чтобы остановить процесс.

Чтобы отделить свободный FITC от размера меченого LNC, была проведена эксклюзионная хроматография на колонке Sephadex G-25 (Pharmacia, Uppsala, Sweden). Для каждой фракции измеряли флуоресцентную спектроскопию (обнаружение FITC), а также мутность при 680 нм (обнаружение LNC). Контроль целостности LNC выполняли путем измерения размера с использованием процедуры динамического светорассеяния (DLS) на фракциях, содержащих частицы.

Анализ DLS и электрокинетические измерения показали гидродинамический диаметр 52 ± 5 нм и ζ-потенциал -50 ± 10 мВ.Наконец, концентрация раствора LNC составляла 4 × 10 ¹⁵ частиц / мл.

Для загрузки ролипрама в LNC, а также для модификации с помощью FITC (), этап очистки был изменен. После стадии прививки смесь диализовали (MWCO 15 кДа) против чистой воды в течение ночи и концентрацию доводили до получения 4 × 10 ¹⁵ частиц / мл. Гидродинамический диаметр и ζ-потенциал были проверены и оказались сопоставимыми с данными, полученными LNC без ролипрама.

Эксперименты in vitro

Культура клеток спирального ганглия

Диссоциация SGC от 3–5-дневных крыс Sprague – Dawley была проведена в соответствии с немецким законом о защите животных (§4/03). Перед приготовлением клеток 96-луночные планшеты для культивирования (Nunc GmbH, Висбаден, Германия) последовательно покрывали полиорнитином (Sigma, St, Louis, MO) и ламинином (Invitrogen, Karlsruhe, Германия). ²⁵ Общее количество 1,5 × 10 ⁴ клеток засевали на лунку в 100 мкл модифицированной среды на основе пансерина.К пансерину (15 мл) добавляли 375 мкл 1 M HEPES (Sigma, Steinheim, Германия), 275 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS; Invitrogen), 225 мкл пенициллина (Grünenthal, Aachen, Германия), 82,5 мкл глюкозы (30% в PBS), 35 мкл инсулина (Invitrogen) и 15 мкл N2-добавки (Invitrogen) для приготовления среды. Следующие экспериментальные группы были выполнены в различных концентрациях: LNC, меченные FITC (LNC – FITC), ролипрам (ролипрам; TOCRIS Bioscience, Ellisville, MO) и LNC – FITC с ролипрамом (LNC – FITC – ролипрам).BDNF (50 нг / мл; R&D Systems, Висбаден, Германия) использовали в качестве положительного контроля.

Ролипрам использовался в концентрациях 38 нг (разведение 1:50, n = 20), 19 нг (разведение 1: 100, n = 20), 9,5 нг (разведение 1: 200, n = 20) и 6,3 нг. (Разведение 1: 300, n = 20) на 0,1 мл среды. Исходный раствор LNC содержал 45 мг / мл (4,2 × 10 ¹⁵ LNC / мл) меченного FITC LNC и 19 мкг / мл ролипрама, соответственно. Используемые разведения содержали 0,9 мг / мл LNC (разведение 1:50), 0,45 мг / мл LNC (разведение 1: 100), 0.225 мг / мл LNC (разведение 1: 200) и 0,15 мг / мл LNC (разведение 1: 300).

Через 48 часов культивирования при 37 ° C и 5% CO. ₂ клетки фиксировали смесью 1: 1 метанол / ацетон. Иммунохимическое окрашивание антителами к нейрофиламентам массой 200 кД (Vectastain ABC Kit ELITE Mouse IgG; Vector Laboratories, Burlingame, CA) позволило четко идентифицировать SGC. Необработанный SGC, культивированный только с добавлением пансерина, служил отрицательным контролем. Чтобы определить абсолютное количество засеянных SGC, контроль за высевом фиксировали через 4 часа.Среднее значение положительных окрашенных 200 кДа клеток в посевном контроле принимали за 100%.

Vital SGC определяли как позитивно окрашенные нейроны, которые показали рост нейритов, по крайней мере, трех диаметров сомы. Из пяти различных полей зрения в каждой лунке был выбран один нейрон с целью измерения длины нейрона и нейрита, как описано ранее. ²⁶ Выживаемость клеток определяли по количеству жизнеспособных нейронов в корреляции с данными контроля посева.

Культура SGC: исследование нейропротекторного эффекта LNC – FITC

Первый тест SGC in vitro выявил нейрозащитный потенциал наночастиц LNC – FITC (), даже несмотря на то, что они не были загружены ролипрамом полезной нагрузки. Второй тест был проведен, чтобы проверить, оказывают ли сами наночастицы или флуоресцеин FITC положительный эффект на выживаемость SGC частиц LNC-FITC, не загруженных лекарством.

( A ) Выживаемость культивированных SGC, обработанных LNC – FITC, LNC – FITC – ролипрамом, ролипрамом и BDNF в различных концентрациях.Ролипрам использовали в концентрациях 38 нг (разведение 1:50; n = 5; всего: 20 лунок), 19 нг (разведение 1: 100; n = 5; всего: 20 лунок), 9,5 нг (разведение 1: 200; n = 5; всего: 20 лунок) и 6,3 нг (разведение 1: 300; n = 5; всего: 20 лунок) на 0,1 мл среды. Маточный раствор LNC содержал 45 мг / мл FITC (4,2 × 10 ¹⁵ LNC / мл). Частицы LNC – FITC – ролипрам содержали ролипрам 19 мкг / мл. BDNF (50 нг / мл, n = 5; всего: 30 лунок) служил положительным контролем. ( B ) Нейритный рост культивированного SGC, обработанного LNC – FITC, LNC – FITC – ролипрамом, ролипрамом и BDNF в различных концентрациях (среднее значение ± стандартное отклонение).LNC – FITC 1:50 значительно уменьшил длину SGC – нейрита ( P <0,001) по сравнению со всеми другими экспериментальными группами (не отмеченными на графике), за исключением группы LNC – FITC – ролипрам 1:50 ( P < 0,01; левая верхняя строка). Над столбцами отмечены достоверные различия между группами лечения по сравнению с отрицательным контролем.

Примечания: * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001.

Сокращения: BDNF, нейротрофический фактор головного мозга; FITC, флуоресцеинизотиоцианат; LNC, липидные нанокапсулы; SD, стандартное отклонение; SGC, спиральные ганглиозные клетки.

Наночастицы

LNC – FITC добавляли к культуре SGC, как описано выше, в трех различных концентрациях (1: 100, 1: 200, 1: 300 разведение исходного раствора 45 мг / мл LNC). Пустые частицы LNC (LNC без маркировки FITC) добавляли аналогичным образом. Кроме того, клетки, обработанные BDNF 50 нг / мл, использовали в качестве положительного контроля. Среда для культивирования клеток посевного материала и отрицательного контроля оставалась необработанной.

SGC были засеяны со средней плотностью 1,5 × 10 ⁴ (247.3 ± 59,8 SGC в контроле за высевом [среднее значение ± стандартное отклонение]; п = 6). В трех независимо выполненных экспериментальных установках (планшетах) каждая группа включала по три лунки на установку.

Культура дендритных клеток

DC были получены из бедренного костного мозга мышей BALB / c (Charles River, Sulzfeld, Германия) в соответствии с утвержденным протоколом ²⁷ и в соответствии с немецким законом о защите животных (§4/03). ). Костный мозг промывали 5 мл PBS при 4 ° C из бедренной кости и центрифугировали в течение 10 минут при 290 g при 4 ° C.Супернатант отбрасывали, чтобы ресуспендировать клеточный осадок с RPMI 1640 (Biochrom, Берлин, Германия), к которому добавляли 10% фетальную телячью сыворотку (FCS) и 50 мкмоль / л 2-меркаптоэтанола (Sigma, Deisenhofen, Германия). Общее количество 2,5 × 10 ⁶ клеток добавляли к 10 мл дополненного RPMI в чашке Петри (Cell +; Sarstedt, Nümbrecht, Германия). Перед культивированием при 37 ° C и 5% CO ₂ добавляли 20 нг / мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF; R&D System, Миннеаполис, Миннесота).На 3 день добавляли 10 мл свежей среды, содержащей 20 нг / мл GM-CSF. На 6 и 8 день отбирали 10 мл культуральной среды и центрифугировали для сбора включенных клеток. Осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды, в которую добавляли 20 нг / мл GM-CSF. На 10-й день ряд 5 × 10 ⁴ клеток высевали в 200 мкл среды RPMI на лунку 96-луночного планшета. Ролипрам (Tocris Bioscience), LNC – FITC – ролипрам, LNC – FITC и LNC – Blank добавляли в четырех концентрациях (10 мкМ, n = 12; 1 мкМ, n = 12; 0.1 мкМ, n = 12; 0,01 мкМ, n = 12). Через час после инкубации с тестируемыми веществами DC стимулировали LPS для индукции продукции TNF-α. Через 24 часа супернатант собирали и концентрацию TNF-α измеряли с помощью ELISA (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота).

