Корень волоса: Все, что нужно знать о волосах

Содержание

Корень волоса – это… Что такое Корень волоса?

Корень волоса

часть волоса, находящаяся в толще кожи.

1. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг. 2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г. 3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. — М.: Советская энциклопедия. — 1982—1984 гг.

  • Ко́раньи — де ла Ка́мпа симпто́м
  • Ко́рень зу́ба

Смотреть что такое “Корень волоса” в других словарях:

  • корень волоса — (radix pili, LNH; син. волосяной корень) часть волоса, находящаяся в толще кожи …   Большой медицинский словарь

  • КОРЕНЬ — муж. корешек, шечек, коренек ·умалит. корнишка презрительное, корнища увеличительное, подземная часть всякого растения.

    У деревьев различают становой и боковые корни, а при них корешки и мелкие мочки. вбирающие влагу. Корень бывает: луковичный,… …   Толковый словарь Даля

  • КОРЕНЬ — КОРЕНЬ, рн , мн. рни, рней, муж. 1. Подземная часть растения, служащая для укрепления его в почве и всасывания из неё воды и питательных веществ. Главный, боковой, придаточный к. Воздушные корни (у лиан и нек рых других растенийвысоко над землёй …   Толковый словарь Ожегова

  • Корень (значения) — Корень: В Викисловаре есть статья «корень» Корень (в ботанике)  вегетативный осевой подземный орган растения, обладающий сп …   Википедия

  • корень — сущ., м., употр. сравн. часто Морфология: (нет) чего? корня, чему? корню, (вижу) что? корень, чем? корнем, о чём? о корне и на корню; мн. что? корни, (нет) чего? корней, чему? корням, (вижу) что? корни, чем? корнями, о чём? о корнях 1. Корень это …   Толковый словарь Дмитриева

  • корень — ко/рня, (о, на, в) ко/рне мн. ко/рни, е/й, я/м, (о) я/х, м. 1) Подземная часть растения, удерживающая его в почве и служащая для всасывания влаги и питательных веществ. У саженца повреждены корни. Уничтожать сорняки с корнем. Целебный корень.… …   Популярный словарь русского языка

  • корень — рня; мн. корни, ей; м. 1. Подземная часть растения, посредством которой оно укрепляется в почве и получает из земли воду с растворёнными в ней минеральными веществами. Корни деревьев. Длинный к. К. жизни (о женьшене). Сгноить урожай на корню (в… …   Энциклопедический словарь

  • КОРЕНЬ — 1. В математике – любое число, которое при умножении его на само себя данное число раз дает данный результат; например, 2 – второй (или квадратный) корень из 4, третий (или кубический) корень из 8, четвертый корень из 16 и т.д. 2. В лингвистике – …   Толковый словарь по психологии

  • корень — рня; мн. ко/рни, е/й; м. см. тж. в корне, на корню, корешок, корневой 1) а) Подземная часть растения, посредством которой оно укрепляется в почве и получает из земли воду с растворёнными в ней минеральными веществами …   Словарь многих выражений

  • Корень — I м. 1. Вросшая в землю часть растения, через которую оно всасывает соки из почвы. отт. Древесина или вещество такой части растения. отт. разг. Лекарственный препарат или настой, приготовляемый из такой части некоторых растений. 2. Внутренняя,… …   Современный толковый словарь русского языка Ефремовой

  • Корень — I м. 1. Вросшая в землю часть растения, через которую оно всасывает соки из почвы. отт. Древесина или вещество такой части растения. отт. разг. Лекарственный препарат или настой, приготовляемый из такой части некоторых растений. 2. Внутренняя,… …   Современный толковый словарь русского языка Ефремовой

добираемся до самой сути проблемы депиляции

Мы принимаем наши волосы, как некую данность, они растут там, где нам этого хочется, а если где-то мешают – мы легко можем от них избавиться. Мы видим только сами волоски на поверхности нашей кожи, совершенно не представляя, что под ней они являют собой сложную и законченную систему, работу которой важно учитывать при выборе метода депиляции.

Как происходит депиляция

A – волосяной стержень
B – гладкая волосяная мышца
C – волосяная луковица
D – сальная железа
E – внутренняякорневаяоболочка
F – волосяной сосочек1

Глядя на схему строения волоса, можно достаточно точно представить, что происходит с волосом, когда используются различные способы его удаления.

Бритье

При движении острого лезвия по поверхности кожи, волоски срезаются максимально близко к коже, но вся остальная подкожная часть системы волос остается целой и невредимой и вновь готовой к росту. Поэтому эффект от бритья весьма непродолжительный:  щетина появляется уже через несколько часов, а сбритые волосы отрастают вновь через несколько дней.

Кремы для депиляции

Почти таким же образом действуют на волос кремы для депиляции. Они растворяют волос у поверхности кожи, но не задевают его корень. Примерно через 4 дня после применения крема для депиляции волоски начинают отрастать. Однако есть и дополнительные преимущества кремов перед бритьем волос, заключающееся в том, что при нанесении часть крема проникает глубже в фолликул и разрушает волос ниже поверхности кожи, а кроме того, не образует острых колющих краев волоса. Поэтому с каждой депиляцией отрастающие вновь волоски становятся все тоньше, а ощущение гладкости и мягкости кожи остается дольше.

Депиляция воском

При депиляции воском происходит полное удаление волоса. Взглянув на рисунок, мы поймем, что при использовании подобного метода, удаляется не только сам волос, но и его луковица. Фолликулу необходимо примерно 4 недели для формирования нового волоса из вновь образованной луковицы.

Зрим в корень

Теперь, когда мы разобрались в системе роста и развития волос, выбирать способ депиляции будет проще. Если вам не нравится ваш метод депиляции, поскольку он борется только с видимыми волосками, попробуйте способ, который удаляет не только сам волос, но и затрагивает всю систему его роста и развития.  



1 http://dermatology.about.com/cs/hairanatomy/a/hairbiology.htm

Лазерная эпиляция волос: виды и стоимость

Наконец настал тот тяжелый момент, когда вам надоела постоянная эпиляция волос в проблемных зонах, и тут на помощь приходит лазерная эпиляция! В косметологии применяются три типа лазера: александритовый, неодимовый и диодный. По соотношению плюсов и минусов мы бы рекомендовали именно последний. О нем и пойдет речь в статье.

Диодная лазерная эпиляции: описание процедуры

Это один из самых безопасных видов эпиляции, при котором направленным лучом разрушают фолликул волоса изнутри. Фолликул – это корень волоса. Его также называют луковицей. При разрушении фолликула посредствам лазерной эпиляции, старый волос выпадает, а новый не начинает расти несколько лет. Это и является основным эффектом и главным преимуществом, которым пользуется лазерная эпиляция. При этом в большинстве случаев не возникает никаких побочных эффектов и последствий, т. е. не обжигается кожа, не возникает неприятного зуда, не происходит покраснения и прочих раздражений.

Как это происходит? Волос содержит пигмент, называемый меланином. Он находится в стержне волоса и в волосяном фолликуле. Меланин поглощает световые волны длиной в диапазоне 700 – 800 нм. Под воздействием лазерного излучения меланин нагревается и вместе с этим разрушаются соседние клетки ростковой зоны волоса – матрикса. Вместе с этим разрушаются кровеносные сосуды и сосуды лимфы, питающие волос. Это и приводит к выпадению волоса и прекращению его дальнейшего роста.

Диодные аппараты для эпиляции относятся к классу новых разработок. Использование предыдущего опыта привело к устранению большинства недостатков устройств предыдущего поколения. Но все-таки они есть.Что происходит с волосом до, после и во время процедуры ЛЭ

Какие могут быть минусы во время и после лазерной эпиляции?

  1. В редких случаях может наблюдаться дискомфорт во время процедуры.
    Разумеется, понятие дискомфорт для каждого свое – “как комарик укусил” – понятие растяжимое!
  2. Эффект не моментален. Волосы выпадают в течении нескольких дней. Однако не беспокойтесь – это происходит равномерно и эстетически никак не портит проэпилированную зону.
  3. Лазерная эпиляция даже диодным аппаратом не одинаково эффективна для разных типов волос. Более темные волосы, растущие на светлой коже, удалять на много проще, чем их блондинистых братьев. Объяснение этому кроется в законах физики. Почему летом на солнцепеке мы предпочитаем белую одежду черной? Потому что черный цвет быстрее нагревается под воздействием солнечных лучей. Такой же эффект возникает и в случае лазерного луча, который, преобразовываясь в тепловую энергию, разрушает фалликул волоса. А в случае, если темные волосы растут на светлой коже, эффект тем более возрастает.

Кроме минусов, которые легко переносятся, существуют и противопоказания к лазерной эпиляции.

К ним относятся беременность, заболевания кожи, онкологические заболевания, большое количество родинок в эпилируемом месте и ряд других, о которых вам обязаны рассказать в салоне эпиляции.

Цены на лазерную эпиляцию

Разумеется, цены варьируются от уровня салона, региона его нахождения и конечно же объема работ.

Процедура может быть проведена за один прием, но, скорее всего, особенно в случае если этот вид эпиляции проводится в первый раз, потребуется несколько заходов, поэтому придется набраться терпения! Количество процедур в основном зависит от типа роста волос. Более густые придется удалять дольше, площадь проблемной зоны также может существенно отличаться от человека к человеку. Но главное, что рядом с удаленным фалликулом просыпается ранее уже существовавший. В спящем виде он не давал роста волосу, но теперь и его придется удалить. Таких спящих фалукулов может быть несколько и ими займуться на следующих сеансах. Но, не беспокойтесь, луковица волоса – это не сказочная Гидра, на месте отрубленных голов не вырастают все новые и новые.

Какое количество процедур потребуется для того, чтобы забыть на несколько лет об этой проблеме, и соответственно их стоимость, вам определят в салоне. Но в среднем это три-четыре сеанса.

Цены на лазерную эпиляцию также зависят от того, на каких проблемных зонах она используется.

Ниже мы приводим средние цены качественного салона, работающего в Москве:

  • Линия бикини – 5000
  • Глубокое бикини – 7000
  • Верхняя губа – 1 500
  • Подбородок – 2 000
  • Межбровная зона – 1 500
  • Щеки – 3 000
  • Баки – 2 000
  • Шейная область спереди – 3 000
  • Плечи – 5 000
  • Предплечья – 4 000
  • Подмышечные области – 3 500
  • Грудь – 2 000
  • Грудь мужская – 9 000
  • Спина – 4 500
  • Спина мужская – 9 000
  • Белая линия живота – 2 000
  • Линия бикини стандартное – 5 000
  • Бикини глубокое – 7 000
  • Ноги – 15 000
  • Бедра – 10 000
  • Голени – 7 000
  • Руки – 7 000
  • Ягодицы – 6 000
  • Пальцы ног – 1 500
  • Пальцы рук – 1 500
  • Колени – 3 500
  • Руки до локтя – 4 000
  • Руки полностью- 7 000

При исследовании были взяты рублевые цены за один сеанс, так что учтите, их надо будет умножить на количество посещений.

Мы бы, кстати, рекомендовали выбирать салон именно по средней цене на процедуру: слишком низкая может означать потерю уровня обслуживания, а завышение зачастую не оправдывается качеством эпиляции.

Сравнение цены на лазерную эпиляцию и других методов удаления волос.

С одной стороны, процедура может показаться дорогой. Например, как мы писали выше, лазерная эпиляция бикини обойдется вам в районе 5000 р. за сеанс, в то время как посредствам воска это выйдет в среднем 700 р. Казалось бы, разница очевидна. Но с другой стороны, стоит задуматься о том сколько раз вы должны будете сделать эпиляцию воском за несколько лет? Сколько это в итоге будет стоить? А сколько времени вы потратите? А оставаться красивой всегда – бесценно!

Нужна ли подготовка к лазерной эпиляции?

Ответ – да – у вас будет домашнее задание:) Однако с ним справится любой. Вам всего лишь ничего не надо делать:) И вот что именно не делать:

  • Не пользоваться для увлажнения зон эпиляции кремами, маслами и иными подобными средствами за неделю до эпиляции. Для лучшего эффекта кожа перед сеансом должна быть сухой.
  • Пару недель перед лазерной эпиляцией постарайтесь не загорать, т.е. не просто не надо валяться на пляже или посещать солярий, но и желательно в целом избегать длительного контакта с солнечными лучами. Это не значит, конечно, вообще на улицу не выходить.
  • За месяц до посещения салона не пользоваться для устранения волос в проблемных зонах иными способами эпиляции. Например, не применять воск, шугаринг, не выщипывать волосы. Идеально если вы явитесь в салон с длиной волосков около 2-х мм. Вы заслужите благодарность мастера. Дело в том, что если волосы длиннее, то при проведении процедуры они могут плавиться и вызвать лишние неприятные ощущения. А если значительно короче, то это сделает процедуру менее эффективной. Вам же этого не надо!

В довершении несколько слов о лазерной эпиляции для мужчин

Многие мужчины выбирают лазерную эпиляцию лица вместо ежедневного бритья. И на то есть свои основания: во-первых, ежедневное бритье вызывает раздражение. во-вторых, это избавляет от проблемы вросших волос. А поваляться в кровати лишние пять минут – снова бесценно!

Кроме того, мужчины часто используют этот вид процедуры для удаления волос на спине. И тут речь, скорее, о вопросе эстетики, нежели об иных аспектах эпиляции.

Так что лазерная эпиляция пользуется спросом не только у женщин, но и у сильного пола!

Отличия эпиляции и депиляции | Асмедия

Красивую современную женщину сложно представить без регулярных процедур по уходу за собой: скрабы, маски, маникюр, педикюр, удаление ненужных волос – эти процедуры каждая из нас проходит по нескольку раз в месяц. Заметим, что большая часть этого доставляет нам удовольствие – за исключением, пожалуй, удаления волос. Мысль о том, что снова надо делать эпиляцию, чаще печалит. Или депиляцию? Или нет разницы?

Содержание:

Что такое депиляция

Процедуры депиляции

Что такое эпиляция

Процедуры эпиляции

Сравнение эпиляции и депиляции

Что выбрать и кому подойдет

Обе процедуры обозначают, в общем, одно и то же – удаление волос – но используются при этом совершенно разные подходы и методы.

Что такое депиляция?

Депиляция – это процедура, при которой удаляется только видимая часть волоса. При этом его корень – фолликул или волосяная луковица – остается нетронутым, и в дальнейшем из него вырастает новый волос.

Результат от такой процедуры мгновенный, но эффект, увы, недолговечен: буквально через 1-2 недели все требуется повторять сначала, так как волоски вырастают снова. В большинстве случаев – чуть более тонкие и слабые, чем до депиляции, но меньше их от этого не становится.

Плюсы депиляции: быстрота, возможность проведения в домашних условиях, широкий выбор способов и методов, относительная дешевизна.

Минусы депиляции: необходимость частого повторения, болезненность некоторых способов, множество побочных эффектов (отеки, вросшие волосы, воспаления, пигментация). Да и цена за все процедуры, с учетом регулярных вложений, окажется гораздо выше, чем при удалении волос раз и навсегда.

Процедуры депиляции

Бритье. К этой процедуре удаления волос прибегали и мужчины, и женщины. Раз-два, слегка провести по коже бритвой (ну или старательно поскрести особенно заросшие места) – и кожа чистая. Правда, слегка неровная, и уже через день «радующая» нас черными точечками отрастающих волосков, но зато все дешево и очень быстро. Глаз радуется – до тех пор, пока не возникнет проблема с раздражением и сухостью кожи, микротрещинками, или еще хуже – с первым же вросшим волоском…

Важно: из-за частого бритья (а редко бриться, если хочется сохранить кожу без волос, не получится) изменяется структура волоса. Он становится более жестким и толстым – достаточно взглянуть на мужскую щетину на щеках и подбородке! – а кроме того, может вырасти не вверх, а загнуться и врасти вниз, под кожу. Это не просто больно, но еще и чревато воспалениями, которые оставляют после себя следы и пятна. А уж если воспалится корень волоса, придется скорее бежать к хирургу и вскрывать нарыв. Поверьте, после этого бриться не захочется еще очень долго!

Если вы все-таки регулярно прибегаете именно к бритью волос, пользуйтесь кремами и гелями для бритья, не забывайте увлажнять и смягчать кожу и правильно подбирать дезодорант: твердый антиперсперант, попадая в микротрещинки, забивает их и вызывает воспаления. Рекомендуем пользоваться аэрозолями!


Крема для депиляции – еще один быстрый домашний способ избавиться от волос. Крем, имеющий специальный химический состав, наносится на кожу плотным слоем и как бы «растворяет» волоски. Корни волос под кожей, опять же, никак не затрагиваются.

Это менее травматичный способ, чем бритье, но раздражение и ощущение сухости и стянутости кожи из-за химического воздействия практически неизбежны, хотя и проходят чаще всего сами по себе. Однако, если передержать средство на коже, можно очень легко получить химический ожог и шелушение. Кроме того, способ не так уж экономичен: одного тюбика крема хватает на 1-2 процедуры удаления волос, если учесть, что наносить его нужно плотно, а эффект длится 5-10 дней, не больше.


Восковая депиляция – очень распространенный способ удаления волос. Может проводиться как в домашних условиях, с использованием купленных в магазине восковых полосок, так и в салоне – с помощью воска в банке. Провозиться придется подольше, чем с бритьем и кремом: воск нужно слегка разогреть, плотно нанести на кожу или прижать полоску, подождать, пока все волосы не прилипнут – и резко дернуть против роста волос.

Главный и существенный его минус – крайняя болезненность процедуры. Не случайно в комедиях так часто вставляют сцены с восковыми полосками, которыми «пытают» героев: это действительно больно, особенно если нужно удалить волоски в чувствительной зоне вроде бикини или подмышечной области.

Другие недостатки воска – недолговечность (1-2 недели) и множество побочных эффектов. И не только вросших волосков (а от восковой депиляции они появляются очень часто), но и пигментных пятен на коже, ожогов и раздражения из-за горячего воска. Ну и если пропустить какой-нибудь участок – повторять придется все заново, «перебрить» начисто не получится.


Шугаринг или депиляция сахарной пастой – процедура, перегнавшая воск по популярности. Специальная вязкая сахарная масса разогревается, наносится на кожу, застывает вместе с волосками – а затем, как воск, удаляется одним движением, вырывая и волосы, только не против их роста, а по росту. Некоторые девушки варят сахарную пасту дома, но здесь очень легко ошибиться, и не только понапрасну извести огромное количество сахара, но и нанести вред собственной коже, поэтому шугаринг преимущественно салонная процедура.

За счет того, что, в отличие от восковой депиляции, при шугаринге волосы удаляются по росту, эта процедура менее болезненна, но, как и воск, может вызывать аналогичные побочные эффекты: ожоги, вросшие волосы, пигментацию кожи, раздражение.


Домашняя электродепиляция. Ее чаще других путают с эпиляцией, но из-за принципа действия она все же остается именно депиляцией. Несколько крошечных пинцетов автоматически вырывают волоски, не трогая при этом корень. Так что волосы после такого домашнего эпилятора тоже растут, с таким же риском врастания. К тому же это небезболезненно – даже при том, что многие современные модели обладают специальными охлаждающими насадками.

Каждый из этих методов требует определенной подготовки: тщательного увлажнения, смягчения и скрабирования кожи, отрастания волосков хотя бы на несколько миллиметров, чтобы их удобнее было удалять. Большая их часть – болезненная, а побочные эффекты имеют все. Кожа остается гладкой, в среднем, 7-10 дней.

Что такое эпиляция?

Эпиляция — курс более радикальных методов, воздействующих непосредственно на корень волоса и уничтожающих его. У многих людей после этого волосы на обработанной зоне вовсе перестают расти, у кого-то — фолликулы вновь образуются под влиянием гормонов спустя какое-то время, но факт остается фактом: после курса эпиляции о нежелательных волосах можно забыть не просто на два дня, неделю или месяц, а на несколько лет. К тому же и провести эту процедуру можно абсолютно на любом участке тела — эпиляция интимных зон или верхней губы так же популярны, как и эпиляция ног или подмышек.

После 1-2 сеансов эпиляции – любым методом, неважно каким – волос становится значительно меньше, и отрастают только те волоски, которые на момент процедуры находились в «спящем» состоянии. Именно поэтому нужно несколько процедур – чтобы захватить все волосы, в том числе те, что активировались после предыдущего сеанса. В конце концов, волосяных фолликулов под кожей попросту не останется вообще.

Важно: Все процедуры эпиляции проводится не просто так в любом салоне красоты, а в медицинской клинике, обладающей соответствующими лицензиями и сертификатами, и под руководством врача дерматолога-косметолога. Это полноценная медицинская процедура, и перед ней необходима консультация специалиста. Существует категория людей с очень чувствительной кожей или наличием заболеваний, при которых противопоказана эпиляция. С полным списком противопоказаний можно ознакомиться здесь.

Конечно, эпиляция значительно дороже, чем депиляция, а в некоторых случаях еще и больнее. Но потраченные средства на 5-7 процедур, необходимых для полного удаления волос, все равно составляют меньшую сумму, чем трата на крема, бритвы, воск и сахар, а для снижения неприятных ощущений есть специальные аппликаторы, насадки и анестезирующие крема, поэтому в целом эпиляция считается более выгодным методом.

Процедуры эпиляции

Фотоэпиляция – метод, который считается устаревшим в большинстве современных клиник. При такой процедуре на корень волоса воздействует световая энергия. При ее поглощении происходит разрушение волосяного фолликула и, как следствие, удаление волоса, растущего из этого корня. Чем темнее волос – тем эффективнее фотоэпиляция, поскольку прибор «реагирует» на пигмент меланин, отвечающий за темную окраску волос и кожи.

В этом состоит и главный минус фотоэпиляции: светлые волосы с ее помощью удалить сложно. Более того, на темной или загорелой коже процедура не проводится, так как высок риск получить ожог. К основным побочным эффектам фотоэпиляции относятся пигментные пятна как реакция кожи на большое количество света. Процедура проводится с использованием охлаждающих насадок, снижающих неприятные ощущения, но может быть болезненной на определенных чувствительных участках тела.


Электроэпиляция – еще один эффективный, но достаточно болезненный и долгий способ удаления волос навсегда. Тонкую иглу-электрод вводят под кожу, к самому волосяному фолликулу, подают слабый разряд электрического тока – и ток «расплавляет» корень волоса. Несколько таких процедур – и кожа чистая и гладкая. Однако, поскольку так работать надо с каждым отдельным волоском, одна процедура может занимать несколько часов. Поэтому на обширных участках кожи проведение электроэпиляции затруднительно – чаще всего ее делают на лице, для удаления усиков или коррекции бровей.

Из явных недостатков – болезненность, длительность процедуры, риск осложнений (гнойнички, рубцы, воспаления), высокая стоимость, в которую входит и работа врача, и стоимость игл, и цена за обезболивающее. Из плюсов – нет разницы, какие именно волосы (темные, светлые, пушковые, седые) удалять.


Лазерная эпиляция – пожалуй, самый доступный и распространенный вид эпиляции, лучше всего подходящий для любого типа кожи и любой зоны. Принцип действия схож с принципом фотоэпиляции: тепловое лазерное излучение сжигает волосяной фолликул, через некоторое время волосок отпадает, и больше на этом месте не растет.

Благодаря возможности очень точно настроить лазер, кожа вокруг волоска не затрагивается, не обжигается и не травмируется. Охлаждающие насадки или гели и анестезирующие крема делают процедуру комфортной. А благодаря тому, что лазерные аппараты в медицине и косметологии применяются самых разных конструкций и для самых разных целей, можно без проблем подобрать тот лазер, который удалит и тонкие, и светлые, и темные, и жесткие волосы.

После процедуры лазерной эпиляции важно в течение 2-3 недель не допускать попадания на обработанную кожу прямых солнечных лучей – от этого могут появиться пигментные пятна.

Краткое сравнение методов

Депиляция

Эпиляция

Воздействует только на видимую часть волоса

Воздействует непосредственно на корень волоса

Необходимо неограниченное количество постоянно повторяемых процедур

Необходимо 5-7 процедур. Достаточно поддерживать эффект 1 процедурой в год

Проводится дома или в любом салоне красоты

Проводится только в сертифицированной клинике врачом-косметологом

Имеет побочные эффекты и противопоказания

Имеет побочные эффекты и противопоказания

Недолговечна

Эффект сохраняется от 2-3 лет до неограниченного времени

Болезненны некоторые методы

Болезненны некоторые методы

Относительно дешево, но платить нужно постоянно

Относительно дорого, но заплатить нужно будет за разовый курс из нескольких процедур. И есть скидки!

 

Что лучше – эпиляция или депиляция?

Однозначно сложно сказать. На чувствительных и постоянно видимых местах (лицо, подмышки, руки) лучше всего сделать именно эпиляцию – меньше риск раздражения, воспаления и вросших волос, эффективнее, долговечнее и «чище» результат. Многим девушкам проще бывает пройти единовременный курс эпиляции и для зоны бикини – постоянное бритье в этой области чревато последствиями, а удаление волос воском или сахаром слишком болезненно. Выгоднее эпиляция окажется и для тех, чье тело часто открыто – танцоры, балерины, пловцы, модели.

Перед выбором процедуры нужно в любом случае посетить специалиста и придерживаться рекомендаций после эпиляции. А при домашнем удалении волос – помнить о возможных побочных эффектах, тщательно ухаживать за кожей и учитывать необходимость тщательной подготовки.

Записаться на консультацию к нашим специалистам можно по телефону 290-88-88 или с помощью формы онлайн-заявки на сайте.


Анатомия и физиология волос

3.1. Классификация волос

Волосками покрыта почти вся поверхность тела, за исключением нескольких областей, таких как ладони, подошвы и области слизистой оболочки губ и наружных половых органов. Большинство из них представляют собой крошечные бесцветные пушковые волоски. Те, которые расположены в нескольких областях, таких как кожа головы, брови и ресницы, толще, длиннее и пигментированы и называются терминальными волосками. У человека примерно 5 миллионов волосяных фолликулов, 100 000 из которых расположены на коже черепа [11] (Таблица 2) [2].

Общее количество Почти 5 000 000
Количество волос на коже головы 80 000–150 000
Циклы роста волос на коже головы Анаген: 85–90%
Катаген: 1%
Телоген: 10–15%
Продолжительность фазы цикла волос Анаген: 2–6 лет
Катаген: 2–3 недели
Телоген: 3 месяца
Физиологическая скорость выпадения волос (кожа головы) ~ 100–200 / день
Скорость образования стержня волос (кожа головы) ~ 0.35 мм / день, 1 см / месяц
Диаметр и длина стержня волоса Веллус: 0,06 мм; 1–2 мм
Зажим:> 0,06 мм; 1–50 см
Волосы Волосы на голове
Лобковые и подмышечные волосы
Фаланговые волосы
Пигментация стержня волоса Темные волосы: преобладание эумеланина
Светлые / рыжие волосы: преобладание феомеланина

Таблица 2.

Основные данные о волосяных фолликулах человека.

Обычно терминальные волоски обнаруживаются на коже головы, бровях и ресницах при рождении, в то время как остальная часть тела покрыта пушковыми волосами. В период полового созревания некоторые пушковые волосы (например, борода, туловище, подмышки и область гениталий) под влиянием андрогенов дифференцируются в терминальные волосы, которые становятся длинными (> 2 см), толстыми (> 60 мкм), пигментированными и сердцевинными. Луковица терминальных волосков находится в подкожно-жировой клетчатке; однако луковица пушковых волос находится в ретикулярной дерме.Волосы веллуса тонкие (<30 мкм), короткие (<2 мм) и большей частью немедуллированные.

Волосы подразделяются на три основные этнические подгруппы (азиатские, африканские и европейские). Однако в недавнем исследовании эта классификация расширена до восьми основных подгрупп с учетом трех параметров: диаметра кривой, индекса изгиба и количества волн [12].

В процессе классификации необходимо учитывать структурные особенности волосяного фолликула. Диаметр стержня волоса, плотность волосяного фолликула и объем вливания фолликула – вот некоторые из них.Диаметр стержня волоса немного отличается, и в андрогензависимых областях волосы оказываются толще. Плотность волосяных фолликулов намного больше во лбу, и объем инфундибулярных фолликулов также больше. Это важно только из-за большого инфундибулярного объема фолликулов, который связан с большей резервуарной способностью фолликулов [1, 13].

3.2. Структура волоса

Волосы состоят из двух различных структур: фолликула – живой части, расположенной под кожей, и стержня волоса – полностью ороговевшей неживой части над поверхностью кожи.Мышца arrector pili расположена между зоной выпуклости волос и дермоэпидермальным соединением. Выше прикрепления мышцы arrector pili в фолликул открываются сальные железы и, в некоторых определенных областях, апокринные железы.

Стержень волоса состоит из трех слоев: кутикулы, коры и, в некоторых случаях, мозгового вещества. Клетки кутикулы плоской и квадратной формы плотно прилегают к клеткам коры проксимально. Периферические движения клеток кутикулы направляют дистальный свободный край вверх и вызывают обширное перекрытие.Эти сочетания имеют решающее значение. Взаимодействуя с клетками кутикулы внутреннего корневого влагалища, они способствуют закреплению фолликулов в растущих волосах. Эти черепичные поверхности также облегчают удаление грязи и шелушащихся клеток с кожи головы. Кутикула также обладает важными защитными свойствами и барьерными функциями против физических и химических повреждений [14–16].

Во время миграции клеток из волосяной луковицы в кору, их форма становится более веретенообразной.Эти ячейки плотно сливаются и располагаются параллельно оси вала. Осевые кератиновые нити (микрофибриллы), которые образованы из множества молекул твердых α-кератиновых промежуточных нитей (α-KIF), упаковывают каждую клетку коры. Несколько микрофибрилл объединяются в более крупные единицы, называемые макрофибриллами, которые составляют почти 50% материала коры головного мозга. Кора головного мозга составляет основную часть стержня волоса, а также содержит меланин [2, 15, 16]

Медулла расположена в центре стержня волоса, предпочтительно представленного в виде более грубых волокон.Мозговое вещество волоса содержит структурные белки, которые заметно отличаются от других кератинов волос, и эозинофильные гранулы, которые заполнены аминокислотой цитруллином и в конечном итоге образуют внутренние покрытия внутри мембран зрелых клеток [14, 16, 17].