Исследование in vivo

Экспериментальные животные

Использовали самок морских свинок Dunkin Hartley без пигментации (Charles River GmbH, Зульцфельд, Германия) массой 330–460 г. После подтверждения физиологического слуха с помощью измерения акустически вызванного слухового ответа ствола мозга (AABR) в день 0 животные были системно оглушены.На 7 день для подтверждения глухоты измерение AABR было повторено, и животных лечили LNC – FITC (n = 7), LNC – FITC – ролипрамом (n = 6), ролипрамом (n = 7) или PBS (n = 7). = 6; контрольная группа) через одностороннюю кохлеостомию. Контралатеральный PBS применяли в качестве контроля. После 3 недель глухоты животных умерщвляли для забора тканей.

Уход за морскими свинками и все эксперименты проводились в соответствии с немецким законом о защите животных и были разрешены региональным правительством (LAVES, регистрационный номер 07/1266).

Анестезия

Морских свинок анестезировали медетомидином (0,3 мг / кг, Domitor ^® ; Pfizer, Берлин, Германия) и кетамином (40 мг / кг, Ketamin ^® ; WDT, Гарбсен, Германия) для электрофизиологических измерений. и хирургия. При необходимости животным вводили дополнительную инъекцию в размере половины исходной дозы для операции. На 21 день эксперимента, после последнего измерения AABR, все животные получили вторую инъекцию полной дозы анестетиков за 15 минут до умерщвления, как описано выше.За час до операции применяли 0,05 мг / кг сульфата атропина (B Braun Melsungen AG, Melsungen, Германия) и 5 ​​мг / кг карпрофена (Rimadyl ^® ; Pfizer GmbH, Карлсруэ, Германия). Перед операцией в постаурикулярной области и перед перфузией в области разреза выполнялась местная анестезия прилокаином (Xylonest ^® ; AstraZeneca GmbH, Ведель, Германия).

Измерение акустически вызванной слуховой реакции ствола мозга

Измерения AABR проводили в день 0 для подтверждения физиологического порога слуха животных.Пороги слышимости ≤80 дБ SPL на 1 кГц, ≤70 дБ SPL на 4 кГц, ≤50 дБ SPL и ≤60 дБ SPL на средних частотах 8 кГц и 16 кГц, ≤70 дБ SPL на 32 кГц и ≤80 дБ SPL на 40 кГц были установлены как пороговые значения для нормального слуха. На 7-й день снова измеряли AABR, чтобы проверить эффективность процедуры оглушения. Сдвиг порога ≥50 дБ или более 90 дБ SPL был определен как глухой. ²⁸ На 21 день эксперимента последнее измерение было проведено непосредственно перед умерщвлением. Все измерения AABR были выполнены с помощью системы (Tucker Davis Technologies, Алачуа, Флорида), состоящей из двух многофункциональных процессоров RX6, блока динамика громкоговорителя (ED1) и двух электростатических динамиков (EC1).Под наркозом животных помещали на грелку в звукоизолированный бокс, где они подвергались акустическому воздействию электростатических динамиков (EC1) через модифицированные ушные вкладыши. Для регистрации неврологических реакций четыре игольчатых электрода были имплантированы подкожно следующим образом: электрод сравнения был прикреплен к носу, слуховые вызванные потенциалы были получены через два электрода относительно левого и правого сосцевидного отростка, а заземляющий электрод был помещен на шею. для подавления мешающих сигналов, вызванных частотой сердечных сокращений или напряжением мышц.Записывающие электроды транслировали потенциалы низкоомного преобразователя (RA4LI) на предусилитель (RA4PA), который передавал оцифрованный сигнал на многофункциональный процессор (RX6). Измерения контролировались программным обеспечением BioSigRP (Tucker Davis Technologies). Динамический диапазон стимулов (синусоидальные импульсы 10 мс; функция косинусоидального входа и затухания 1 мс) устанавливался с шагом 10 дБ от 20 до 90 дБ SPL, тогда как частоты 1 кГц, 4 кГц, 8 кГц, 16 кГц, 32 кГц и 40 кГц.Для подавления фонового шума полосовые фильтры были установлены от 300 Гц до 3 кГц на уровне 3 дБ. Для подавления других артефактов был выбран порог 70 мкВ. Для графического представления каждый стимул был повторен 270 прогонов и усреднен. Порог слышимости определялся визуальным анализом, как только наблюдался значительный локальный максимум в ходе усредненной волны. ²⁹

Процедура оглушения

Все животные были системно оглушены в день 0 с использованием обычной ототоксической процедуры, как описано Versnel и коллегами. ³⁰ После предварительного измерения AABR подкожно вводили 400 мг / кг канамицина. В следующие два часа яремную вену обнажили под разрезом перекрывающей мускулатуры, чтобы ввести петлевой диуретик фуросемид (100 мг / кг). Совместное введение аминогликозида канамицина с петлевыми диуретиками приводит к полной потере сенсорных клеток, что инициирует дегенерацию SGC. Перед забором тканей глухота была подтверждена на 7 и 21 день путем измерения AABR.

Применение тестируемых веществ

На 7 день экспериментов животных помещали вентрально на грелку после измерения AABR, чтобы подтвердить глухоту животных. Постаурикулярный разрез производили в асептических условиях. Вышележащие мышцы были удалены, чтобы исследовать барабанную головку Bulla, которая была открыта на следующем этапе. С помощью микроскопа (Carl Zeiss AG, Оберкохен, Германия) визуализировали улитку в открытой полости среднего уха.В базальном повороте улитки просверлили небольшое отверстие с помощью ланцета и вскрыли барабанную лестницу. Инъекционный катетер собирали с использованием канюли 27 G (B Braun Melsungen AG), соединенной с силиконовой трубкой (внутренний диаметр 0,3 мм; LiquidScan GmbH and Co, KG, Юберлинген, Германия) и вставленной полиимидной трубкой (внутренний диаметр 0,12 мм; Micro). Lumen Inc, Тампа, Флорида) вверху. Во избежание глубокого проникновения в улитку на кончике была сформирована сфера из карбоксилатного цемента толщиной 2 мм (ESPE Dental AG, Зеефельд, Германия).Затем катетер вставляли в барабанную лестницу для доставки общего объема 5 мкл исследуемых веществ в течение периода от 5 до 10 минут во внутреннее ухо с использованием шприца Hamilton на 10 мкл (Hamilton Bonaduz AG, Бонадуц, Швейцария). В левое ухо вводили испытуемые вещества (LNC – FITC [n = 7], ролипрам [n = 6], LNC – FITC – ролипрам [n = 7] и PBS [n = 6]) в разведении 1 : 100. В качестве контроля правые уши обрабатывали PBS. Впоследствии улитка и барабанная перепонка были заделаны карбоксилатным цементом (Durelon ^® ; ESPE Dental AG), а травма мягких тканей ушита в два слоя.

Гистологический анализ

Анестезированных животных умерщвляли после окончательного измерения AABR на 21 день посредством транскардиальной перфузии 200 мл PBS с последующим введением 200 мл параформальдегида (PFA; 4%; Merck, Дармштадт, Германия) в левую камеру сердца. Улитки собирали и осторожно открывали на вершине и в круглом окне для замены резистентной перилимфы на фиксатор путем медленной промывки 1 мл PFA (4%). Образцы помещали в PFA на 2 часа для дальнейшей фиксации. Перед декальцинацией улитки трижды промывали PBS.Затем их поместили в 20% EDTA (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Штайнхайм, Германия) на 4–5 недель при 37 ° C. Среду для декальцинации меняли каждые 2 или 3 дня. Перед заливкой в ​​парафин проводили дегидратацию 50–100% этанолом (BÜFA Chemikalien, Altmoorhausen, Германия). Мидмодиолярные срезы 5 мкм получали из парафиновых блоков, помещали на предметные стекла и окрашивали гематоксилином и эозином.