Фолликул является основной структурой роста волос и в основном состоит из двух отдельных частей: верхней части, состоящей из воронки и перешейка, и нижней части, состоящей из волосяной луковицы и супрабульбарной области. Верхний фолликул остается неизменным, а нижняя часть имеет непрерывные циклы регенерации [1, 2, 16, 18].

Воронка, самая верхняя часть волосяного фолликула, простирающаяся от отверстия сальной железы до поверхности кожи, представляет собой воронкообразную структуру, заполненную кожным салом, продуктом сальных желез. В верхней части, названной acroinfundibulum, ороговение эпителия переходит в «эпидермальный режим» с образованием stratum granulosum и stratum corneum подобно эпидермису [1, 14, 16].

Перешеек – это нижняя часть верхней части волосяного фолликула между отверстием сальной железы и местом прикрепления мышцы arrector pili.На уровне перешейка ороговение эпителия начинается с отсутствия зернистого слоя, называемого «трихилеммальное ороговение» [14, 16]. Остается лишь несколько дифференцированных корнеоцитов, и инвагинация эпидермиса в этой области должна рассматриваться как высокопроницаемая для соединений, применяемых местно [19]. Считается, что стволовые клетки волосяного фолликула располагаются в области выпуклости на перешейке рядом с местом прикрепления мышцы-арректора [20]. Исследования клонов доказали, что клетки bulge мультипотентны и что их потомство генерирует новый волосяной фолликул нижнего анагена [21].Одной из наиболее отличительных черт стволовых клеток является их медленная цикличность, предположительно для сохранения их пролиферативного потенциала и минимизации ошибок ДНК, которые могут возникнуть во время репликации. Они мигрируют в нисходящем направлении. Попадая в матрицу волосяной луковицы, они разрастаются и претерпевают терминальную дифференцировку, образуя стержень волоса и внутреннюю корневую оболочку. Они также мигрируют дистально с образованием сальных желез и размножаются в ответ на ранение [16, 20, 22].

Супрабульбарная область фолликула, ниже перешейка и над волосяной луковицей, состоит из трех слоев, от самого внешнего до самого внутреннего: наружная оболочка корня, внутренняя оболочка корня и стержень волоса (рис. 2).

Рисунок 2.

Схема проксимального волосяного фолликула.

Оболочка наружного корня (ORS) простирается от эпидермиса в области воронки и продолжается до волосяной луковицы, и ее клетки значительно изменяются по всему фолликулу. В воронке он напоминает эпидермис, тогда как на уровне перешейка клетки ОРС начинают ороговевать в трихилеммальном режиме. Кератиноциты в ПРС образуют выпуклость у основания перешейка. На нижнем кончике волосяной луковицы он состоит из одного слоя кубовидных клеток, которые становятся многослойными в области верхней волосяной луковицы.В некоторых фолликулах есть отдельный слой отдельных клеток, расположенный между внешней и внутренней оболочками корня, известный как сопутствующий слой [23]. Клетки сопутствующего слоя демонстрируют многочисленные межклеточные связи с внутренним влагалищем корня и, как считается, мигрируют дистально вместе с внутренним влагалищем корня в область перешейка и образуют плоскость скольжения между внутренним и внешним влагалищами корня [1, 3, 14, 16 ]. ПРС волосяного фолликула также содержит меланоциты, клетки Лангерганса и клетки Меркеля.Эти клетки участвуют в определенных функциях фолликула, например, в качестве сенсорного органа и в качестве иммунологического часового механизма для кожи [5].

Внутренняя оболочка корня (IRS) состоит из трех слоев: слоя Генле, слоя Хаксли и слоя кутикулы. Самый внутренний слой – это кутикула IRS, клетки которой сцепляются с клетками кутикулы волоса. Это соединение, прикрепляющее стержень волоса к волосяному фолликулу, очень плотное. Внутренняя оболочка корня твердеет раньше, чем предполагаемые волосы внутри нее, и поэтому считается, что она контролирует окончательную форму стержня волоса.Каждый из трех слоев IRS подвергается резкому ороговению. Это происходит на разных уровнях каждого слоя; однако модели изменений аналогичны. Кератинизация сначала появляется в самом верхнем слое Генле. Слой Хаксли кератинизируется над слоем Генле в области, известной как бахрома Адамсона. IRS покрывает и поддерживает стержень волоса до уровня перешейка, где IRS распадается [3, 14, 16].

Расширенная луковичная часть нижнего волосяного фолликула, включая матрицу волос и фолликулярный сосочек, известна как волосяная луковица, которая является активной репродуктивной частью волосяного фолликула.Волосяная луковица включает фоликулярный дермальный сосочек, богатый мукополисахаридами стром, нервное волокно и капиллярную петлю. Клетки матрикса расположены в самой нижней части фолликула и окружают фолликулярный сосочек со всех сторон. Стержень волоса и IRS происходят из клеток матрикса. IRS происходит из нижних и латерально расположенных матричных клеток, тогда как стержень волоса происходит из верхних и центрально расположенных клеток. Помимо производства основных структурных компонентов волос, они также производят кератины волос и связанные с ними белки (КАП) [24].Меланоциты располагаются среди стволовых клеток матрикса, чтобы производить пигмент волос. Во время фазы дифференцировки клетки матрикса фагоцитируют меланин или феомеланин из дендритных удлинений меланоцитов. Цвет волос определяется количеством и типом фагоцитируемого основного пигмента [1, 3, 16, 25].

Фолликулярный сосочек, который образуется в результате конденсации мезенхимальных клеток на ранних стадиях фолликулярного эмбриогенеза, является одним из наиболее важных участников во время индукции и поддержания дифференцировки фолликулярного эпителия.Он отвечает за определение типа фолликула. Объем и секреторная активность фолликулярного сосочка, а также количество матричных стволовых клеток определяют размер волосяной луковицы анагена, продолжительность фазы анагена и диаметр стержня волоса [11, 26, 27]. Более того, фолликулярный сосочек является важным источником факторов роста [1, 3, 16, 28].

3.5. Иммунология волосяного фолликула

Иммунология волос очень сложна и удивительна. Волосяной фолликул представляет собой иммунный привилегированный (IP) участок, который определяется в основном как место в организме, где трансплантаты чужеродных тканей могут выжить в течение более длительных периодов времени без иммунного отторжения.Эта специализированная иммунная среда IP необходима для предотвращения деструктивных иммунных реакций в критических областях. Другие иммунные привилегированные участки включают переднюю камеру глаза, яичко, головной мозг и плаценту. Волосяной фолликул IP имеет уникальную характеристику циклического повторения.

До недавнего времени считалось, что IP волосяного фолликула ограничивается областью матрикса во время фазы анагена. Однако накопились доказательства того, что IP волосяного фолликула простирается до области выпуклости и присутствует в этом месте в течение всего цикла роста волос.Поскольку выпуклость представляет собой нишу стволовых клеток волосяного фолликула, устойчивый IP в этой области может быть важным для выживания фолликула.

ВП волосяного фолликула возникает во время анагена [30]. Таким образом, IP волосяного фолликула ограничивается проксимальным эпителием волосяных фолликулов анагена. Во время анагена в волосяной луковице активируется меланогенез, что позволяет предположить, что аутоантигены меланоцитов волосяного фолликула играют ключевую роль в качестве потенциальных иммунных мишеней [28, 31].

IP волосяного фолликула поддерживается несколькими факторами [32]:

  • Подавление экспрессии MHC класса I в проксимальных ORS и матричных клетках.

  • Местное производство сильнодействующих иммунодепрессантов, таких как TGF-β1, IL-10 и α-MSH.

  • Функциональное ухудшение антигенпрезентирующих клеток.

  • Отсутствие лимфатических сосудов.

  • Создание барьеров внеклеточного матрикса, препятствующих перемещению иммунных клеток.

  • Экспрессия неклассического MHC класса 1.

  • Экспрессия лиганда fas.

3.6. Пигментация волосяного фолликула

Пигментация стержня волоса обеспечивает множество преимуществ, включая защиту от ультрафиолета, терморегуляцию и сексуальное восприятие.Кроме того, пигмент волос, меланин, является мощным поглотителем свободных радикалов. Таким образом, производство меланина внутри активной волосяной луковицы в анагене может помочь смягчить стресс клеток, вызванный активными формами кислорода.

В отличие от непрерывного меланогенеза, наблюдаемого в эпидермальных меланоцитах, фолликулярный меланогенез является циклическим явлением. Он прекращается на ранней стадии перехода от анагена к катагену, возобновляется при подавлении ключевых ферментов меланогенеза, за которым следует апоптоз меланоцитов волосяного фолликула.

Меланоциты волосяного фолликула и их предшественники находятся в матриксе волос и вдоль внешней корневой оболочки волосяных фолликулов в анагене. Однако производство пигмента волос (черный эумеланин и / или красноватый феомеланин) происходит только в специализированной пигментной единице волосяного фолликула, расположенной над дермальным сосочком и вокруг него во время анагена III – VI. Синтез меланина устанавливается в связанных с лизосомами органеллах, называемых меланосомами. В прекортикальном матриксе эти меланосомы переносятся на кератиноциты стержня волоса и образуют пигментированный стержень волоса.Волосяной фолликул также содержит стволовые клетки меланоцитов, которые расположены в выпуклости и во вторичных волосах [33–35].

Easy Root Touch Up | Root Cover Up по цвету Wow Hair

Как часто можно / нужно использовать Root Cover Up?
Вы можете / должны использовать Root Cover Up, чтобы скрыть любые серые или темные повторные наросты по мере их появления. Root Cover Up останется в ваших волосах, пока вы не вымоете их шампунем.

Как долго длится Root Cover Up?
Root Cover Up продержится в ваших волосах от шампуня до шампуня.Это означает, что он останется на месте, если вы потеете, попадете под дождь или даже купитесь. Вам нужно на самом деле помыть волосы шампунем, чтобы удалить Root Cover Up.

Продукт не содержит аммиака?
Не содержит красителей, восков и аммиака.

Будет ли Root Cover Up сушить мои волосы?
Формула представляет собой революционную профессиональную пудру, которая не сушит и не изменяет состояние ваших волос.

Можно ли использовать пудру Root Cover Up для химически расслабленных волос или волос с химической завивкой?
Root Cover Up идеально подходит для всех химически обработанных волос.

У меня есть средство Color Wow Root Cover Up в волосах, но я хочу его покрасить. Нужно ли смывать Root Cover Up перед окрашиванием?
Да, перед нанесением новой краски рекомендуется смыть Root Cover Up.

Можно ли наносить пудру Root Cover Up на брови?
Root Cover Up, хотя и не предназначен для нанесения на брови, может и уже использовался для бровей с отличными результатами. Используйте маленький конец кисти (или любую кисть с маленьким кончиком для более точного нанесения).Нанесите на брови очень небольшое количество пудры.

Могу ли я использовать пудру Root Cover Up, чтобы замаскировать небольшие проплешины?
Минеральная пудра Root Cover Up лучше всего смотрится при нанесении на волосы. Однако, если вы хотите скрыть участки облысения или истончения на макушке, вы, безусловно, можете нанести небольшое количество пудры на кожу головы. Будьте осторожны, чтобы избежать чрезмерного нанесения, чтобы порошок не сошел с кожи головы.

Как мне укладывать порошком Root Cover Up?
Наша пудра Root Cover Up должна стать последним шагом в процессе укладки.Закончив укладку, закройте все видимые серые корни или темные отростки.

Чем эта пудра отличается от имеющихся на рынке спреев для консилера для корней или рассыпчатой ​​пудры?
Color Wow Root Cover Up – минеральная пудра. Его сжатая компактная форма позволяет легко наносить его, как тени для век или румяна. Маленькая кисть гарантирует очень точное нанесение, которого невозможно достичь с помощью спрея. Наша пудра «выглядит и ощущается как волосы», а спрей придает волосам липкий и матовый вид.В целом, наша компактная пудра дает гораздо более естественный вид, чем при использовании спрея.

Как выбрать оттенок, который лучше всего подходит моему цвету волос?
Посмотрите изображения «До и после» на нашем сайте, чтобы определить оттенок, наиболее близкий к вашему цвету волос. Светоотражающие пигменты в нашем Root Cover Up очень щадящие и универсальные. Если вы находитесь между оттенками, рекомендуем выбрать более темный оттенок.

Могу ли я сделать себе временные яркие моменты с помощью Root Cover Up?
Наше средство Root Cover Up идеально подходит для освежения мелирования осветленных / мелированных волос.Он предназначен для прикрытия темных корней / повторного отрастания на линии разреза. Однако это не предназначено для создания полной полосы или мелирования на волосах.

Nfatc1 управляет старением стволовых клеток волосяного фолликула

Во взрослых тканях стволовые клетки (SC) должны замещать клетки, потерянные в результате острого повреждения и нормальной биологической активности (гомеостаза). Старение можно рассматривать как неспособность поддерживать надлежащий гомеостаз тканей, что приводит к снижению функции ткани и замедленной реакции на повреждение ткани (1). Связанные с возрастом внешние изменения во внешней, системной и / или местной тканевой среде, в сочетании с внутренними изменениями от многократного использования, являются потенциальными первопричинами нарушения функции SC.Однако относительный вклад этих факторов в старение SC варьируется в разных популяциях SC. Исследования SCs кроветворения и меланоцитов показывают, что связанные с возрастом внутренние пертурбации могут нарушать функцию SC (2-4). Мезенхимальные SC, сердечные SC и клетки-предшественники печени также демонстрируют возрастное снижение работоспособности (5–7). Влияние внешних пертурбаций очевидно из исследований мышечных и нервных СК, где воздействие системной среды молодого возраста может восстановить функциональные возможности СК (7–10).Совсем недавно было показано, что кардиомиоциты зависят от системного фактора роста и дифференцировки 11 (GDF11), члена суперсемейства трансформирующих факторов роста β (TGF-β), количество которого с возрастом уменьшается (11).

Кожа имеет одни из самых узнаваемых возрастных изменений. У людей и других млекопитающих на коже наблюдается возрастное снижение гомеостаза с истончением как дермы, так и эпидермиса, снижением разрастания эпидермиса и восстановлением повреждений, потерей эластичности кожи, появлением морщин и, в частности, истончением и возможной потерей волос (12).Периоды покоя волосяных фолликулов (ВФ) также становятся длиннее с возрастом животных, а у людей густота волос с возрастом снижается. Было высказано предположение, что прогрессирующий покой HFs во время старения является отражением снижающейся способности SCs инициировать новый цикл волос, но это не было официально проверено, и лежащие в основе механизмы остаются в значительной степени неисследованными.

HF проходят циклические циклы роста (анаген), дегенерации (катаген) и покоя (телоген), называемые «циклом волос» (13). Во время анагена HF регенерируются и развиваются в зрелые HF.В тесной связи с дермальным сосочком в основании зрелого фолликула, транзитно-усиливающие матричные клетки быстро пролиферируют и затем прогрессируют, чтобы окончательно дифференцироваться с образованием стержня волоса и его канала. В начале катагена большинство клеток нижних двух третей фолликула уничтожаются апоптозом, и дермальный сосочек регрессирует. Он останавливается, когда достигает основания нециклирующей части ВЧ, области, называемой «выпуклостью». Затем HF входят в фазу спящего телогена цикла волос, которая становится длиннее с возрастом.