Для анализа все повороты улитки идентифицировали с помощью микроскопа Axiovert 25C (Carl Zeiss AG).Повороты получили названия нижний базальный поворот (lb), верхний базальный поворот (ub), первый средний поворот (1 м), второй средний поворот (2 м), третий средний поворот (3 м), четвертый средний поворот (4 м), и апикальный поворот (а) (). Из-за методов подготовки не всегда можно было проанализировать 4 м и поворот отдельно. Поэтому плотности SGC этих областей, если таковые имеются, были добавлены для анализа. Случайно был выбран первый срединный срез. Каждый пятый последующий срез был выбран для анализа, чтобы гарантировать расстояние 25 мкм между срезами.Всего было проанализировано пять секций на улитку. Рядом с диаметром перикариона исследовали количество выживших SGC с видимым ядром. Количество выживших SGC в корреляции с измеренной площадью поперечного сечения канала Розенталя дает плотность SGC, которая может быть выражена в виде клеток / 10 000 мкм ² . Измерение диаметра сомы производилось путем деления площади каждого канала Розенталя на четыре равные части. В каждой части для измерения были выбраны два репрезентативных SGC.В случае менее восьми выживших SGC измеряли каждую видимую клетку.

Типичный образец мидмодиолярного гематоксилина и окрашенного эозином среза (5 мкм) глухой улитки морской свинки. Районы канала Розенталя выделены красными квадратами. Нижний базальный поворот (lb), верхний базальный поворот (ub), первый средний поворот (1 м), второй средний поворот (2 м), третий средний поворот (3 м), четвертый средний поворот (4 м) и апикальный поворот ( а) барабанной лестницы. Стрелкой отмечена кохлеостома, где растворы вводились в барабанную лестницу.Обозначены модиолус, ось внутреннего уха и верхушка, верхняя часть внутреннего уха.

Примечание: * scala media.

Сокращения: AN, слуховой нерв; М, модиолус; Sc. барабанная перепонка, scala tympani; Sc. жилет, scala vestibuli (увеличение в 40 раз).

Статистический анализ

Все данные прошли тест на нормальность (Колмогоров – Смирнов). Для анализа данных in vitro был проведен дисперсионный анализ Стьюдента – Ньюмана – Кеулса (ANOVA). Данные in vivo сначала анализировали с использованием парного теста t для сравнения обработанных и необработанных ушей одной группы животных.Сравнения между обработанными (левыми) ушами всех групп, а также сравнения с необработанными (правыми) ушами были выполнены с использованием ANOVA Стьюдента – Ньюмана – Кеулса.

Результаты

Исследование SGC in vitro – выживаемость нейронов

SGC высевали со средней плотностью 1,5 × 10 ⁴ клеток / лунку. Контроль посева оценивался через 4 часа культивирования и содержал 229,6 ± 18,1 (среднее ± стандартное отклонение [SD]; n = 12) SGC. Это было установлено в качестве контрольного значения (100%) для экспериментальных групп, которые были зафиксированы через 48 часов.В пяти независимо выполненных экспериментальных условиях (независимые планшеты в разные дни) каждая группа включала 4–8 лунок. Таким образом, каждую концентрацию исследуемых веществ (1:50, 1: 100, 1: 200, 1: 300) тестировали как минимум в 20 лунках. Для обработки BDNF в качестве положительного контроля использовали 30 лунок; для необработанного отрицательного контроля исследовали 12 лунок. изображает среднее значение и SD процент выживших SGC для каждой экспериментальной группы.

BDNF показал лучшие результаты с очень значимым увеличением выживаемости нейронов по сравнению с отрицательным контролем (45.7% ± 12,6% против 10,7% ± 4,2%; P <0,001), а также по сравнению со всеми другими экспериментальными группами ( P <0,001). Чистый ролипрам не увеличивал выживаемость нейронов. Гомогенные значения выживаемости 15,7% ± 4,5% в среднем для каждого разведения ролипрама не вызывали существенной разницы по сравнению с отрицательным контролем, хотя была заметна тенденция к увеличению выживаемости. В сочетании с LNC ролипрам увеличивал выживаемость нейронов в соотношении 1: 100 (32.6% ± 9,7%; P <0,001) разведение. По сравнению с отрицательным контролем, разведения 1: 200 (23,4% ± 7,2%; P <0,01) и 1: 300 (20,0 ± 6,4%; P <0,05) также оказались нейропротективными. Разведение 1:50 (16,2% ± 10,2%) не дало никаких преимуществ.

Лечение ненагруженным LNC (меченным FITC, но не содержащим ролипрам) также привело к увеличению выживаемости нейронов, хотя эффект был слабее, чем в группе LNC – FITC – ролипрам.В этой группе разведение 1: 100 (24,4% ± 8,8%; P <0,001) и 1: 200 (20,7% ± 7,6%; P <0,01) показало положительный эффект.

Поскольку обработка наночастицами LNC – FITC приводит к увеличению выживаемости нейронов, был проведен дополнительный тест для оценки того, какой компонент наночастиц – сама наночастица или флуоресцеин FITC – обладает нейрозащитными свойствами. Результаты выявили нейропротекторные эффекты самой частицы. Как показано на фигуре, частицы LNC-Blank значительно увеличили выживаемость по сравнению с отрицательным контролем.

Выживаемость культивированных SGC, обработанных LNC – FITC и LNC – Blank в различных концентрациях (n = 9 для каждой группы, среднее ± стандартное отклонение). Маточный раствор LNC содержал 45 мг / мл FITC (4,2 × 10 ¹⁵ LNC / мл). BDNF (50 нг / мл, n = 9) служил положительным контролем. Выживаемость SGC во всех экспериментальных группах достоверно отличалась от выживаемости нейронов, обработанных BDNF (верхняя горизонтальная линия; * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0.001). Статистически значимые различия SGC, обработанного LNC (с FITC и без него), по сравнению с отрицательным контролем отмечены над соответствующей колонкой.

Сокращения: BDNF, нейротрофический фактор головного мозга; FITC, флуоресцеинизотиоцианат; LNC, липидные нанокапсулы; SD, стандартное отклонение; SGC, спиральные ганглиозные клетки.

Исследование SGC in vitro: длины нейритов

Длины нейритов отрицательного контроля измеряли со средним значением 420,1 ± 181,5 мкм (среднее ± стандартное отклонение).BDNF и ролипрам не влияли на рост нейритов, тогда как разведения 1:50 для групп LNC-FITC (265,6 ± 159,4 мкм; P <0,001) и LNC-FITC-ролипрам (349,3 ± 178,3 мкм; P < 0,05) индуцировало значительное уменьшение длины нейритов. По сравнению с отрицательным контролем, LNC – FITC показал положительный эффект на длину нейритов в разведении 1: 300 (519,1 ± 205,4 мкм; P <0,05), LNC – FITC – ролипрам в 1: 100 (547,6 ± 164,1 мкм; P <0.01) и разведение 1: 200 (536,8 ± 201,1 мкм; P <0,01), тогда как другие разведения не отличались от отрицательного контроля ().

Исследование SGC in vitro: диаметр сомы

Средний диаметр сомы отрицательного контроля составлял 14,5 ± 2,6 мкм (среднее ± стандартное отклонение, n = 60). Только диаметр клеток SGC, обработанного LNC – FITC в соотношении 1:50 (исходный раствор: 45 мг / мл LNC), показал значительное уменьшение диаметра сомы (12,8 ± 1,9 мкм; P <0,01). Ни одна из других групп не показала статистически значимых различий по сравнению со средним диаметром клеток отрицательного контроля.Значения показаны в.

Таблица 1

Результаты измерения диаметра сомы SGC (среднее ± стандартное отклонение) после 48 часов культивирования с LNC – FITC, LNC – FITC – ролипрам, ролипрам или BDNF в указанных концентрациях

Ролипрам 0.01 мкмоль	0,414	0,399	0,391
Ролипрам 0,1 мкмоль	0,406	0,419	0,417
Ролипрам 1 мкмоль		0,421	0,367	0,433
LNC – FITC – ролипрам 0,01 мкмоль	0,502	0,399	0,416
LNCipram – FITC.1 мкмоль	0,411	0,374	0,438
LNC – FITC – ролипрам 1 мкмоль	0,446	0,499	0,455
0,455
LN247 F0247
LNC-Blank 0,01 мкмоль	0,497	0,482	0,476
LNC-Blank 0,1 мкмоль	0,42	0,431	0,418	0,418	0,451	0,463
LNC – Blank 10 мкмоль	0,172	0,249	0,186
LNC – FITC 0,01 мкмоль								0,429	0,42	0,359
LNC – FITC 1 мкмоль	0,519	0,474	0,446
LNC – FITC 1067	0,654	0,619
ДМСО (контроль транспортных средств)	0,32	0,319	0,322
LPS (положительный контроль)	0,518	0,465 9024

.8

Экспериментальная группа	Средний диаметр сомы [мкм]	SD	Количество измеренных сомов
Отрицательный контроль	14,5	2,6	60
LNC – FITC 1:50 12247	1,9	100
LNC – FITC 1: 100	13,2	2,2	100
LNC – FITC 1: 200	13,3		2,2 –FITC 1: 300	14,0	3,2	100
LNC – FITC – ролипрам 1:50	13,3	2,1	100
LNCipram – 1246 100 146 – FITC	2.6	100
LNC – FITC – ролипрам 1: 200	13,7	2,8	100
LNC – FITC – ролипрам 1: 300	14,1			Ролипрам 1:50	14,4	2,6	100
Ролипрам 1: 100	14,7	2,9	100
Ролипрам 1: 200
9024	Ролипрам 1: 300	14.6	3,1	100
BDNF 50 нг / мл	14,8	2,7	130

Исследование in vitro DC – Ингибирование TNF-α

На каждую лунку 595 × 10s ^{4 были посеяны. Для каждой концентрации и экспериментальной группы было выполнено четыре лунки на планшет. Три повторных настройки дали всего 12 лунок на концентрацию и группу.}

Производство TNF-α всеми DC, обработанными ролипрамом, значительно подавлялось по сравнению с положительным контролем (338.18 ± 41,82 пг TNF-α / мл; среднее ± стандартное отклонение). Ингибирование было дозозависимым: более высокие концентрации ролипрама вызывали более сильное подавление TNF-α (). Аналогичное снижение было показано в группе, получавшей LNC-FITC-ролипрам, хотя значения продемонстрировали более слабое ингибирование продукции TNF-α. Наночастицы LNC-Blank вызывали небольшое ингибирование цитокина в концентрации 1 мкМ (283,11 ± 23,01 пг / мл; P <0,05). Сильное снижение секреции TNF-α было вызвано частицами LNC-Blank с концентрацией 10 мкМ (98.11 ± 81,29 пг / мл; P <0,001). Наночастицы LNC-FITC показали сходные характеристики по сравнению с частицами LNC-Blank с очень сильным ингибированием в концентрации 10 мкМ (146,90 ± 7,64 пг / мл; P <0,001). При микроскопическом исследовании культуры DC наблюдали грануляцию и деформацию клеток в группах наночастиц 10 мкМ (LNC – Blank, LNC – FITC, LNC – FITC – ролипрам). Тесты на жизнеспособность клеток подтвердили токсические эффекты в этих концентрациях (данные в дополнительных материалах).

TNF-α-секреция ДК, обработанных ролипрамом, LNC – FITC – ролипрамом, LNC – бланком и LNC – FITC в различных концентрациях. DC стимулировали LPS через 1 час после инкубации с тестируемыми веществами. Данные показывают среднее значение ± стандартное отклонение для трех независимых экспериментов: каждый состоял из n = 12 лунок на концентрацию на группу. Статистически значимые различия в секреции TNF-α по сравнению с контрольной группой LPS нанесены на график над столбцами.

Примечания: * P <0.05; ** P <0,01; *** P <0,001.

Сокращения: BDNF, нейротрофический фактор головного мозга; ДК, дендритные клетки; FITC, флуоресцеинизотиоцианат; LNC, липидные нанокапсулы; SD, стандартное отклонение; SGC, спиральные ганглиозные клетки; TNF-α, фактор некроза опухоли-α.

Результаты in vivo

Измерения AABR

Для определения порога слышимости животным проводили измерения AABR на 0, 7 и 21 день исследования.

Предварительная AABR была выполнена непосредственно перед системным оглушением в день 0 для подтверждения физиологических свойств слуха животных.На 1 кГц порог был показан на уровне 72,90 ± 12,43 дБ SPL, на 4 кГц 61,44 ± 12,55 дБ SPL, на 8 кГц 36,14 ± 11,62 дБ SPL, на 16 кГц 48,86 ± 11,76 дБ SPL, на 32 кГц 49,02 ± 9,85 дБ SPL и на 40 кГц 63,91 ± 13,61 дБ SPL (график в дополнительном материале). Средняя разница между левым и правым ухом составила 5,13 дБ. Полученные данные показали нормальную физиологию слуха подопытных животных в соответствии с предыдущими исследованиями.

Измерения AABR на 7 и 21 день были выполнены для подтверждения процедуры оглушения.Ни в одном случае измеренных частот не было видно положительной формы волны AABR до предела измерения 90 дБ SPL. Согласно литературным данным, смещение порога на 50 дБ подтвердило успешное выполнение процедуры оглушения. ²⁸

Плотности SGC in vivo

При сравнении данных для обработанных левых ушей не наблюдалось значительных различий в отношении плотностей SGC (). Такие же результаты были получены при сравнении плотности SGC правого уха. Кроме того, парный тест t не выявил различий между правым и левым ухом в группах тестирования.Только SGC-плотности левого и правого ушей контрольной группы PBS значительно различались (4,14 SGC ± 1,40 / 10,000 мкм ² ; среднее ± SD по сравнению с 5,23 SGZ ± 1,67 / 10,000 мкм ² ; P < 0,05;). Репрезентативные изображения канала Розенталя для всех четырех групп лечения показаны на.

( A ) Средняя плотность SGC (клеток / 10.000 мкм ² ) оглушенных морских свинок, получавших LNC – FITC (n = 7), LNC – FITC – ролипрам (n = 6), ролипрам (n = 7) ) и PBS (n = 6) в разведении 1: 100 (среднее ± стандартное отклонение; * P <0.05). ( B ) Средний диаметр сомы SGC у оглушенных морских свинок, получавших LNC – FITC, LNC – FITC – ролипрам, ролипрам и PBS в разведении 1: 100 (среднее ± стандартное отклонение; * P <0,05; ** P <0,01). Только животные, получавшие LNC-FITC и ролипрам, показали значительную разницу в диаметрах сомы SGC между левым (le, тестируемое вещество) и правым (ri, контроль).

Сокращения: FITC, флуоресцеинизотиоцианат; LNC, липидные нанокапсулы; PBS, фосфатно-солевой буфер; SD, стандартное отклонение; SGC, спиральные ганглиозные клетки.

( A – D ) Репрезентативные изображения каналов Розенталя у морских свинок через 21 день после оглушения. ( E ) иллюстрирует плотность SGC у нормально слышащих животных по сравнению с глухими в ( A – D ) (изображение из предыдущего эксперимента, зарегистрированного в LAVES с тем же регистрационным номером, что и эксперименты, описанные здесь. : 07/1266). ( A ) получен от животного из группы LNC – FITC, получавшего наночастицы в разведении 1: 100 (исходный раствор 45 мг / мл LNC).( B ) представляет канал Розенталя животных, получавших LNC – FITC – ролипрам (разведение 45 мг / мл LNC и 19 мкг / мл ролипрама в исходном растворе 1: 100), а ( C ) – от животного, которое получали ролипрам (разведение 19 мкг / мл исходного раствора ролипрама 1: 100). Изображение канала Розенталя из контрольной группы показано на ( D ).

Примечания: На каждом рисунке стрелки указывают на один репрезентативный жизненно важный SGC. Увеличение: 200 крат.

Сокращение: SGC, спиральные ганглиозные клетки.

Диаметр SGC in vivo

Размер сомы измеряли для оценки влияния тестируемых веществ на размер клеток. Группа LNC-FITC показала значительное увеличение диаметра сомы между левым обработанным и правым контрольным ухом (14,00 ± 0,76 мкм [среднее ± стандартное отклонение] по сравнению с 13,14 ± 0,52 мкм; P <0,05). Еще более очевидное увеличение диаметра сомы наблюдалось между левым и правым ухом у животных, получавших ролипрам (13,78 ± 0,26 мкм против 12,73 ± 0,32 мкм; P <0.01). Диаметр SGC в группе LNC – FITC – ролипрам (слева: 13,91 ± 1,33 мкм по сравнению с правым. 12,68 ± 0,72 мкм) и в контрольной группе PBS (слева: 13,27 ± 0,56 мкм по сравнению с правой: 12,68 ± 0,79 мкм) существенно не различались. , хотя можно предположить разницу по тренду (). При сравнении диаметра сомы левого уха во всех группах значимых различий не выявлено. Такое же единство данных наблюдалось при сравнении правых ушей всех групп.