Критическим компонентом анагена является активность HFSC, которые управляют этими циклическими циклами регенерации HF (13). Несколько исследований показали, что область выпуклости внутри HF является нишей для HFSC, при этом большинство клеток, сохраняющих метку / медленно меняющих цикл, обнаруживается в выпуклости после экспериментов с отслеживанием импульсов (14, 15). При выделении и помещении in vitro клетки выпуклости образуют колонии; со временем некоторые из них вырастают в большие холоклоны, состоящие из маленьких недифференцированных клеток с долгосрочным пролиферативным потенциалом; клетки из холоклонов также проявляют мультипотентность при трансплантации мышам Nude in vivo (16).Исследования по отслеживанию клонов показывают, что клетки внутри выпуклости и / или ее основания (волосяного зародыша) подпитывают цикл роста волос (17⇓ – 19).

Идентификация популяции взрослых HFSC, способных регенерировать волосы, привела к их очистке и молекулярной характеристике. Транскрипционное профилирование показывает, что HFSC предпочтительно экспрессируют набор высокообогащенных (сигнатурных) генов, включая факторы транскрипции [ Sox9 , Tbx1 , Lhx2 , TCF3 / 4 и ядерный фактор активированных T-клеток c1 ( NFATc1 )], которые поддерживают их в неподвижном, недифференцированном состоянии (15, 17).HFSC остаются в состоянии покоя до тех пор, пока не будет инициирована следующая волна регенерации HF. Новый цикл волос начинается, когда баланс активирующих Wnt и ингибирующих костных морфогенных белков (BMP) сигналов из ниши SC и окружающей дермы сдвигается (19-21). Чувствительный к передаче сигналов BMP для его транскрипции и кальция для его ядерной локализации, NFATc1 является одним из наиболее быстро реагирующих, поскольку он подавляется / теряется при активации HFSC и предопределении судьбы (22, 23).

В этом исследовании мы фокусируемся на том, как HFSC изменяются с возрастом и как это влияет на фенотипические особенности стареющей кожи, связанные с циклом роста волос.Используя модель на мышах, мы показываем, что старые HFSC значительно более неподвижны, чем молодые HFSC, и их труднее активировать, что приводит к значительно более медленному входу в анаген. In vitro , наиболее заметным дефектом старых HFSC является их пониженная колониеобразующая эффективность (CFE). Старые холоклоны HFSC, которые действительно растут, могут быть пассированы, но в более поздних пассажах проявляются признаки уменьшенного самообновления. Интересно, что дефект CFE может быть частично устранен путем посева HFSC из старых HF, которые были депилированы, процесс, который, как известно, снижает уровни ниш BMP6 и фактора роста фибробластов 18 (FGF18) (19).Возрастные различия в системных факторах имеют умеренное влияние по сравнению с локальными и внутренними изменениями в передаче сигналов / чувствительности BMP. Копнув глубже, мы используем транскрипционное профилирование и анализ секвенирования ChIP (seq), чтобы выявить ключевые возрастные нарушения в BMP- / кальций-опосредованной регуляции NFATc1, которые при исправлении восстанавливают транскрипционные и физиологические особенности старых HFSC до их юного состояния.

Результаты

HF становятся все более бездействующими с возрастом.

Мы решили изучить, какое влияние возраст может иметь на регенеративный процесс цикла волос и взаимосвязь с возможными изменениями функциональности HFSC с возрастом.Когда HFs входят в анаген у мышей C57BL / 6, кожа меняет цвет с розового на черный, отражая коактивацию и дифференцировку SC меланоцитов, резидентных в HF от Anagen IIIa до катагена (24). Судя по этому и гистологическому анализу, первые два цикла волос у мышей C57BL / 6 были в значительной степени синхронными, что отражало способность соседних HF координировать активность HFSC (25). После этого рост волос становился все более асинхронным (26), так что примерно к восьмому циклу роста волос у старых мышей (определяемых здесь как животные в возрасте 22–24 мес.) Обнаруживались дискретные домены HF фазы анагена (черные), перемежающиеся с большими участками телогена. -фазная (розовая) кожица (рис.1 А ). Эта неоднородность не была связана с возрастными изменениями дифференцировки меланоцитов, поскольку количество SC меланоцитов в выпуклости телоген-фазы HF не изменялось с возрастом ( SI Приложение , рис. S1 A ), а также количество дифференцированных меланоцитов в волосяной луковице HF в фазе анагена ( SI Приложение , Рис. S1 B ), и пигментация стержня волоса не была затронута ( SI Приложение , Рис. S1 C ). Скорее, это был точный индикатор того, находятся ли HF в фазе телогена или фазе анагена.

Рис. 1.

Динамика цикла волос у старых животных. ( A ) Репрезентативные изображения молодых и старых животных с подстриженной (выбритой) шерстью во время анагена. Стрелки указывают на области роста анагена у пожилого животного. ( B ) Количественная оценка совокупного процента участков кожи спины, которые вступают в анаген у молодых (синие столбцы) и пожилых (красные столбцы). n = 7 пожилых животных; n = 8 молодняк. ( C , Left ) Тепловая карта, показывающая наложение анагена у всех наблюдаемых животных.Теплые цвета (желтый / белый) обозначают области максимальной активности анагена, а холодные цвета (фиолетовый / синий) – области низкой активности. ( C , Right ) Количественная оценка количества отдельных доменов, присутствующих в течение одного цикла анагена у молодых и старых животных. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Количественная оценка времени, в течение которого отдельные участки кожи спины проводят в телогене ( D ) и анагене ( E ), а также длины отдельных шиловидных волосков молодых и старых животных ( F ). Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Используя этот анализ, мы затем наблюдали за развитием цикла волосяного покрова в течение 100–200 дней в когортах молодых и старых животных ( SI Приложение , рис. S1 D – F ). Количественные оценки показали, что, хотя старые HFs проходят цикл, процент площади HF, входящих в анаген, с возрастом резко снижается (с 94 ± 4% до 21 ± 10%, P = 0,005) (Рис. 1 B ). Согласно тепловой карте, кожа молодых животных (определяемых здесь как животные в возрасте 2–4 мес.) Неоднократно и синхронно входила в анаген в течение интервала наблюдения (рис.1 С ). Напротив, очень немногие HF у старых мышей совершали цикл более одного раза, и многие HF никогда не входили в анаген в течение этого времени (Fig. 1 C ). Мы также наблюдали в ~ три раза больше независимых доменов анагена в течение одного цикла волос в стареющей коже (от 6,1 ± 0,8 до 1,9 ± 0,2 домена), что отражает все более асинхронную активацию HF на основе региональных доменов.

Для более глубокого изучения возрастных различий в цикле HF мы количественно определили продолжительность анагена и телогена в пределах согласованных по регионам субдоменов активности HF у молодых и старых мышей.Этот анализ показал, что пожилые HF проводят в фазе телогена более чем в два раза дольше, чем их более молодые коллеги (92 ± 3 дня против 43 ± 1 дня) (Рис. 1 D ). Еще более примечательным было соответствующее сокращение фазы анагена у старых HF (10 ± 1 день против 16 ± 1 дня) (рис. 1 E ). Результатом этих возрастных различий была общая более короткая шерсть (рис. 1 F ) с более редким и рваным внешним видом. Вместе эти данные показывают, что у старых животных HF спинной шерсти более спящие, остаются в телогене в течение более длительных периодов времени и перемежаются более короткими периодами анагена.

Старые HFSC имеют отложенный ответ на сигналы активации.

Для дальнейшего изучения основной причины возрастных региональных вариаций цикличности волос мы спросили, можно ли это исправить с помощью депиляции (выщипывание волос воском), процедуры, которая стимулирует телогеновые HF молодых мышей к переходу в анаген. Как у молодых, так и у старых мышей депиляция удаляет не только стержни волос (косолапые волоски), но и внутренний слой выпуклости из клеток, экспрессирующих BMP6 и FGF18, который в противном случае представляет собой высокий порог для активации внешнего слоя выпуклости покоящихся HFSC ( 19).Кожу молодых и старых животных контролировали на предмет появления пигментации кожи после депиляции.

У репрезентативного молодого животного (возраст 2 мес.), Показанного на рис. 2 A , HF на ранней телоген-фазе вошли в анаген в течение ~ 5 дней после депиляции, а не ~ 20 дней без депиляции (рис. 1 B ) . Судя по переходам между розовым и черным кожей, HF у репрезентативного пожилого животного (возраст 24 мес.) Реагировали гораздо более синхронно, чем их недепилированные аналоги, что позволяет предположить, что локальные нишевые сигналы могут частично лежать в основе возрастной асинхронности.Тем не менее, вступление в анаген явно задерживалось на несколько дней у старых мышей по сравнению с молодыми (рис. 2 A ).

Рис. 2.

Активация HFSC задерживается у старых животных. ( A ) Репрезентативные изображения молодого ( Верхний ) и пожилого ( Нижний ) животного через 1, 3, 5 и 7 дней после депиляции. ( B ) Принципиальная схема иллюстрирует экспериментальный план экспериментов по депиляции (, верхний, ). Количественная оценка включения EdU ( Нижний ) в выпуклость в указанные моменты времени с помощью проточной цитометрии. n = 4 ранние / средние; n = 2 поздние / непрерывные; n = 3 элемента управления. Данные представляют собой среднее значение ± SEM ( C ) включения EdU в HFSC после депиляции. Объедините изображение ( верхний ) контрольной (без депиляции) и молодых и пожилых ВЧ. Окрашивание CD34 отмечает выпуклость. При окрашивании только EdU ( нижний ) скобка обозначает область выпуклости. (Масштабная шкала, 10 мкМ.) ( D ) Типичные графики FACS, используемые для количественной оценки включения EdU в выпуклость после депиляции.

Чтобы изучить кинетику активации HFSC после депиляции, мы использовали серию экспериментов по мечению 5-этинил-2′-дезоксиуридином (EdU), чтобы определить, когда HFSC пролиферируют после депиляции (рис. 2 B ). Мы исследовали включение EdU через 24–96 ч после депиляции, как было ранее показано, когда HFSC пролиферируют во время анагена (27). EdU находился под управлением i.p. инъекции два раза в день каждые 12 часов в группах животных от 24 до 48 часов (ранний пульс), 48–72 часов (средний пульс), 72–96 часов (поздний пульс) и 0–96 часов (непрерывный пульс).Включение EdU в HFSC (CD34, , высокий, , α6-интегрин, , высокий, ) определяли количественно с помощью сортировки клеток, активируемых флуоресценцией (FACS), для каждой временной точки.

Судя по включению EdU, меньшее количество старых HFSC индуцировалось к пролиферации на ранней стадии после депиляции (11 ± 2,5% по сравнению с 31 ± 4,2% EdU + HFSC) (рис. 2 B и C). ). Включение EdU для средних и поздних импульсов было аналогичным. Однако пролиферация HFSC на протяжении всего анагена (общее включение EdU через 4 дня маркировки) снижалась в старых HFSC (39 ± 1.0% по сравнению с 55 ± 3,0% EdU + HFSCs) (рис. 2 D ). При мониторинге с 4-месячными интервалами езда на велосипеде поддерживалась до 12-месячного возраста, когда инкорпорация EdU начала снижаться ( SI Приложение , рис. S2 A ). Это снижение, по-видимому, не отражает повышенного апоптоза, поскольку иммуномечение активированной каспазы 3 было сопоставимо у пожилых и молодых HF ( SI Приложение , рис. S2 B ). Вместе эти результаты указывают на возрастную задержку активации HFSC после депиляции.Эти результаты также предполагают, что старые HFSC могут иметь более высокий порог активации, чем более молодые HFSC.

Старые HFSC более чувствительны к передаче сигналов BMP in vitro и in vivo.

Чтобы проверить возможные внутренние различия в активации HFSC, мы начали с использования FACS для очистки HFSC на основе поверхностных маркеров CD34 и интегрина-α6 (16). Анализ профилей FACS показал, что HF у старых и молодых мышей содержат эквивалентное количество HFSC, аналогично тому, что сообщалось для эпидермальных SC (28) ( SI Приложение , рис.S2 C ). Иммуномечение и количественная оценка дополнительных маркеров HFSC подтвердили это сходство ( SI Приложение , рис. S2 D и E ). Однако при культивировании старые HFSC росли медленнее и образовывали значительно меньше колоний, чем молодые HFSC (1,6 ± 0,4 против 10 ± 1,0 колоний на 10 4 клеток) (рис. 3 A и B ; SI Приложение , S3 A C ). Это снижение CFE проявилось к 12 мес. И после этого продолжало прогрессировать ( SI Приложение , рис.S3 D G ). В целом, наши результаты хорошо согласуются с предыдущими исследованиями, в которых сообщалось о возрастном снижении образования колоний SC in vitro (29–31).

Рис. 3.

Функция старения HFSC снижается in vitro. ( A , Upper ) CFE из кожи спины в фазе телогена. Колонии из FACS-изолированных молодых и старых HFSC окрашивают родамином B. ( A , Lower ) Изображения клеток в колониях с помощью дифференциального интерференционного контраста (DIC).Обратите внимание на маленькие, компактные и недифференцированные клетки в колонии. DF, дермальный фибробласт; КТ, кератиноциты. ( B ) Количественная оценка CFE и размеров колоний (в мм 2 ). n = 5 молодых; n = 4 возраста. Данные представляют собой среднее значение ± SEM ( C ). Изображение образования молодых и старых колоний после первого пассажа in vitro. ( D ) Возможность длительного прохождения молодых и старых HFSCs. Данные представлены в виде процента образования холоклонов. n = 10 колоний для каждой группы.( E ) CFE после депиляции в определенные моменты времени. Колонии из FACS-изолированных молодых и старых HFSC, окрашенных родамином B. ( F ) Количественная оценка CFE и размера колонии. n = 4 для обеих групп. Данные представляют собой среднее значение ± SEM ( G ) qRT-PCR для Id1 и Id2 после обработки BMP4 колоний HFSC in vitro. n = 4 для каждой группы. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ( H ) qRT-PCR для Axin2 и HPRT после обработки WNT3a колоний HFSC in vitro. n = 4 для каждой группы. Красная пунктирная линия обозначает уровень, выше которого выражение обогащается. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Старые и молодые HFSC придерживались сопоставимо, что исключает это как основу дефекта CFE ( SI Приложение , рис. S3 H ). Более того, при посеве 10 4 –10 5 старых HFSC эффективность колониеобразования следовала линейной тенденции, исключая зависящий от плотности вклад в различия в эффективности посева ( SI Приложение , рис.S3 I ). Копнув глубже, мы обнаружили, что только несколько старых колоний HFSC выросли до типичного размера холоклонов [10–30 мм 2 , 2 × 10 4 до 5 × 10 4 клеток (32)] ( SI Приложение , рис. S3 J ). Даже средний размер был меньше для старых и молодых колоний (8,5 ± 2,0 мм 2 против 22 ± 1,9 мм 2 ) (рис. 3 B ). Тем не менее, большинство клеток в старых колониях были плотно упакованы и недифференцированы, что является отличительным признаком клонов, полученных из SC (рис.3 A , Нижний ). Более того, когда колонии собирали и пассировали, они давали колонии в нормальном количестве и размере их более молодых собратьев (рис. 3 C ). Только после 10 раундов пассирования мы наблюдали снижение способности к самообновлению старых HFSC (рис. 3 D ). Взятые вместе, несмотря на их эквивалентное количество от 2 до 24 месяцев и эквивалентную адгезию, старые HFSC не пролиферируют in vitro так же эффективно и так долго, как молодые SC.

Для дальнейшего изучения этих различий мы культивировали молодые и старые HFSC после депиляции (рис. 3 E ). Активированные HFSC (aHFSC) от молодых и старых животных образовывали колонии с примерно 10-кратной эффективностью. Количественная оценка показала, что CFE сократилась с 10-кратной разницы в телогене до двухкратной разницы для старых и молодых HFSC после депиляции (от 11 ± 1,1 в возрасте до 19 ± 3,1 молодых колоний через 48 часов после депиляции, от 13 ± 2,2 в возрасте до 27 ± 3,0 молодых колоний. 72 ч после депиляции) (рис.3 Ф ). Более того, различия в размере колоний были восстановлены до юношеского уровня путем депиляции (25 ± 1,5 мм 2 до 24 ± 1,3 мм 2 через 48 часов после депиляции, но 20 ± 0,8 мм 2 до 26 ± 1,7 мм 2 через 72 ч после депиляции). Мы объясняем небольшое уменьшение размера колоний в молодой средней точке с большим количеством колоний, образовавшихся в ходе анализа. Эти результаты предполагают, что старые HFSCs могут быть активированы для пролиферации, но для этого требуется более сильный стимул.Поскольку активация HFSC требует ингибирования передачи сигналов BMP и усиления передачи сигналов Wnt, мы протестировали их эффекты в наших культурах. Как показано на фиг.3 G и H , старые HFSC по своей природе более чувствительны к BMP4, чем молодые HFSC, о чем судят по уровням ингибитора связывания ДНК 1 ( Id1 ) и Id2 , установленных нижестоящих мишеней. активированной передачи сигналов BMP, как считывание ответной передачи сигналов BMP. Напротив, они не показали различий в ответе на WNT3A, о чем судили по экспрессии высокочувствительного гена-мишени Wnt, Axin2 .Этот результат согласуется с экспериментом по депиляции, поскольку известно, что депиляция стимулирует активацию HFSC частично за счет снижения уровней BMP6 в нише (19).

Учитывая повышенную чувствительность старых HFSC к передаче сигналов BMP и их улучшенную колониеобразующую способность при культивировании из выпуклости, подверженной вызванному депиляцией уменьшению BMP, мы обратились к рассмотрению того, повышена ли передача сигналов BMP в старых HFSC in vivo. Постдепиляционный анализ показал, что в отличие от молодых HFSC, которые подавляли фосфо-SMAD1 / 5/8 (pSMAD1 / 5/8) в выпуклости, старые HFSC не могли этого сделать (рис.4 А ). Это также верно для ID2 ( SI Приложение , рис. S4 A ), и аналогичные результаты были получены для ID1 (не показано). Эти данные предоставили убедительные доказательства того, что повышенная чувствительность к передаче сигналов BMP была ответственна за поддержание старых фолликулов в более спокойном состоянии.

Рис. 4.

Влияние системных и локальных факторов на состарившиеся ВПСБ. ( A ) Изображения HF, разделенных и иммуноокрашенных на pSMAD1 / 5/8, через 48 часов после депиляции. Скобки в молодых и старых HF обозначают область выпуклости.HG, росток волос. (Масштабная шкала, 20 мкМ.) ( B ) Схема пар парабиоза. Изохронный молодой представляет собой соединение молодых животных с молодыми, гетерохронные представляет собой пары животных молодого возраста, а изохронический возраст представляет собой пары животных возраста и возраста. ( C ) Эффективность образования холоклона HFSC из кожи спины в фазе телогена после парабиоза. Колонии из FACS-изолированных молодых и старых HFSC, окрашенных родамином B. ( D ) Количественная оценка CFE и размера колонии. n = 3 изохронных пары; n = 3 гетерохронных пары.Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. n.s., не имеет значения. ( E ) Количественная оценка CFE и размера колоний HFSC через 48 часов после депиляции после парабиоза. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ( F ) qRT-PCR для BMP из лизатов цельной ткани. Данные представлены в виде кратного обогащения (возраст / молодой). n = 4 для каждой группы. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * P <0,05. ( G ) Изображения HF, иммуноокрашенных на pSMAD1 / 5/8, через 40 дней после депиляции. (Масштабная шкала, 20 мкМ.) ( H ) Репрезентативные изображения животных после депиляции и отрастания волос ( слева, и кружок в центре , ).Выщипанные участки показаны на схеме ( Правый ). ( I ) Количественная оценка отрастания волос у молодых и старых животных. n = 5 молодых; n = 5 лет. Данные представляют собой среднее значение ± SEM ( J ). Количественная оценка HF с зародышами волос EdU + после инъекции Noggin на указанных уровнях. n = 3 для каждой группы. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Изучение влияния системной и локальной среды на поведение пожилых HFSC и передачу сигналов BMP.

Далее мы выяснили, могут ли связанные с возрастом системные изменения способствовать поведению старых HFSC, как это видно в нервных SC, мышечных SC и кардиомиоцитарных системах (7, 9, 11). Используя парабиоз, мы хирургическим путем объединили мышей так, чтобы у них была общая кровеносная система (12, 33, 34). Для этого исследования мы установили изохронные (молодые – молодые и пожилые – пожилые) и гетерохронные (молодые – пожилые) парабиотические пары мышей, чтобы изучить влияние системной среды на функцию пожилых HFSC (рис. 4 B ) (13, 35 ).Через восемь недель после операции мы изолировали и культивировали HFSC в телогеновой фазе (tHFSC).

Хотя парабиоз существенно не влиял на CFE у молодых гетерохронных мышей, он действительно усиливал CFE в старых HFSCs от гетерохронных мышей (фиг. 4 C и D ). Тем не менее, эти эффекты были относительно скромными, и размер колонии не был существенно улучшен в старых HFSC, культивированных от старых животных гетерохронных или изохронных пар. Кроме того, после тестирования влияния депиляции на этот процесс, мы не обнаружили различий в CFE или размере колоний между HFSCs от животных гетерохронного и изохронного возраста (рис.4 E ). Аналогичные результаты были получены in vivo, когда мы исследовали включение EdU и поведение HFSC после депиляции изохронных и гетерохронных пар (не показано). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что системная среда не является основным фактором, способствующим задержке активации HFSC или дефектам CFE, наблюдаемым в старых HFSC.

Затем мы обратились к рассмотрению воздействия местной окружающей среды, а именно эпидермиса кожи, дермы и жировой ткани, как возможных источников повышенной передачи сигналов BMP.Судя по количественной ПЦР с обратной транскрипцией (qRT-PCR), мРНК Bmp2 , Bmp4 и Bmp6 , но не Bmp7 были значительно повышены в жировой ткани старой и молодой кожи (рис. ). Также было минимальное увеличение Bmp2 в эпителии кожи и Bmp6 как в эпителии, так и в дерме. В соответствии с этим наблюдением, когда молодые и старые фолликулы были синхронизированы посредством депиляции и позволили войти в компетентный телоген (40 дней после депиляции), более высокие уровни pSMAD1 / 5/8 и ID2 были обнаружены в выпуклости старых фолликулов (рис.4 G и SI Приложение , Рис. S4 B ). Напротив, не было отмечено никаких возрастных различий в мРНК Wnt ( SI Приложение , рис. S4 C ).

Вместе с предыдущими исследованиями, показывающими, что BMP4 и BMP6 в дерме и BMP2 адипоцитов являются мощными ингибиторами анагена у молодых мышей (20, 23), наши результаты показали, что во время старения локальные уровни BMP повышаются и сильно влияют на активацию HFSC. Если так, старые HFs нуждаются в большем снижении передачи сигналов BMP в локальной среде, чтобы инициировать анаген.Чтобы изучить эту возможность более подробно, мы уменьшили вклад BMP, обеспечиваемый внутренней выпуклостью Keratin 6, путем выщипывания участков разного размера (1, 1,5, 2 и 3 мм 2 ) на телоген-фазе кожи старых и молодых мышей. . Интересно, что возобновление роста волос в результате инициации анагена происходило во всех выщипанных областях у молодых животных, тогда как возобновление роста волос у старых мышей наблюдалось только в том случае, если выщипанные области площадью не менее 2 мм 2 (Рис.4 H и I ).Даже тогда на выщипанной области размером 2 мм 2 наблюдалось возобновление роста волос только у 40% испытанных старых животных.

И наоборот, мы использовали антагонист BMP Noggin для титрования уровней BMP у молодых и пожилых HF. Ноггин вводили внутрикожно молодым и пожилым животным, а включение EdU в HF оценивали через 5 дней после инъекции. Действительно, более высокая доза Noggin была необходима для индукции аналогичных уровней активации HF у старых и молодых животных (рис. 4 J ). Эти данные ясно показывают, что местная кожная среда требует более высокого порога активации у пожилых людей по сравнению с другими.молодняк. Более того, поскольку выщипывание волос может противодействовать этому порогу, наши результаты согласуются с представлением о том, что ключевым фактором ингибирования, ограничивающим активность HFSC у старых мышей, является передача сигналов BMP.

Наконец, несмотря на то, что эти данные показали, что возрастные изменения кожных и подкожных тканей макросреда вносит значительный вклад в различия в поведении пожилых HFSC, анализ возрастных различий в поведении сгруппированных триплетов HF кожи хвоста показал, что в этом участвуют дополнительные сложности.У молодых мышей почти 50% кластеров демонстрируют три HF в фазе анагена; у старых животных большинство кластеров содержало только один HF в фазе анагена ( SI Приложение , рис. S4 D F ). Эти различия предложили уникальное понимание, потому что в отличие от региональной гетерогенности стареющих фолликулов кожи спины, различия в HF в анагене внутри близко расположенных триплетов нелегко объяснить предполагаемыми вариациями в дерме. Вместе с повышенной внутренней чувствительностью старых HFSCs к передаче сигналов BMP, эти находки предполагают, что как внутренние, так и внешние изменения в передаче сигналов BMP вносят вклад в возрастные фенотипы, которые мы наблюдаем здесь.

aHFSC старых мышей больше похожи на tHFSC молодых мышей, чем на молодые aHFSC.

Чтобы изучить молекулярные механизмы, лежащие в основе возрастного снижения функции HFSC, мы использовали высокопроизводительное секвенирование РНК (RNA-seq) для транскрипционного профилирования молодых и старых HFSC в фазе телогена и aHFSC (48 ч после депиляции). Связь каждой популяции клеток с другими была выявлена ​​с помощью алгоритмов неконтролируемой иерархической кластеризации. Как показано на тепловой карте, aHFSCs старых мышей были более похожи на tHFSCs более молодых мышей, чем на молодые aHFSCs ( SI Приложение , рис.S5 A ).

В старых HFSCs большинство генов, измененных более чем в два раза после активации, были подавлены по сравнению с их молодыми аналогами (Fig. 5 A ). Эта когорта включала гены, кодирующие белки внеклеточного матрикса (ЕСМ), такие как люмикан, коллагены, фибронектин, ламинины и тенасцин-C, а также стефины и цистеиновые протеазы, участвующие в ремоделировании внеклеточного матрикса ( SI Приложение , Таблица S1). Эти и другие изменения, вовлеченные в миграцию клеток, согласуются с медлительностью старых HFSCs в инициировании замедления роста HF.

Рис. 5.

Неспособность подавить регуляцию Nfatc1 препятствует активации старых HFSC. ( A ) График вулкана, показывающий дифференцированно регулируемые транскрипты в старых и молодых HFSC через 48 часов после активации, вызванной депиляцией (старые и молодые aHFSC). ( B ) Диаграмма, показывающая перекрытие набора генов сигнатуры выпуклости с возрастными генами с повышенной и подавляющей регуляцией после депиляции. ( C ) уровней Nfatc1 фрагментов на килобазу экзона на миллион считываний (FPKM) из образцов последовательности РНК.n.s., не имеет значения. Планки погрешностей отражают как перекрестную изменчивость, так и неопределенность по оценке Cufflinks (41). ( D ) Объединенные изображения HF до (контроль) и после депиляции у молодых и старых животных. Окрашивание CD34 отмечает выпуклость. Скобки в молодых и старых HF обозначают область выпуклости. (Масштабная шкала, 20 мкМ.) Квадраты обозначают область, а их увеличенное изображение Вставки (1,5 ×) внизу. ( E ) Количественная оценка HF с NFATc1 + HFSC (> 4).Анализы были после депиляции ± лечение VIVIT. Количественная оценка n = 3 для каждой группы. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ( F ) Включение EdU в HFSC от молодых и старых животных после обработки пептидом VIVIT. Брекеты и окрашивание CD34 отмечают выпуклость. (Шкала, 20 мкМ.) ( G ) Количественная оценка включения EdU с помощью проточной цитометрии в HFSC после обработки VIVIT. Данные с рис. 1 E изменены для сравнения. n = 4 молодых; n = 5 лет.Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ( H ) Количественная оценка CFE и размера колоний HFSC, выделенных FACS и культивированных через 48 часов после депиляции от животных, получавших VIVIT. n = 4 для каждой группы. Данные с рис. 2 B изменены для сравнения. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Анализ пути и функциональный анализ возрастных изменений после активации HFSC соответствовал изменениям пролиферации и выживаемости ( SI Приложение , рис. S5 B ). Более того, предполагается, что гены, которые преимущественно подавляются при старении, способствуют этим процессам, тогда как те, которые активируются, участвуют в их подавлении.Примечательно, однако, что мы не нашли доказательств активации локуса Ink4a / 4b , кодирующего белки стресс-ответа p16 и p19 ARF , которые часто активируются при старении (14, 36, 37).

Повышается уровень NFATc1 в старых HFSC и задерживает вход в Анаген.

Учитывая транскрипционное сходство между активированными депиляцией старыми HFSC и их молодыми аналогами в фазе телогена, мы сопоставили наши дифференциально экспрессируемые транскрипты с набором генов подписи bulge (транскрипты, активируемые в молодых HFSC по сравнению с молодыми эпидермальными SC) (15, 23).Интересно, что только 5% возрастных изменений были частью этой сигнатуры (Рис. 5 B и SI Приложение , Рис. S5 C и Таблица S2). Среди этой небольшой группы был устойчивый сигнатурный транскрипт, кодирующий NFATc1, установленный BMP- / кальций-регулируемый фактор транскрипции HFSC, устранение которого стимулирует преждевременное вступление HF в анаген (22) (Рис. 5 C ). Судя по иммунофлуоресценции, ядерный NFATc1 был заметным как в молодых, так и в старых tHFSCs; Однако после депиляции ядерный NFATc1 резко упал в молодых, но не старых HFSC (рис.5 D ).