Обсуждение

Это исследование демонстрирует, что BDNF (50 нг / мл) демонстрирует наиболее эффективную защиту нейронов в отношении выживаемости культивированных SGC.Предыдущие исследования уже подтвердили максимальную выживаемость SGC с BDNF в этой концентрации. ³¹ Из-за этого свойства BDNF был выбран в качестве положительного контроля, хотя основное внимание уделялось изучению нейрозащитных эффектов ролипрама и ролипрама, содержащего LNC.

Чистое введение ролипрама не продемонстрировало эффективной защиты от SGC in vitro ни в одной из использованных концентраций. Это может быть связано с внутриклеточным механизмом действия ингибиторов фосфодиэстеразы-4.Ролипрам должен перемещаться в цитоплазму, где находится фосфодиэстераза 4. Попадая в цитоплазму, ролипрам ингибирует фосфодиэстеразу 4, что приводит к повышению уровня циклического аденозинмонофосфата (цАМФ). Протеинкиназа А, которая зависит от цАМФ, фосфорилирует белок, связывающий цАМФ-чувствительный элемент (CREB) в клеточном ядре. ³² Активированный CREB запускает транскрипцию BDNF, ³³ , что приводит к нейрозащитному эффекту. Чтобы вызвать этот эффект, было выбрано применение ролипрама через LNC для повышения внутриклеточной концентрации ролипрама, что впоследствии приводит к защите нейронов.

Результаты подтверждают повышение выживаемости SGC при использовании комбинации LNC – ролипрам. Разведение 1: 100 показало наилучшие результаты in vitro, поэтому это разведение также использовалось для экспериментов in vivo. Уменьшение эффектов разбавлений 1: 200 и 1: 300, вероятно, вызвано низкими концентрациями, тогда как разбавление 1:50 может оказывать токсическое действие на клеточный метаболизм. Недавние исследования позволяют предположить, что взаимные реакции между фосфолипидами оболочки частицы и клеточной мембраны могут вызывать дисбаланс в эндо- и экзоцитотических реакциях. ³⁴ Это соображение относится к предыдущим наблюдениям, выявленным при исследовании наночастиц полилизина. ³⁵ Другой эксперимент также показывает хорошую биосовместимость липидных нанокапсул с культурами фибробластов. Цитотоксические эффекты наблюдались только при концентрации выше 2,2 мг / мл. ³⁶ Наши собственные наблюдения выявили эффекты снижения выживаемости SGC уже в разведении 1:50 (0,9 мг / мл), предполагая, что нейрональные клетки более метаболически чувствительны.

Синергетический эффект ролипрама и наночастиц очевиден; введение ролипрама в чистом виде не оказало значительного влияния на выживаемость SGC.

Важно отметить, что мы также обнаружили отчетливый нейрозащитный эффект незагруженных частиц LNC – FITC. По сравнению с комбинацией LNC – FITC – ролипрам выживаемость SGC была значительно ниже, что должно быть вызвано ролипрамом полезной нагрузки; следовательно, экспериментальные группы различаются только этим признаком. Чтобы проверить, ответственны ли сами наночастицы или флуоресцеин FITC за нейрозащитный эффект частиц LNC-FITC, не загруженных лекарством, был проведен дополнительный эксперимент по культивированию SGC с LNC, не меченным FITC.Результаты доказывают, что сама частица отвечает за нейропротекторный эффект. Мы предполагаем, что положительный эффект разгруженных частиц вызван компонентом частиц ПЭГ. Вставленный в оболочку частицы, этот полимер защищает систему доставки лекарства от системы комплемента организма, чтобы поддерживать длительное время циркуляции в организме. ^{37 , 38} Кроме того, PEG используется для ковалентного связывания FITC.

Предыдущие эксперименты продемонстрировали нейропротекторные эффекты ПЭГ у собак, страдающих пролапсом межпозвонкового диска. ³⁹ Другие исследования моделей повреждения спинного мозга подтвердили положительные эффекты ПЭГ; поврежденные клетки буквально запечатывались этим полимером. ⁴⁰ Таким образом, примечательно, что наши LNC сами по себе являются нейрозащитными и подходят для доставки лекарств, таких как ролипрам, в клетки-мишени in vitro, чтобы значительно усилить этот защитный эффект.

После первичной потери волосковых клеток наблюдается прогрессирующее уменьшение длины нейритов и плотности SGC. ⁴¹ Чтобы обеспечить оптимальную электрическую стимуляцию с помощью кохлеарных имплантатов, желательно сохранение нейритов и, если возможно, их разрастание.Поэтому мы измерили длину нейритов SGC in vitro, чтобы оценить их рост в зависимости от различных условий тестирования. Ролипрам не влиял на рост нейритов SGC ни в одной из применяемых концентраций. Из-за того, что ролипрам ингибирует фосфодиэстеразу 4 в цитоплазме клеток, мы предполагаем, что лекарство не поглощалось нейронами и, следовательно, не могло вызвать биологический эффект на SGC. В отличие от этого, удлинение отростка нейритов было продемонстрировано, когда SGC обрабатывали ролипрамом, инкапсулированным в наночастицы LNC-FITC.Разведения 1: 100 и 1: 200 частиц LNC – FITC – ролипрам значительно увеличивали рост нейритов. Это косвенный признак LNC-опосредованного улучшения захвата ролипрама в SGC. Кроме того, клетки, обработанные LNC-FITC 1: 300, также показали значительный рост нейритов, вероятно, из-за компонента PEG, как описано ранее в отношении выживаемости нейронов. Более высокие концентрации (разведение 1:50) обеих экспериментальных групп индуцировали довольно короткие нейриты, что указывает на отрицательное влияние на SGC.Механизм, индуцированный ролипрамом, на удлинение нейритов четко не обнаружен, хотя может иметь место цАМФ-зависимая активация протеинкиназы А. ⁴² Исходя из этого, наши результаты подтверждают отчет Xu et al. О двухфазном эффекте аналога цАМФ цПТ-цАМФ на длину нейритов. Они смогли показать увеличенную длину при более низких концентрациях и уменьшенную длину при более высоких концентрациях. ⁴³ С другой стороны, в настоящем исследовании наночастицы, нагруженные ролипрамом, значительно удлиняли нейриты в разведении 1:50 по сравнению с ненагруженными LNC в разведении 1:50.Можно предположить, что это расхождение основано на ролипраме и что это открытие подтверждает гипотезу о том, что ролипрам положительно влияет на рост нейритов. До недавнего времени были доступны ограниченные исследования эффектов ролипрама и механизмов воздействия на нейрональные клетки. Для подтверждения или опровержения гипотез необходимы дальнейшие исследования.

Результаты измерения перикариального диаметра не показали значительных различий между экспериментальными группами, за исключением SGC, обработанных 1:50 LNC. Высокая концентрация LNC может вызывать отрицательные эффекты на метаболизм клетки, как описано ранее, что влияет на диаметр клетки.

Преинкубация DC с ролипрамом вызвала очень значимое дозозависимое ингибирование секреции TNF-α во всех тестируемых концентрациях (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ, 10 мкМ) после стимуляции LPS. Собранные данные соответствуют результатам предыдущего исследования ³⁴ , в котором также сообщалось о дозозависимом снижении LPS-стимулированных DC человека с помощью ролипрама. Комбинация LNC-FITC-ролипрам показывает аналогичное дозозависимое снижение TNF-α, хотя более слабые эффекты по сравнению с чистым введением могут быть вызваны недостаточным высвобождением полезной нагрузки во время инкубации в течение 24 часов.Другие группы LNC показали отсутствие или довольно слабое ингибирование TNF-α в концентрациях 0,01 мкМ, 0,1 мкМ и 1 мкМ. При микроскопическом исследовании концентрация наночастиц 10 мкМ оказывала токсическое действие на клетки. Также были видны гранулированные и деформированные клетки, а также кристаллические образования. Таким образом, низкие концентрации TNF-α в этих экспериментальных группах вызваны снижением жизнеспособности клеток, а не ингибированием TNF-α, что было подтверждено тестом жизнеспособности клеток (CellTiter 96 ^® AQueos One Solution Cell Proliferation Assay; Promega , Мэдисон, Висконсин; см. Дополнительные материалы).

За счет снижения транскрипции TNF-α посредством цАМФ-зависимых протеинкиназ ⁴⁴ ролипрам может облегчить воспаление, следовательно, TNF-α играет ключевую роль в провоспалительных процессах. В сочетании с кохлеарными имплантатами преимущества могут быть достигнуты за счет ингибирования постинсерционных воспалительных процессов.