Чтобы проверить, могут ли повышенные ядерные уровни NFATc1 способствовать возрастным дефектам активации HFSC и их вступлению в анаген, мы использовали малый пептидный ингибитор VIVIT, чтобы заблокировать активность NFAT. VIVIT ингибирует опосредованное кальциневрином дефосфорилирование белков NFATc1 и эффективно блокирует его ядерную транслокацию (22, 38). Количественная оценка показала, что VIVIT стер существенные различия между уровнями NFATc1 у пожилых людей, вызванных депиляцией, по сравнению с другими.молодые HFSCs (рис. 5 E ). Напротив, VIVIT не изменяет резко уровни NFATc1 в молодых HFSC, которые естественным образом подавляют NFATc1 при депиляции. Точно так же, в то время как VIVIT существенно не влиял на пролиферацию и активацию молодых HFSC, VIVIT сильно влиял на пролиферацию и активацию старых HFSC через 48 часов после депиляции (фиг. 5 F и G ). Эти эффекты поддерживались in vitro, поскольку CFE и размер колоний были одинаковыми у старых и молодых животных, получавших VIVIT и депиляцию перед культивированием (рис.5 H ). В целом, эти эксперименты демонстрируют, что, ингибируя активность NFATc1, старые HFSC восстанавливают кинетику активации и CFE до более молодых уровней.

Мишени NFATc1 обогащены среди генов, которые по-разному экспрессируются в HFSC, активируемых депиляцией, у старых и молодых мышей.

Чтобы определить степень, в которой NFATc1 может вносить вклад в устаревшую сигнатуру HFSC, мы выполнили иммунопреципитацию хроматина с последующим анализом глубокого секвенирования (ChIP-seq) для NFATc1 с FACS-изолированными покоящимися HFSC.В общей сложности 3438 генов связывают NFATc1 (~ 15% всех генов) ( SI Приложение , Таблица S3), с пиками, обогащенными промотором и / или проксимальными областями гена ( SI Приложение , Рис. S6 A и В ). ChIP-seq NFATc1 был специфическим, поскольку его мотив был обогащен среди пиков ( SI Приложение , фиг. S6 C ). Фиг. 6 B показывает репрезентативные сигнальные треки ChIP-seq трех генов-мишеней NFATc1 в HFSC. В соответствии с экспрессией NFATc1, ChIP – qRT-PCR подтвердила, что эти гены значительно обогащены HFSC (NFATc1 + ) по сравнению с межфолликулярными эпидермальными клетками [(IFEs) NFATc1 ].

Рис. 6.

мишени NFATc1 обогащены возрастными генами. ( A ) Диаграмма, показывающая перекрытие мишеней NFATc1 (как определено с помощью ChIP-seq) с возрастными генами, регулируемыми вверх и вниз, после депиляции (как определено с помощью RNA-seq). Повышенное (70/185) P = 1,6e-13, пониженное (231 / 1,180) P = 0,0001. ( B , Left ) ChIP-seq треки NFATc1-связанных генов в HFSC. Показаны репрезентативные примеры Nfatc1 , Cited2 и Macf1 (серый – элемент управления вводом; зеленый – NFATc1 ChIP-seq).На оси y показано количество отображенных считываний в каждой геномной позиции. Красными прямоугольниками отмечены пики, обогащенные треком NFATc1. ( B , Right ) ChIP – qRT-PCR на независимых образцах из IFE и HFSC. Зеленые и белые полосы – это контроль NFATc1 и IgG соответственно. ( C ) qRT-PCR репрезентативных генов-мишеней NFATc1 из HFSC, выделенных с помощью FACS от молодых и старых животных через 48 часов после депиляции и старых животных, получавших VIVIT через 48 часов после депиляции. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Еще более интересно то, что из 185 генов, которые более высоко экспрессируются в активированных депиляцией старых HFSC, почти 40% связывают NFATc1 ( P <0,0001) (рис. 6 A ). Более того, в соответствии с ролью NFATc1 как активатора и репрессора транскрипции (39, 40), NFATc1 связывается с 19,5% из 1180 генов ( P = 0,0001), которые после депиляции показали более низкую экспрессию в старых HFSC, чем в молодых. Это было примечательно, учитывая, что менее 15% генов мыши показали связывание NFATc1.

Связанные с возрастом гены-мишени NFATc1 были обогащены функциональными аннотациями, такими как эпителиальная неоплазия и развитие (активированные гены) и клеточная стимуляция, митоз и дифференцировка (подавляемые гены) ( SI Приложение , рис. S6 D ). Более того, эта группа была значительно обогащена сигнатурными генами HFSC ( P <0,0001). Вместе эти находки указывают на то, что повышенный уровень NFATc1 в старых HFSCs вносит заметный вклад в поддержание сигнатуры покоящейся выпуклости.

Чтобы проверить физиологическую значимость этих результатов, мы депилировали молодых и старых животных, а также старых животных, получавших VIVIT, и использовали qRT-PCR для измерения ответа мишеней NFATc1 через 48 часов после депиляции. Как показано на фиг. 6 C , HFSC от старых мышей с обработкой VIVIT имели пониженные уровни мРНК репрезентативных примеров генов с повышенной регуляцией NFATc1 и повышенную экспрессию генов с пониженной регуляцией. В целом, эти данные свидетельствуют о повышенной чувствительности наших дифференцированно регулируемых возрастных генов к колебаниям активности NFATc1.

Повторяющееся использование делает молодые HFSC старыми.

Учитывая нашу способность обнаруживать снижение CFE старых HFSC, которое сохраняется даже тогда, когда активация, вызванная депиляцией in vivo, предшествовала культивированию, мы задались вопросом, может ли дополнительное использование HFSC усилить этот дефект, возможно, даже исчерпав их долгосрочное самообновление. потенциал. Чтобы проверить эту возможность, мы подвергали старых мышей нескольким раундам депиляции (5–7, 42). Действительно, после еще восьми циклов волос их шерсть стала значительно тоньше и седее, чем у необработанных старых и леченных молодых мышей (рис.7 А ). Примечательно, что количественная оценка FACS показала почти двукратное снижение количества HFSC у пожилых людей по сравнению с молодыми после этих нескольких раундов депиляции (рис. 7 B ). Эти различия были подтверждены иммунофлуоресцентной микроскопией ( SI Приложение , рис. S7, A и B ), подчеркивая сильную корреляцию между возрастным, усиленным депиляцией снижением регенерации волос и сопутствующим снижением активации HFSC. Мы также задокументировали снижение количества меланоцитов, что подтвердило поседение волос при повторяющейся депиляции молодых мышей ( SI Приложение , рис.S7 C и D ). Интересно, что этого не наблюдалось у 24-месячных мышей, которых мы использовали для наших исследований ( SI Приложение , рис. S1).

Рис. 7.

HF у молодых мышей с повторяющейся депиляцией имеют сходство с таковыми у старых мышей, подвергнутых однократной депиляции. ( A ) Трехмиллиметровые образцы для биопсии со спины молодых и пожилых контрольных и многократно подвергнутых депиляции животных. n = 5 молодых; n = 4 возраста. круг, раунды. ( B ) Количественная оценка CD34 + α6-интергрина + HFSC у депилированных животных методом проточной цитометрии.Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. n.s., не имеет значения. ( C ) Схематическая диаграмма, иллюстрирующая экспериментальную временную шкалу эксперимента по депиляции. К 7 мес. Животные C57BL6 / J проходят от трех до четырех циклов шерсти. Животные, которым повторно удаляли депиляцию, к 7 мес. Проходят восемь циклов волосяного покрова. ( D ) CFE после повторной депиляции. FACS-изолированные HFSC от контрольных и повторно депилированных животных, окрашенных родамином B. ( E ). Количественная оценка CFE и размера колоний. n = 4 для каждой группы.Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ( F ) Диаграмма, показывающая перекрытие ( P = 7,02e-32) генов-мишеней NFATc1 у животных с повторяющейся и однократной депиляцией.

После восьми раундов депиляции молодые животные (теперь 7 мес.) Прошли через сопоставимое количество циклов волосяного покрова до необработанных мышей в возрасте от 22 до 24 мес (рис. 7 C ) (43). Если использование HFSC приводит к снижению потенциала активации SC, теперь это должно быть обнаружено in vitro . Действительно, при выделении и культивировании эти tHFSC показали более чем двукратное снижение CFE и почти трехкратное уменьшение размера колоний по сравнению с мышами того же возраста, которые прошли только свои обычные четыре, а не восемь циклов (рис.7 D и E ). Эти эксперименты предполагают, что повышенное использование HFSC, по крайней мере, в этих состояниях, вызванных раной, имеет заметный клеточно-автономный эффект на активацию SC.

Наконец, мы проверили, приобрели ли HFSC из повторно депилированной ниши SC другие характеристики старых HFSC. Анализ последовательности РНК молодых tHFSC после восьми раундов депиляции показал, что повторно депилированные молодые HFSC проявляли программу экспрессии генов, которая напоминала однократно депилированные 24-месячные HFSC (aHFSC) ( SI Приложение , рис.S5 A ). Как показано на диаграмме на фиг. 7 F , ~ 35% генов-мишеней NFATc1 были общими среди дифференциально регулируемых наборов генов после однократной депиляции у старых мышей и повторяющейся депиляции молодых мышей. Кроме того, когда образцы были сгруппированы на основе экспрессии мишени NFATc1, образец повторно депилированных HFSC больше напоминал однократно депилированные старые HFSC ( SI Приложение , рис. S6 E ).

Обсуждение

Цикл волос, функция SC и старение.

Один из самых ярких фенотипов, связанных со старостью, – это снижение густоты волос. Наши исследования показывают, что с возрастом области регенерации HF становятся более асинхронными и сложными, периоды покоя HF становятся длиннее, а периоды роста волос укорачиваются. Эти изменения в состоянии покоя и роста ухудшаются после первоначальной потери синхронности в четвертом цикле роста волос, что позволяет предположить, что есть изменения с возрастом, которые способствуют снижению активности HF. Удивительно, но HFSC и SC меланоцитов из стареющих HF присутствовали в количестве, эквивалентном молодым HF, и поэтому изменения в активности цикла волос не были основаны на снижении пула SC.Действительно, только когда подвергались повторяющимся циклам депиляции волос, у мышей обнаруживалось снижение как HFSC, так и SC меланоцитов, что проявлялось в истончении и поседении волос. Эти результаты сродни уменьшенной способности гемопоэтических СК регенерировать костный мозг после серийных раундов трансплантации (44). В совокупности эти результаты предполагают, что у мышей при отсутствии ран, воспалений и / или других атак, улучшающих их использование, SC кожи находятся в достаточном количестве для подпитки роста волос и пигментации в течение нормальной жизни животного.

Наш анализ активности цикла волос показал, что сигнал анагена все еще присутствует у старых животных с частотой и продолжительностью, аналогичными молодым животным. Это указывает на то, что задержка входа в анаген происходит не из-за отсутствия стимула, а скорее из-за дефекта способности HFSCs эффективно инициировать анаген. Более того, увеличенные периоды HF покоя существуют даже в пределах триплетов HF кожи хвоста и, таким образом, простираются за пределы макросреды в микросреду. Более того, при наличии сильного стимула (депиляции) к размножению старые HF равномерно переходят в анаген, как и более молодые животные.Эти данные демонстрируют, что старые HFSC не являются непоправимо поврежденными или стареющими. Мы также не наблюдали никаких признаков несоответствующей предопределенности клонов предшественников (как видно в старых гемопоэтических СК). В этом отношении особенности стареющих HFSCs оказались отличными от многих других популяций SC.

Самостоятельное продление по сравнению с активацией SC.

Когда мыши достигли возраста 12 мес. И после этого прогрессировали, способность их HFSC образовывать колонии in vitro начала снижаться. С этим снижением совпадала прогрессирующая неспособность HF полностью отрастить волосяной покров во время анагена ( SI Приложение , рис.S3). Априори это может быть либо признаками снижения самообновления, либо указанием на то, что стареющие HFSC по своей природе более устойчивы к активации / пролиферации. Наши результаты подтверждают обе возможности. Таким образом, CFE не полностью восстанавливается вызванной депиляцией стимуляцией старых HFSC, а старые холоклоны, полученные из HFSC, действительно показывают снижение самообновления после 10 пассажей in vitro или после нескольких раундов депиляции in vivo . Тем не менее, львиная доля возрастных дефектов волос связана с усилением передачи сигналов BMP / NFATc1 в старых HFSCs.

Влияние внутренних и макроэкономических факторов на старение HFSC.

Наши исследования парабиоза, в которых мы подвергали старые HFSC воздействию молодой системной среды, дали примерно двукратное увеличение CFE in vitro , , что сопоставимо с омоложением, наблюдаемым в популяциях нервных СК после гетерохронного парабиоза (9). Более того, мы не наблюдали вредного воздействия на молодые HFSC, культивируемые из гетерохронных и изохронных пар. Конкретное улучшение старых HFSC было интригующим в свете повышенного системного GDF11, обнаруженного у более молодых мышей (11).Агонисты передачи сигналов TGF-β, как было показано, противодействуют внутренней передаче сигналов BMP в HFSCs (45), что, как можно ожидать, будет иметь преимущественную пользу для старых HFSC. Тем не менее, эффекты гетерохронного парабиоза в старых HFSC in vivo были значительно менее драматичными, чем наблюдаемые in vitro или по сравнению со старыми мышечными SC (сателлитными клетками). Отражает ли это более бессосудистую природу телогеновых HF по сравнению с мышечной тканью (24, 46), требует дальнейшего изучения.

Моделирование циклов HF предсказывает, что увеличение уровней ингибиторов или снижение возбуждающих сигналов может разъединять синхронизацию анагена, которая затем полагается исключительно на внутренние механизмы активации для инициации анагена (25).Наши данные подтверждают эту модель, поскольку старые HFSC более спокойны и их труднее активировать, чем их более молодые аналоги. Кроме того, проанализировав относительную важность внешних и внутренних факторов, мы узнали, что возрастное снижение активности HFSC происходит из-за комбинации как повышенной внутренней чувствительности HFSC к передаче сигналов BMP, так и повышения локальных уровней BMP в пределах состарившаяся кожа.

Механистические выводы, лежащие в основе возрастного снижения активности HFSC.

Механизм отслеживания, мы были приведены к регулируемой BMP активности Nfatc1 и NFATc1 в качестве ключевого фактора повышенного внутреннего порога, который проявляют стареющие HFSCs при вызове сигналов анагена. Путем выборочного подавления Nfatc1 (путем блокирования активности BMP) и / или NFATc1 (путем блокирования транскрипционной активности NFATc1) мы предоставили убедительные доказательства того, что неспособность правильно подавить Nfatc1 / NFATc1 во время активации HFSC задерживает начало старения. ВЧ в цикл волос.В совокупности эти изменения делают стареющие HFSC менее способными реагировать на сигналы анагена и пролиферировать. Местная среда, хотя и недостаточна сама по себе, вносит свой вклад в этот ответ, поскольку уровни BMP повышены в окружающей жировой ткани старых мышей. Это налагает более высокий экологический порог для активации старых HFSC, как показали наши эксперименты по выщипыванию волос. В целом, результатом является менее скоординированный, асинхронный анаген между соседними HF, летаргический ответ HFSC на сигналы активации анагена и уменьшение густоты волос с возрастом.

Наконец, наш анализ ChIP-seq показал, что из изменений экспрессии генов, специфичных для старых HFSCs, ~ 22% являются мишенями для NFATc1. Более того, многие из этих изменений как в Nfatc1 / NFATc1, так и в его генах-мишенях были воспроизведены в HFSC от более молодых животных, которые подвергались повторяющейся депиляции. Эти данные подчеркивают корреляцию между возрастным снижением активности HFSC и повышенным использованием HFSC. Более того, они подчеркивают особую важность усиленной передачи сигналов BMP / NFATc1 в объяснении многих наблюдаемых нами возрастных изменений HFSCs.

В заключение, остается ряд вопросов. Существуют ли специфические гены-мишени NFATc1, которые являются ключевыми для процесса старения, или совокупность связанных с возрастом мишеней NFATc1 вносит коллективный вклад? Почему экспрессия такого количества генов в старых HFSC подавлена? Некоторые из них являются мишенями для NFATc1, но участвует ли NFATc1 непосредственно в их подавлении или есть другие способствующие этому факторы? Включают ли изменения генов, не связанных с NFATc1, внутреннюю чувствительность, которую, по-видимому, имеют старые HFSCs в передаче сигналов BMP / NFATc1? Если да, то как? Существуют ли другие факторы, которые объясняют связанное с употреблением снижение самообновления, наблюдаемое при длительном прохождении in vitro или повторяющейся депиляции in vivo, или же снижение передачи сигналов BMP / NFATc1 будет достаточным для восстановления в долгосрочной перспективе молодости старых HFSCs? Ответы на эти вопросы, хотя и выходят за рамки настоящего исследования, несомненно, продолжат привносить новые интересные изюминки в увлекательный процесс старения кожи.

Материалы и методы

Мыши и эксперименты с этикетками.

Пожилые (возраст 22–24 мес.) Животные C57BL6 были получены из колонии стареющих грызунов Национальных институтов старения, а молодые животные (в возрасте 2–4 мес.) Были получены из лабораторий Джексона. Для животных из старой колонии грызунов мы выбрали животных с «хорошей шерстью», чтобы избегать животных с явными признаками дерматита, драки, царапин и воспалений. Пожилым животным, использованным в этом исследовании, также было проведено быстрое вскрытие, чтобы выбросить животных с видимой неоплазией.Мыши K14-RFP для исследований роста колоний in vitro были получены ранее (27). Депиляция HF проводилась на анестезированных мышах, как описано (42). Для экспериментов по выщипыванию волос стригли волосы на спине и отмечали область выщипывания с помощью шаблона. Волосы удаляли щипцами и контролировали рост волос. Для экспериментов с импульсами EdU мышам вводили внутрибрюшинно. (50 мкг / г) (Sigma-Aldrich) в указанное время дважды в день (12-часовые интервалы). ВИВИТ (10 мг / кг) вводили внутримышечно.п. раз в день. Операции по парабозу были выполнены, как было опубликовано ранее (33). Пары парабиотиков были объединены в возрасте 2 мес. (Молодые) и 24 мес. (Возраст) и содержались 2 мес. Перед анализом. Для инъекций Noggin рекомбинантный мышиный Noggin (R&D Systems) вводили внутрикожно с FluoSpheres (Invitrogen) в течение 3 дней подряд. EdU вводили через 4 дня после последней инъекции Noggin, и животных собирали, и включение EdU оценивали в волосяных зародышах фолликулов рядом с местом инъекции (отмечены FlouSpheres).

Все животные содержались в Американской ассоциации по аккредитации ухода за лабораторными животными (AAALAC), одобренном Международным центром сравнительной биологии при Университете Рокфеллера, и процедуры выполнялись с использованием институциональных методов ухода за животными и утвержденных комитетом протоколов, которые придерживаются стандарты Национальных институтов здоровья (NIH).

Исследование цикла волос.

Для мониторинга цикла волос у молодых (2 мес.) И пожилых (24 мес.) Животных волосы на спине подстригали электрическими машинками для стрижки, и вход HF в анаген наблюдали по возобновлению роста волос и появлению потемнения кожи.Животных проверяли с интервалами 3–4 дня в течение 200 дней и регистрировали области, которые вступили в анаген. Независимый набор молодых животных ( n = 3) использовался для мониторинга второго цикла волосяного покрова, а второй набор ( n = 5) молодых мышей для циклов 3 и 4 для старых животных ( n = 7). ). Мышей помещали в одиночную клетку, чтобы избежать анагена в результате ранения. Области, где наблюдался рост волос, были повторно обрезаны, чтобы можно было наблюдать за будущими событиями. Чтобы контролировать отдельные участки на предмет анагена и входа телогена, кожу спины делили на 15 участков и определяли временные интервалы между наступлением анагена.

Для анализа данных о цикле роста волос области кожи, которые вступили в анаген (на основе пигментации), были закрашены на масштабной карте кожи спины. Эти карты были отсканированы, оцифрованы и проанализированы в специализированном конвейере на основе MATLAB (MathWorks). Изображения каждой временной точки были сегментированы с использованием алгоритма водораздела, и площадь и количество областей анагена были рассчитаны и выражены в процентах от двумерной площади кожи спины, предполагаемой одинаковыми для всех мышей. Чтобы сравнить общую картину и частоту анагена у молодых и старых мышей, сегментированные двоичные изображения каждой временной точки были суммированы за проанализированные 200 дней, так что интенсивность изображения в данной области будет соответствовать количеству раз, когда она была обнаружена. быть в анагене.Суммированное изображение было сглажено с помощью медианного фильтра с окном 64 × 64 пикселя и отображено в виде тепловой карты.

РНК-Seq и анализ.

FACS-изолированные HFSC сортировали непосредственно в TrizolLS (Invitrogen). По каждому условию объединяли трех животных. РНК очищали с использованием набора Direct-zol RNA MiniPrep (Zymo Research) в соответствии с инструкциями производителя. Качество РНК для секвенирования определяли с помощью биоанализатора Agilent 2100; все использованные образцы имели числа целостности РНК> 8.Подготовка библиотеки с использованием набора для подготовки образцов мРНК Illumina TrueSeq была проведена в Центре геномного ядра Медицинского колледжа Weill Cornell (Нью-Йорк), а РНК были секвенированы на машинах Illumina HiSEq 2000. Выравнивание считываний проводили с помощью Tophat с построением mm9 генома мыши. Сборку транскриптов и дифференциальную экспрессию определяли с использованием запонок с мРНК Refseq для руководства сборкой (47). Анализ данных RNA-seq был выполнен с использованием пакета cummeRbund в R (41). Транскрипты регулируются как больше, так и меньше 1.Пятикратное использование было использовано в Анализе пути изобретательности (IPA) (Системы изобретательности) для нахождения расширенных функциональных аннотаций.

Культура клеток.

Жизнеспособность

HFSC определяли с помощью окрашивания трипановым синим (Sigma) с использованием гемоцитометра после выделения FACS. Равное количество живых клеток в трех экземплярах высевали на обработанные митомицином С дермальные фибробласты в E-media с добавлением 15% (об. / Об.) Сыворотки и 0,3 мМ кальция (48). Через 14 дней культивирования клетки фиксировали и окрашивали 1% (вес / объем) родамином B (Sigma).Диаметр колонии измеряли по сканированным изображениям чашек с использованием изображения J и подсчитывали количество колоний. Для длительного пассирования по отдельности клонировали 10 колоний и выращивали в течение 20 пассажей. Образование холокона определялось ростом и морфологией клеток. Для измерения адгезии в анализах CFE HFSC от мышей K14-RFP высевали на питающие клетки и давали им прилипнуть в течение 12 часов. Среду меняли и подсчитывали количество клеток в 10 независимых полях. Для роста колоний визуализировали отдельные колонии и вручную подсчитывали клетки в колониях.Для экспериментов с обработкой BMP4 свежевыделенные HFSC, выращенные in vitro в течение 12 дней, голодали по сыворотке в течение 24 часов, а затем обрабатывали рекомбинантным Bmp4 (R&D Systems) при 100 нг / мл в течение 4 часов. Для обработки Wnt культуры обрабатывали Wnt3a (R&D Systems) в концентрации 100 нг / мл в течение 12 часов. Клетки собирали непосредственно в TRIzol (Invitrogen), и РНК экстрагировали для qRT-PCR (см. qRT-PCR ).

Гистология и иммунофлуоресценция.

Кожные ткани спины помещали в смесь с оптимальной температурой резки и замораживали, делали криосрезы (10–12 мкм) и фиксировали в 4% (мас. / Об.) Параформальдегиде, а затем подвергали иммунофлуоресцентной микроскопии или окрашиванию H&E, как описано ранее (49).Используемые антитела (и их разведения) были следующими: анти-LHX2 (кролик, 1: 1000; лаборатория EF), анти-CD34 (крыса, 1: 100; Pharmingen), анти-GFP (кролик, 1: 500; Invitrogen), анти-Ki67 (кролик, 1: 500; Novocastra), анти-NFATc1 (мышь, 1: 500; Abcam), Id2 (кролик, 1: 1000; BioCheck Inc.), KIT (крыса, 1: 1000; BD Pharmingen), Keratin 5 (морская свинка, 1: 500; лаборатория EF), MITF (мышь, 1: 100; Abcam), TYRP1 [кролик, 1: 1000; подарок от В. Дж. Хиринга (Национальный институт рака, NIH, Bethesda, MD)]; Активная каспаза-3 (кролик, 1: 1000; R&D Systems) и анти-pSmad1 / 5/8 (кролик, 1: 1000, Millipore).Вторичные антитела, конъюгированные с Alexa-488 и Alexa-647 (молекулярные зонды), использовали для визуализации. Ядра окрашивали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Окрашивание EdU выполняли с использованием набора Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителя. MOM Basic Kit (Vector Laboratories) использовали для блокирования, когда первичные антитела были получены от мышей (антитело Nfatc1). Подготовку цельных креплений кожи хвоста для визуализации выполняли, как описано в исх.50. Получение изображений выполняли на лазерных сканирующих конфокальных микроскопах Zeiss Axioplan 2, Zeiss Apotome и Zeiss Inverted LSM 780. Рисунки были подготовлены с использованием ImageJ, Adobe Photoshop и Illustrator CS5.

Проточная цитометрия.

Подготовка кожи спины взрослых мышей для выделения HFSC и протоколы окрашивания выполнялись, как описано ранее (48). Вкратце, s.c. жир удаляли с кожи с помощью скальпеля, и кожу помещали дермой вниз на трипсин (Gibco) при 37 ° C на 45 мин.Суспензии единичных клеток получали соскабливанием с кожи для удаления эпидермиса и HF с дермы. Затем клетки фильтровали через 70-мм, а затем 40-мм сетчатые фильтры. Суспензии клеток инкубировали с соответствующими антителами в течение 30 мин на льду. Для FACS использовали следующие антитела: интегрин α6 (eBiosciences, PE-конъюгированный), CD34 (eBiosciences, AlexaFluor 647-конъюгированный) и Sca-1 (eBiosciences, Alexa Fluor 700-конъюгированный). DAPI использовался для исключения мертвых клеток. Выделение клеток выполняли на сортировщиках FACSAria с использованием программного обеспечения FACSDiva (BD Biosciences).FACS-анализ проводился с использованием анализаторов LSRII FACS Analyzers, а результаты анализировались с помощью FlowJo. Для включения EdU в HFSC окрашивание проводили с использованием набора для проточной цитометрии Click-iT EdU Alexa Fluor 488 (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителя.

qRT-PCR.

РНК

очищали из FACS-отсортированных клеток путем прямой сортировки в TrizolLS (Invitrogen) и очищали с использованием набора Direct-zol RNA MiniPrep (Zymo Research). Эквивалентные количества РНК подвергали обратной транскрипции с помощью набора для синтеза кДНК SuperScript VILO (Invitrogen).кДНК были нормализованы до равных количеств с использованием праймеров против β-актина. кДНК смешивали с указанными праймерами и Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), и qRT-PCR выполняли в системе Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR. Последовательности праймеров для qRT-PCR были получены от Roche Universal ProbeLibrary.

ChIP-Seq и анализ данных.

Все материалы, методы и последовательность описаны (23, 48). Независимые иммунопреципитации проводили на популяциях самок мышей, отсортированных по FACS.Клетки (20 × 10 6 ) использовали для ChIP с антителом против Nfatc1 (Abcam, ab2796). Вкратце, отсортированные клетки поперечно сшивали в 1% (мас. / Об.) Растворе формальдегида, ресуспендировали, лизировали и обрабатывали ультразвуком для солюбилизации и сдвига поперечно-сшитых ДНК. Для обработки ультразвуком лизаты обрабатывали 1% (об. / Об.) Triton X-100, а затем подвергали воздействию Bioruptor Sonicator (Diagenode, UCD-200) в соответствии с 30-кратным режимом обработки ультразвуком в течение 30 секунд с последующим 60-секундным отдыхом. Полученный экстракт цельных клеток инкубировали в течение ночи при 4 ° C с 20 мкл магнитных шариков Dynal Protein G (Invitrogen), которые были предварительно инкубированы с ~ 10 мкг соответствующего Ab.После ChIP образцы были промыты, а связанные комплексы элюированы и подвергнуты обратному сшиванию.

ChIP ДНК была подготовлена ​​для секвенирования. Адаптер Oligo Mix (Illumina) использовали на этапе лигирования. На последующем этапе ПЦР с 25 циклами амплификации к фрагментам была добавлена ​​дополнительная линкерная последовательность Solexa, чтобы подготовить их для отжига в проточной ячейке анализатора генома. После амплификации был выбран диапазон размеров фрагментов от 150 до 300 п.н., и ДНК была очищена и разбавлена ​​до 10 нМ для загрузки в проточную кювету.Секвенирование выполняли на секвенсоре Illumina HiSEq 2500 в соответствии с протоколами производителя.

чтения ChIP-Seq были сопоставлены с геномом мыши (mm9, сборка 37) с использованием выравнивателя Bowtie (49, 51). Программа SPP (52) использовалась для вызова пиков с данными из входа ChIP в качестве контроля. Аннотированные мышиные гены RefSeq с пиком на проксимальном участке промотора [± 2 т.п.н. от сайта начала транскрипции (TSS)], дистальном промоторе (от −50 до −2 т.п.н. TSS) или в теле гена (от +2 т.п.н. от TSS до ± 2 т.п.н. конечного сайта транскрипции) рассматривались как мишени.Программный пакет Multiple EM for Motif Elicitation (MEME) (48, 53) был применен к последовательностям длиной 150 п.н. вокруг вершин пиков ChIP-Seq для обогащенных мотивов с помощью программы MEME для обнаружения мотивов и средства поиска и выравнивания мотивов (MAST). для сканирования мотивов (значение P <0,0005). Сигнальные дорожки ChIP-Seq были представлены программным обеспечением Integrative Genomics Viewer (IGV). Исходные данные ChIP-seq были депонированы в базе данных Gene Expression Omnibus (www.ncbi.nlm.nih.gov/geo) (инвентарные номера GSE52328 и GSE48878).

Статистика.

Тест Стьюдента t использовался для определения значимости между двумя группами с помощью программного обеспечения Prism5. Графики в виде ящиков и усов используются для описания всей популяции без предположений о статистическом распределении. Для всех статистических тестов уровень достоверности 0,05 был принят как значимая разница.

Отслеживание происхождения стволовых клеток волосяного фолликула

  • 1.