Наши данные доказывают, что ролипрам проникает через клеточную мембрану DC и вызывает биологические реакции в этом типе клеток. Напротив, ролипрам не вызывает биологической реакции в SGC без поддержки испытанной системы доставки лекарств LNC.Даже если небольшое количество чистого ролипрама может влиять на нейронные клетки, инкапсуляция в наноносители будет полезной. Поскольку LNC-инкапсуляция ролипрама увеличивает выживаемость SGC и позволит в будущем осуществлять целевую доставку лекарств, этот подход будет экономически и клинически выгодным с точки зрения более низкой стоимости лекарств и уменьшения побочных эффектов.

Положительные результаты экспериментов in vitro, которые легли в основу проведенных исследований in vivo, не могут быть подтверждены in vivo.Сравнение между левыми ушами, обработанными испытуемым веществом, и правыми контрольными ушами (обработанными PBS) не выявило различий в плотности SGC. Единственное существенное различие было показано в контрольной группе, где обе стороны были засеяны PBS.

Эти результаты могут быть вызваны дополнительным перилимфатическим разбавлением исследуемых веществ, которое приводит к неэффективной концентрации. В будущих экспериментах можно будет изучить нейрозащитный эффект более высокой дозы частиц ролипрама LNC, хотя существует вероятность токсического воздействия на нейронные клетки.Путем введения высоких доз в основание улитки на базальные клетки может влиять высокая концентрация, прежде чем будет достигнуто желаемое разведение во всем объеме улитки. Кроме того, предполагается утечка введенных веществ через перилимфатический проток, поскольку был подтвержден контралатеральный перенос между обработанной и необработанной улиткой. ⁴⁵

Другой причиной разных результатов исследований in vitro и in vivo может быть использование разных видов разного возраста.С одной стороны, новорожденных крыс использовали для культивирования in vitro; с другой стороны, для исследований in vivo использовали взрослых морских свинок. Таким образом, предполагались различные трофические требования и экспрессия рецепторов для SGC у новорожденных и взрослых, которые, вероятно, различаются на молодой и взрослой стадиях. ⁹ Неоднородные результаты могут быть связаны с неадекватной трофической поддержкой на взрослой стадии эксперимента in vivo.

Что касается увеличения дегенерации SGC после прекращения действия нейротрофических факторов, ⁹ можно предположить предварительную защиту для тестируемых веществ, используемых в этом исследовании.При однократном введении нейропротекторный эффект может быть достигнут в первый период исследования. Положительный эффект можно было заметить после ускоренной дегенерации, как описано Гиллеспи и его коллегами. ⁹ В более позднем эксперименте не удалось воспроизвести эффект увеличения дегенерации SGC после прекращения действия нейротрофических факторов, тогда как для измерения порога слуха была проведена электрическая стимуляция, ²⁸ , которые сами по себе обладают нейропротекторным потенциалом. ^{46 , 47}

Как упоминалось ранее, единственное существенное различие в плотности SGC in vivo было обнаружено между обработанными PBS ушами контрольной группы. Учитывая, что плотность SGC обоих ушей должна быть одинаковой из-за равного обращения, можно предположить, что разница основана на дополнительной травме из-за инъекции PBS и манипуляций, которые увеличивают вызванную глухотой дегенерацию SGC с левой стороны. Объяснением этому также может быть ручность хирурга.Но плотность SGC левого уха была такой же, как и в одной из других экспериментальных групп. Кроме того, плотность SGC правых ушей, обработанных PBS, в группе PBS была выше, чем плотность всех других правых ушей, обработанных PBS, в других экспериментальных группах. Следовательно, это не повышенная дегенерация SGC в левом ухе, обработанном PBS, в контрольной группе, а сниженная дегенерация SGC в правом ухе, обработанном PBS, в группе PBS. У нас пока нет объяснения этому эффекту.

Нам удалось продемонстрировать значительно увеличенный диаметр сомы обработанных ушей в группе LNC – FITC и группе ролипрама in vivo.В группе LNC – FITC – ролипрам диаметр сомы SD был относительно широким, и даже если график () выглядит так, как будто может существовать значительная разница между леченными и нелеченными ушами этой группы, статистически значимой разницы не наблюдалось. В нескольких предыдущих исследованиях сообщалось об увеличении диаметра сомы после лечения нейротрофическими факторами, такими как BDNF, у оглушенных животных. ^{48 , 49} Основные механизмы увеличения диаметра сомы и функционального воздействия еще не известны, что затрудняет окончательную оценку этого параметра.

Заключение

Это исследование демонстрирует SGC-защитные эффекты LNC-опосредованной доставки ролипрама in vitro с точки зрения зависимой от концентрации выживаемости нейронов и разрастания нейритов. Мы предполагаем, что этот биологический эффект косвенно демонстрирует, что липидные наночастицы улучшают транспорт ролипрама через мембрану нейронных клеток в цитоплазму нейронов, где увеличение ролипрама и LNC вызывает значительную защиту нейронов. Кроме того, нам удалось продемонстрировать сильный противовоспалительный эффект ролипрама при культивировании с активированными дендритными клетками.Комбинация LNC-ролипрама также оказывала противовоспалительный эффект, хотя и более слабый, что могло быть связано со скоростью высвобождения ролипрама из LNC.

Исследование in vivo не подтвердило результаты in vitro, что могло быть связано либо с перилимфатическим разбавлением, либо с недостаточной продолжительностью применения препарата.

Даже если результаты in vitro, о которых мы смогли сообщить, не могли быть подтверждены in vivo, мы по-прежнему считаем, что ролипрам является многообещающим лекарством для защиты нейронов при терапии внутреннего уха, и что LNC являются возможной системой доставки лекарств для лечения. клеток внутреннего уха при модификации методов in vivo.В будущей работе необходимо тщательно изучить влияние LNC на SGC и DC и определить правильное соотношение LNC / ролипрам, чтобы вызвать биологический эффект in vivo. Кроме того, могут быть проведены эксперименты для изучения влияния LNC / ролипрама на пролиферацию соединительной ткани вокруг имплантированного устройства in vivo. Контролируемое поглощение LNC клетками улитки должно быть исследовано, чтобы уменьшить количество LNC, которое необходимо наносить. Тем не менее, в настоящее время LNC являются многообещающими инструментами для доставки лекарств во внутреннее ухо, поскольку они нетоксичны для ткани внутреннего уха in vitro и in vivo, если применяются в достаточном разведении.Они также обеспечивают биологический эффект ролипрама in vitro. Это открывает захватывающую возможность использования этих наночастиц в качестве системы доставки лекарств для структур внутреннего уха.

Дополнительный материал

Тест жизнеспособности

Для определения жизнеспособности дендритных клеток в конце эксперимента (день 10) был проведен анализ пролиферации клеток в одном водном растворе CellTiter 96 ^® (Promega, Madison, WI). Кроме того, клетки подвергали микроскопическому исследованию, чтобы отметить любые морфологические различия.Это исследование позволяет сделать вывод о возможном влиянии исследуемых веществ. Результаты теста на жизнеспособность выявляют возможные клеточные нарушения, вызванные тестируемыми веществами. Таким образом, более низкая продукция фактора некроза опухоли-α (TNF-α) зависит не только от ингибирования продукции цитокинов, но и от повышенной дегенерации клеток. Этот анализ основан на никотинамидадениндинуклеотидфосфате (НАДФН) и никотинамидадениндинуклеотиде (НАДН), которые катализируют превращение желтого метилтетразолия в фиолетовый формазановый продукт.НАДФН / НАДН обнаруживаются только в живых клетках. Следовательно, изменение цвета на 490 нм, измеренное фотометрическим анализом, является показателем жизнеспособности клеток. Полученное количество формазана прямо пропорционально количеству жизнеспособных клеток. В дополнительной таблице 1 показаны измеренные значения.

Измерения AABR

Измерения акустически вызванной слуховой реакции ствола мозга были выполнены для определения порога слышимости всех экспериментальных животных до и после оглушения для проверки успешности процедуры.Поскольку используемая система допускает стимуляцию с максимальным уровнем звукового давления 90 дБ, а пороги слышимости всех животных достигают или превышают этот уровень через 7 и 21 день после оглушения, пороги слышимости отображаются на уровне 90 дБ (дополнительный рисунок 1).

Рисунок S1

Путем частотно-зависимых измерений AABR в день 0 у всех животных был обнаружен нормальный порог слуха (синяя и розовая линии; среднее ± стандартное отклонение).

Примечания: Результаты измерений на 7 и 21 день показаны красной линией.После оглушения ни у одного из животных не сохранился остаточный слух. Порог слышимости всех животных составлял 90 дБ SPL или выше на 7 день и не восстанавливался до последнего измерения на 21 день.

Сокращения: AABR, акустически вызванная слуховая реакция ствола мозга; SD, стандартное отклонение.

Таблица S1

Значения жизнеспособности дендритных клеток после инкубации с тестируемыми соединениями и стимуляции LPS; n = 3 на вещество и концентрацию

9024 90ITC LN242 F0247 0,784493 0,1 мкмоль

Это исследование было поддержано 6-й рамочной программой Европейского сообщества по исследованиям, технологическому развитию и демонстрации (Доставка лекарств на основе нанотехнологий. Номер контракта: NMP4-CT-2006-026556, сокращение проекта: NANOEAR).Мы хотели бы поблагодарить доктора Хеннинга Фойгта из Ганноверской медицинской школы за его поддержку в области управления качеством.

Сноски

Раскрытие информации

Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов в этой работе.

Список литературы

1. Селимоглу Э. Ототоксичность, вызванная аминогликозидами. Curr Pharm Des. 2007. 13 (1): 119–126. [PubMed] [Google Scholar] 2. Ямане Х., Накаи Й., Кониси К. Фуросемид-индуцированное изменение пути лекарственного средства в улитку. Acta Otolaryngol Suppl. 1988. 447: 28–35.[PubMed] [Google Scholar] 3. Ленарц Т. Кохлеарные имплантаты: чего можно достичь? Am J Otol. 1997; 18 (Дополнение 6): S2–3. [PubMed] [Google Scholar] 4. Шибата С.Б., Буденц С.Л., Боулинг С.А., Пфингст Б.Е., Рафаэль Ю. Поддержание и регенерация нервов в поврежденной улитке. Послушайте Res. 2011. 281 (1–2): 56–64. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Альтшулер Р.А., Чо Й., Юликоски Дж., Пирвола Ю., Магал Е., Миллер Дж. М.. Спасение и восстановление чувствительных нервов после деафферентации нейротрофическими факторами. Ann N Y Acad Sci.1999; 884: 305–311. [PubMed] [Google Scholar] 6. Incesulu A, Nadol JB., Jr. Корреляция акустических пороговых значений и выживаемости спиральных ганглиозных клеток при тяжелой и глубокой нейросенсорной тугоухости: последствия для кохлеарной имплантации. Анн Отол Ринол Ларингол. 1998. 107 (11 Pt 1): 906–911. [PubMed] [Google Scholar] 7. Гиллеспи Л.Н., Шепард РК. Клиническое применение нейротрофических факторов: потенциал первичной защиты слуховых нейронов. Eur J Neurosci. 2005. 22 (9): 2123–2133. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.Миллер Дж.М., Чи Д.Х., О’Киф Л.Дж., Крушка П., Рафаэль Й., Альтшулер Р.А. Нейротрофины могут увеличивать выживаемость клеток спирального ганглия после потери внутренних волосковых клеток. Int J Dev Neurosci. 1997. 15 (4–5): 631–643. [PubMed] [Google Scholar] 9. Гиллеспи Л.Н., Кларк Г.М., Бартлетт П.Ф., Марзелла П.Л. BDNF-индуцированная выживаемость слуховых нейронов in vivo: прекращение лечения приводит к ускоренной потере эффектов выживания. J Neurosci Res. 2003. 71 (6): 785–790. [PubMed] [Google Scholar] 10. Rejali D, Lee VA, Abrashkin KA, Humayun N, Swiderski DL, Raphael Y.Кохлеарные имплантаты и генная терапия ex vivo BDNF защищают нейроны спирального ганглия. Послушайте Res. 2007. 228 (1–2): 180–187. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Яги М., Канзаки С., Кавамото К. и др. Нейроны спирального ганглия защищены от дегенерации с помощью генной терапии GDNF. J Assoc Res Otolaryngol. 2000. 1 (4): 315–325. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Хан Дж. Дж., Мхатре А. Н., Уэринг М. и др. Экспрессия трансгена в улитке морской свинки, опосредованная вектором переноса генов, полученным из лентивируса.Hum Gene Ther. 1999; 10 (11): 1867–1873. [PubMed] [Google Scholar] 13. Судзуки М., Ямасоба Т., Сузукава К., Кага К. Доставка гена аденовирусного вектора через мембрану круглого окна у морских свинок. Нейроотчет. 2003. 14 (15): 1951–1955. [PubMed] [Google Scholar] 15. Хо С.Т., Петтис Р.М., Мхатре А.Н., Лалвани А.К. Улитковая микроинъекция и ее влияние на слуховую функцию у морских свинок. Eur Arch Otorhinolaryngol. 2000. 257 (9): 469–472. [PubMed] [Google Scholar] 17. Шепер В., Вольф М., Шолль М. и др. Новые потенциальные носители лекарственных средств для лечения внутреннего уха: сверхразветвленный полилизин и липидные нанокапсулы.Наномедицина (Лондон) 2009; 4 (6): 623–635. [PubMed] [Google Scholar] 18. Ньюболд С., Ричардсон Р., Хуанг К.К., Милоевич Д., Коуэн Р., Шеперд Р. Модель in vitro для исследования изменений импеданса при росте клеток и электрической стимуляции: последствия для кохлеарных имплантатов. J Neural Eng. 2004. 1 (4): 218–227. [PubMed] [Google Scholar] 19. Бомонт Э., Уитакер С.М., Берк Д.А., Гетман М., Онифер С.М. Влияние ролипрама на олигодендроциты взрослых крыс и функциональное восстановление после контузионного повреждения шейного отдела спинного мозга.Неврология. 2009. 163 (4): 985–990. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Уитакер С.М., Бомонт Э., Уэллс М.Дж., Магнусон Д.С., Гетман М., Онифер С.М. Ролипрам снижает острую гибель олигодендроцитов в вентролатеральном канатике взрослых крыс после контузионного повреждения шейного отдела спинного мозга. Neurosci Lett. 2008. 438 (2): 200–204. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Zhu J, Mix E, Winblad B. Антидепрессивное и противовоспалительное действие ролипрама на центральную нервную систему. CNS Drug Rev.2001. 7 (4): 387–398. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22. Krause W, Kuhne G, Sauerbrey N. Фармакокинетика (+) – ролипрама и (-) – ролипрама у здоровых добровольцев. Eur J Clin Pharmacol. 1990. 38 (1): 71–75. [PubMed] [Google Scholar] 23. Heurtault B, Saulnier P, Pech B, Proust JE, Benoit JP. Новый процесс получения липидных наноносителей, основанный на обращении фаз. Pharm Res. 2002. 19 (6): 875–880. [PubMed] [Google Scholar] 24. Бедно А., Сольнье П., Антон Н. и др. Пегилированные нанокапсулы, полученные без использования органических растворителей: оценка их скрытных свойств.Pharmaceutical Res. 2006. 23 (9): 2190–2199. [PubMed] [Google Scholar] 25. Lefebvre PP, Malgrange B, Staecker H, Moghadass M, Van de Water TR, Moonen G. Нейротрофины влияют на выживаемость и нейритогенез взрослых поврежденных слуховых нейронов in vitro. Нейроотчет. 1994. 5 (8): 865–868. [PubMed] [Google Scholar] 26. Гиллеспи Л.Н., Кларк Г.М., Бартлетт П.Ф., Марзелла П.Л. LIF более эффективен, чем BDNF, в стимулировании роста нейритов слуховых нейронов млекопитающих in vitro. Нейроотчет. 2001. 12 (2): 275–279. [PubMed] [Google Scholar] 27.Lutz MB, Kukutsch N, Ogilvie AL, et al. Усовершенствованный метод культивирования для получения больших количеств высокочистых дендритных клеток из костного мозга мыши. J Immunol Methods. 1999. 223 (1): 77–92. [PubMed] [Google Scholar] 28. Агтерберг MJ, Versnel H, ван Дейк LM, de Groot JC, Klis SF. Повышенная выживаемость клеток спирального ганглия после прекращения лечения нейротрофическим фактором головного мозга у оглушенных морских свинок. J Assoc Res Otolaryngol. 2009. 10 (3): 355–367. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 29.Виверо Р.Дж., Джозеф Д.Е., Анджели С. и др. Основание дексаметазона сохраняет слух от потери слуха, вызванной электродной травмой. Ларингоскоп. 2008. 118 (11): 2028–2035. [PubMed] [Google Scholar] 30. Верснель H, Агтерберг MJ, де Гроот JC, Smoorenburg GF, Klis SF. Динамика электрофизиологии и морфологии улитки после комбинированного приема канамицина и фуросемида. Послушайте Res. 2007. 231 (1–2): 1–12. [PubMed] [Google Scholar] 31. Wefstaedt P, Scheper V, Lenarz T., Stover T. Влияние нейротрофического фактора, полученного из мозга / нейротрофического фактора, полученного из линии глиальных клеток, на слуховые нейроны не ограничивается дексаметазоном.Нейроотчет. 2005; 16 (18): 2011–2014. [PubMed] [Google Scholar] 32. Deree J, Martins JO, Melbostad H, Loomis WH, Coimbra R. Понимание регуляции производства TNF-альфа в мононуклеарных клетках человека: эффекты неспецифического ингибирования фосфодиэстеразы. Клиники (Сан-Паулу) 2008; 63 (3): 321–328. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Тао X, Финкбейнер S, Арнольд Д.Б., Шайвиц А.Дж., Гринберг МЭ. Приток Ca2 + регулирует транскрипцию BDNF с помощью механизма, зависимого от транскрипционного фактора семейства CREB.Нейрон. 1998. 20 (4): 709–726. [PubMed] [Google Scholar] 34. Вольф М. Таргетированная доставка лекарств на основе 3g-нанотехнологий с использованием внутреннего уха морской свинки в качестве модельного органа-мишени [диссертация] Ганновер; Германия: Университет ветеринарной медицины; 2009. С. 91–92. [Google Scholar] 35. Сантини М. Т., Каметти С., Индовина П. Л., Морелли Г., Донелли Г. Полилизин вызывает изменения электрических свойств мембран клеток K562. J Biomedical Mater Res. 1997. 35 (2): 165–174. [PubMed] [Google Scholar] 36. Чжан Ю., Чжан В., Лоблер М. и др.Биосовместимость липидных нанокапсул во внутреннем ухе после нанесения мембраны с круглым окном. Int J Pharm. 2011. 404 (1-2): 211-219. [PubMed] [Google Scholar] 37. Ким BY, Рутка JT, Чан WC. Наномедицина. N Engl J Med. 2010. 363 (25): 2434–2443. [PubMed] [Google Scholar] 38. Фонарбург А., Пассирани С., Дезиго Л. и др. Инкапсуляция молекул ДНК в биомиметические липидные нанокапсулы. Биоматериалы. 2009. 30 (18): 3197–3204. [PubMed] [Google Scholar] 39. Лаверти PH, Лесковар А., Бреур Г.Дж. и др. Предварительное исследование внутривенных сурфактантов у собак с параличом нижних конечностей: полимерная терапия при клинической травме спинного мозга у собак.J Neurotrauma. 2004. 21 (12): 1767–1777. [PubMed] [Google Scholar] 40. Кооб А.О., Колби Дж. М., Боргенс РБ. Восстановление поведения после черепно-мозговой травмы после реконструкции мембраны полиэтиленгликолем. J Biol Eng. 2008; 2: 9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 41. Спендлин Х. Факторы, вызывающие ретроградную дегенерацию улиткового нерва. Ann Otol Rhinol Laryngol Suppl. 1984; 112: 76–82. [PubMed] [Google Scholar] 42. Агла Ч., Гордон Т., Поссе де Шавес Э. цАМФ способствует росту и распространению нейритов через протеинкиназу А, но независимо от активации Erk в культивируемых мотонейронах крысы.Нейрофармакология. 2008; 55 (1): 8–17. [PubMed] [Google Scholar] 43. Сюй Н., Энгберс Дж., Хаджа С., Сюй Л., Кларк Дж. Дж., Хансен М. Влияние цАМФ и протеинкиназы А на длину нейритов нейронов спирального ганглия. Послушайте Res. 2012. 283 (1–2): 33–44. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 44. Heystek HC, Thierry AC, Soulard P, Moulon C. Ингибиторы фосфодиэстеразы 4 снижают выработку воспалительных цитокинов дендритными клетками человека и способность к поляризации Th2. Int Immunol. 2003. 15 (7): 827–835. [PubMed] [Google Scholar] 45.Stoever T, Yagi M, Raphael Y. Перенос гена улитки: круглое окно по сравнению с прививкой кохлеостомии. Послушайте Res. 1999. 136 (1–2): 124–130. [PubMed] [Google Scholar] 46. Митчелл А., Миллер Дж. М., Фингер П. А., Хеллер Дж. В., Рафаэль Ю., Альтшулер Р. А.. Влияние хронической высокоскоростной электростимуляции на улитку и восьмой нерв у оглушенной морской свинки. Послушайте Res. 1997. 105 (1–2): 30–43. [PubMed] [Google Scholar] 47. Чикар JA, Colesa DJ, Swiderski DL, Di Polo A, Raphael Y, Pfingst BE. Сверхэкспрессия BDNF аденовирусом с одновременной электрической стимуляцией улучшает пороги кохлеарного имплантата и выживаемость слуховых нейронов.Послушайте Res. 2008. 245 (1–2): 24–34. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 48. Глюкерт Р., Битче М., Миллер Дж. М. и др. Связанные с деафферентацией изменения афферентных и эфферентных процессов в улитке морской свинки и афферентная регенерация с помощью хронического интраскалярного нейротрофического фактора головного мозга и кислого фактора роста фибробластов. J Comp Neurol. 2008. 507 (4): 1602–1621. [PubMed] [Google Scholar]

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Возникающая роль нанотехнологий в уходе за кожей

Основные моменты

•

Обзор применения наноматериалов в рецептурах косметических продуктов

•

Преимущество использования наночастиц в качестве активных ингредиентов в косметических рецептурах

•

Приведен обзор токсикологических последствий нанокосметики

•

Прогнозируются будущие перспективы за пределами нанокосметики с использованием биоразнообразия и экологически чистых материалов

Аннотация

Роль косметических продуктов в нашем обществе быстро меняется , и их использование все чаще рассматривается как важный вклад в личное благополучие.Это говорит о необходимости детального выяснения использования наночастиц (НЧ) в косметике. Цель настоящей работы – предложить критический и всесторонний обзор, в котором обсуждается влияние использования наноматериалов в передовых косметических рецептурах, подчеркивая положительные эффекты их широкого использования в продуктах следующего поколения, несмотря на сохраняющиеся предубеждения относительно применения нанотехнологий в косметике. Обсуждение здесь включает интерпретацию данных, лежащих в основе общей информации, представленной на этикетках продуктов для составов, уже доступных на рынке, информации, в которой часто отсутствуют детали, идентифицирующие конкретные компоненты продукта, особенно когда используются наноматериалы.Основное внимание в этом обзоре уделяется уходу за кожей, поскольку считается, что именно в этом секторе рынка косметики влияние нанотехнологий проявляется наиболее существенно. На сегодняшний день было продемонстрировано, что нанотехнологии улучшают характеристики косметики различными способами: 1) повышая эффективность захвата и проникновения активного ингредиента через кожу, 2) контролируя высвобождение лекарственного средства, 3) повышая физическую стабильность, 4) улучшая увлажняющая способность и 5) лучшая защита от ультрафиолета.Особое внимание уделяется влиянию наночастиц, содержащихся в полутвердых препаратах, на проблемы проникновения через кожу. В свете возникающих опасений по поводу токсичности наночастиц целый раздел был посвящен перечислению подробных примеров нанокосметических продуктов, безопасность которых была исследована.

Добавить комментарий Отменить ответ

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Комментарий *

Имя *

Email *

Сайт

Ролипрам 0.01 мкмоль	0,414	0,399	0,391
Ролипрам 0,1 мкмоль	0,406	0,419	0,417
Ролипрам 1 мкмоль		0,421	0,367	0,433
LNC – FITC – ролипрам 0,01 мкмоль	0,502	0,399	0,416
LNCipram – FITC.1 мкмоль	0,411	0,374	0,438
LNC – FITC – ролипрам 1 мкмоль	0,446	0,499	0,455
0,455
LN247 F0247
LNC-Blank 0,01 мкмоль	0,497	0,482	0,476
LNC-Blank 0,1 мкмоль	0,42	0,431	0,418	0,418	0,451	0,463
LNC – Blank 10 мкмоль	0,172	0,249	0,186
LNC – FITC 0,01 мкмоль								0,429	0,42	0,359
LNC – FITC 1 мкмоль	0,519	0,474	0,446
LNC – FITC 1067	0,654	0,619
ДМСО (контроль транспортных средств)	0,32	0,319	0,322
ЛПС (положительный контроль)	0,518	0,4254