    Xin, T., Greco, V. & Myung, P. Жесткая связь стволовых клеток через структуру ткани. Ячейка 164 , 1212–1225 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 2.

    Guiu, J. et al. Отслеживание происхождения стволовых клеток кишечника взрослых. Природа 570 , 107–111 (2019).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 3.

    Успенская Т., Матос И., Мерц А. Ф., Фиоре В. Ф. и Фукс Е. Антагонизм WNT – SHH специфицирует и увеличивает стволовые клетки до образования ниши. Ячейка 164 , 156–169 (2016).

    Артикул Google ученый

  • 4.

    Lecuit, T. & Cohen, S. M. Формирование проксимально-дистальной оси в ноге Drosophila . Nature 388 , 139–145 (1997).

    Артикул Google ученый

  • 5.

    Ruiz-Losada, M., Blom-Dahl, D., Córdoba, S. & Estella, C. Спецификация и формирование паттерна отростков Drosophila . J. Dev. Биол . 6 , E17 (2018).

    Артикул Google ученый

  • 6.

    Писпа, Дж. И Теслефф, И. Механизмы эктодермального органогенеза. Dev. Биол . 262 , 195–205 (2003).

    CAS Статья Google ученый

  • 7.

    Фудзивара, Х., Цуцуи, К. и Морита, Р. Многозадачные эпидермальные стволовые клетки: за пределами поддержания эпидермиса. Dev. Разница в росте . 60 , 531–541 (2018).

    Артикул Google ученый

  • 8.

    Соланас, Г. и Бенита, С. А. Регенерация кожи: задача для гетерогенного пула стволовых клеток и окружающей ниши. Нат. Rev. Mol. Ячейка Биол . 14 , 737–748 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 9.

    Новак, Дж.A., Polak, L., Pasolli, H.A. & Fuchs, E. Стволовые клетки волосяного фолликула специфичны и функционируют в раннем морфогенезе кожи. Cell Stem Cell 3 , 33–43 (2008).

    Артикул Google ученый

  • 10.

    Liu, Y., Lyle, S., Yang, Z. & Cotsarelis, G. Промотор Keratin 15 нацелен на предполагаемые эпителиальные стволовые клетки в выпуклости волосяного фолликула. J. Invest. Дерматол . 121 , 963–968 (2003).

    CAS Статья Google ученый

  • 11.

    Rhee, H., Polak, L. & Fuchs, E. Lhx2 поддерживает характер стволовых клеток в волосяных фолликулах. Наука 312 , 1946–1949 (2006).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 12.

    Хорсли, В., Алипрантис, А. О., Полак, Л., Глимчер, Л. Х. и Фукс, Э. NFATc1 уравновешивает покой и пролиферацию стволовых клеток кожи. Ячейка 132 , 299–310 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 13.

    Xu, Z. et al. Ослабленная эмбриональная передача сигналов Wnt / β-catenin определяет расположение ниши и долгосрочную судьбу стволовых клеток в волосяном фолликуле. eLife 4 , e10567 (2015).

    Артикул Google ученый

  • 14.

    Morita, R. et al. Координация клеточной динамики способствует деформации эпителия зубов. PLoS ONE 11 , e0161336 (2016).

    Артикул Google ученый

  • 15.

    Цуцуи, Х., Карасава, С., Симидзу, Х., Нукина, Н. и Мияваки, А. Полурациональная инженерия кораллового флуоресцентного белка в эффективный маркер. EMBO Rep . 6 , 233–238 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • 16.

    Хаяси Т.и другие. Одноклеточное секвенирование полноразмерной тотальной РНК раскрывает динамику рекурсивного сплайсинга и энхансерных РНК. Нат. Коммуна . 9 , 619 (2018).

    ADS Статья Google ученый

  • 17.

    Qiu, X. et al. Количественное определение мРНК одной клетки и дифференциальный анализ с помощью Census. Нат. Методы 14 , 309–315 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 18.

    Qiu, X. et al. Обратное вложение графа разрешает сложные одноклеточные траектории. Нат. Методы 14 , 979–982 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 19.

    Huelsken, J., Vogel, R., Erdmann, B., Cotsarelis, G. & Birchmeier, W. β-катенин контролирует морфогенез волосяного фолликула и дифференцировку стволовых клеток в коже. Ячейка 105 , 533–545 (2001).

    CAS Статья Google ученый

  • 20.

    Närhi, K. et al. Sostdc1 определяет размер и количество плакод придатков кожи. Dev. Биол . 364 , 149–161 (2012).

    Артикул Google ученый

  • 21.

    Kandyba, E. et al. Конкурентный баланс передачи сигналов BMP / Wnt внутри выпуклости выявляет надежную генную сеть, управляющую гомеостазом стволовых клеток и циклической активацией. Proc. Natl Acad. Sci. США 110 , 1351–1356 (2013).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 22.

    Genander, M. et al. Передача сигналов BMP и его гены-мишени pSMAD1 / 5 по-разному регулируют клоны стволовых клеток волосяного фолликула. Стволовая клетка 15 , 619–633 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 23.

    Joost, S. et al. Одноклеточная транскриптомика показывает, что дифференциация и пространственные сигнатуры формируют гетерогенность эпидермиса и волосяного фолликула. Cell Syst . 3 , 221–237 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 24.

    Kandyba, E., Hazen, VM, Kobielak, A., Butler, SJ & Kobielak, K. Smad1 и 5, но не Smad8, устанавливают покой стволовых клеток, который имеет решающее значение для трансформации преждевременного волосяного фолликула во время морфогенеза в сторону послеродовое состояние. Стволовые клетки 32 , 534–547 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 25.

    Саксена Н., Мок К. В. и Рендл М. Обновленная классификация морфогенеза волосяных фолликулов. Exp. Дерматол . 28 , 332–344 (2019).

    Артикул Google ученый

  • 26.

    Майни, П. К., Бейкер, Р. Э. и Чуонг, К. М. Модель Тьюринга имеет молекулярный возраст. Наука 314 , 1397–1398 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • 27.

    Ahtiainen, L. et al. Направленная миграция клеток, но не пролиферация, управляет морфогенезом волосяных плакод. Dev. Ячейка 28 , 588–602 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 28.

    Glover, J. D. et al. Иерархические режимы формирования паттернов управляют морфогенезом волосяных фолликулов. ПЛоС Биол . 15 , e2002117 (2017).

    Артикул Google ученый

  • 29.

    Abe, T. et al. Создание условных репортерных линий мышей в локусе ROSA26 для визуализации живых клеток. Бытие 49 , 579–590 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 30.

    Vassar, R., Rosenberg, M., Ross, S., Tyner, A. & Fuchs, E. Тканеспецифическая и дифференцировочно-специфическая экспрессия гена кератина человека K14 у трансгенных мышей. Proc. Natl Acad. Sci. США 86 , 1563–1567 (1989).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 31.

    Sakaue-Sawano, A. et al. Визуализация пространственно-временной динамики развития многоклеточного клеточного цикла. Ячейка 132 , 487–498 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 32.

    Biggs, L.C. et al. Дермальная конденсация волосяного фолликула формируется за счет выхода примированного Fgf20 клеточного цикла, подвижности клеток и агрегации. eLife 7 , e36468 (2018).

    Артикул Google ученый

  • 33.

    Stuart, T. et al. Всесторонняя интеграция одноклеточных данных. Ячейка 177 , 1888–1902 (2019).

    CAS Статья Google ученый

  • 34.

    La Manno, G. et al. Скорость РНК одиночных клеток. Природа 560 , 494–498 (2018).

    ADS Статья Google ученый

  • 35.

    Angerer, P. et al. destiny: диффузионные карты для крупномасштабных одноклеточных данных в R. Bioinformatics 32 , 1241–1243 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 36.

    Street, K. et al. Slingshot: происхождение клеток и псевдодинамический вывод для транскриптомики одиночных клеток. BMC Genomics 19 , 477 (2018).

    Артикул Google ученый

  • 37.

    Yu, G., Wang, L.G., Han, Y. & He, Q. Y. clusterProfiler: пакет R для сравнения биологических тем среди генных кластеров. OMICS 16 , 284–287 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 38.

    Nakao, K. et al. Разработка метода биоинженерных зародышей органов. Нат. Методы 4 , 227–230 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Гормональное воздействие на волосяные фолликулы

    Репродуктивный период у женщин может зависеть от ряда гормональных нарушений, таких как гиперандрогения, заболевания щитовидной железы и гиперпролактинемия. Эти эндокринные нарушения, а также гиперкортизолизм и чрезмерная секреция гормона роста, которые встречаются гораздо реже, могут привести к нарушениям роста волос, таким как гирсутизм, выпадение волос по женскому типу и другие формы алопеции.Гирсутизм – распространенное эндокринное заболевание, которое встречается у 5–10% женщин репродуктивного возраста и определяется как чрезмерное количество терминальных волос по мужскому типу у женщин [45]. Андрогены, такие как тестостерон (T), дигидротестостерон (DHT) и их прогормоны дегидроэпиандростерон сульфат (DHEAS) и андростендион (A), являются ключевыми факторами роста конечных волос. Они действуют на специфические для пола участки тела, превращая маленькие прямые светлые пушковые волосы в более крупные, вьющиеся и более темные терминальные волосы [46].Гирсутизм наблюдается у женщин, когда наблюдается чрезмерный рост терминальных волос в определенных для пола областях, как правило, из-за избытка андрогенов [47]. Приблизительно у 70–80% женщин с повышенным уровнем андрогенов наблюдается гирсутизм, хотя у многих из них наблюдается чрезмерное оволосение без гиперандрогенемии. Гирсутизм вызывается в основном взаимодействием между андрогенами плазмы и очевидной чувствительностью волосяного фолликула к андрогенам, в зависимости от уровней активности 5-альфа-редуктазы и последующего связывания с рецептором андрогенов [46,47].Для оценки степени гирсутизма используется модифицированная версия визуальной оценки Ферримана – Галлвея [48]. Система баллов оценивает девять участков тела и присваивает баллы от 0 (отсутствие волос) до 4 (значительный рост волос), поэтому максимальный общий балл составляет 36. У здоровых женщин общий балл обычно ниже 8. (но это зависит от этнической принадлежности женщин). Наиболее частой причиной гирсутизма является синдром поликистозных яичников (СПКЯ), который составляет три из каждых четырех случаев [49,50].Другие причины избытка андрогенов возникают гораздо реже. Неклассическая врожденная гиперплазия надпочечников встречается только у 1,5–2,5% женщин с гиперандрогенизмом, а опухоли, секретирующие андрогены, встречаются примерно у 0,32% этих женщин. Такие заболевания, как синдром Кушинга, гиперпролактинемия, акромегалия и дисфункция щитовидной железы, также должны быть исключены как причины избытка андрогенов [51]. Гирсутизм следует отличать от гипертрихоза, который представляет собой чрезмерный рост волос, распространяющийся по генерализованному, несексуальному типу, и не вызванный избытком андрогенов, а часто является результатом использования определенных лекарств (например,г., фенитоин, циклоспорин). Лечение гирсутизма зависит от причины и тяжести состояния, но обычно основывается на фармакологической терапии (комбинированные эстроген-прогестиновые оральные контрацептивы, антиандрогенные препараты) и методах прямого удаления волос [51]. Второе заболевание, связанное с андрогенами. избыток у женщин репродуктивного возраста – облысение по женскому типу (FPHL). FPHL характеризуется снижением густоты волос в центральной области кожи головы, за исключением передней линии роста волос.Связь между выпадением волос и избытком андрогенов не ясна. Большинство женщин с лобно-центральным типом выпадения волос имеют нормальные циркулирующие андрогены и не проявляют никаких других симптомов гиперандрогении, таких как гирсутизм или нерегулярные менструации / ановуляция [52]. Этот тип выпадения волос также был обнаружен у женщин, лишенных рецепторов андрогенов, с дефицитом постпубертатной андрогенизации или полным отсутствием андрогенов в сыворотке крови. Поэтому дерматологи используют фразу «выпадение волос по женскому типу» вместо андрогенетической алопеции, чтобы не предполагать роль избытка андрогенов в этом типе выпадения волос [53,54,55].С другой стороны, многие женщины с гиперандрогенизмом также демонстрируют и жалуются на выпадение волос на коже головы, что указывает на роль андрогенов в FPHL. Усиление действия андрогенов на коже головы может происходить из-за повышенной активности 5-альфа-редуктазы и более высоких концентраций ДГТ или из-за связывания андрогенов с рецепторами андрогенов [53]. Выпадение волос по женскому типу может впервые появиться в подростковом / раннем взрослом возрасте или в пери- или постменопаузальном возрасте. У пациентов с избытком андрогенов обычно развивается FPHL в молодом взрослом возрасте, а причина FPHL у женщин в постменопаузе более сложна и также может зависеть от дефицита эстрогенов.Существует также роль генетических факторов в развитии облысения по женскому типу (т.е. полиморфизмы в гене ароматазы) и хроническом воспалении кожи головы слабой степени [56,57,58]. Лечение FPHL следует начинать с миноксидила (5%), добавления ингибиторов 5-альфа-редуктазы или антиандрогенов при сильном выпадении волос или гиперандрогении [52]. Роль и преимущества измерения пролактина у пациентов с FPHL спорны и неясны. Futterweit et al. сообщили в своем исследовании, что среди 109 пациентов с облысением по женскому типу 7.2% страдали гиперпролактинемией и 1,8% – пролактиномой [59]. После гипо- и гипертиреоза гиперпролактинемия является следующим наиболее частым эндокринным триггером телогенового оттока. При тиреотоксикозе волосы на коже головы тонкие и мягкие, и диффузное выпадение волос на коже головы происходит у 20–40% пациентов, хотя интенсивность этого выпадения напрямую не связана с тяжестью эндокринных нарушений [60]. При гипертиреозе также наблюдается очаговая алопеция, а также выпадение волос в подмышечных впадинах, лобке, теле и бровях.Волосы при гипотиреозе тусклые, грубые и ломкие из-за пониженной секреции кожного сала, а диффузная алопеция наблюдается почти у 50% этих пациентов. Также наблюдается выпадение волос на гениталиях и бороде [60]. Многие кожные проблемы также заметны у пациентов с аутоиммунным заболеванием щитовидной железы, независимо от функции щитовидной железы. Гнездная алопеция обычно связана с аутоиммунным заболеванием, которое вызывает дисфункцию щитовидной железы, и диффузная алопеция может наблюдаться примерно в 60% этих случаев [60,61].

    Визуализация и анализ длины и плотности корневых волосков – Департамент растениеводства

    1. Заполните одну чашку Петри деионизированной водой, а вторую чашку – 0,05% красителем толуидиновым синим. Используя щипцы, погрузите корень в синий краситель примерно на 5 секунд. Промойте корень в деионизированной воде. Поместите корень на стеклянную пластину размером 3 x 5 дюймов. Нанесите пипеткой DI воду на корень, пока он не покроется, чтобы подвесить корневые волоски. Поместите пластину на предметный столик препаровального микроскопа.
    2. Используйте прикрепленный к камере микроскоп (Nikon Digital Sight), подключенный к компьютеру с NIS Elements.В разделе «Настройки камеры» установите «Быстрый фокус» на 640×480, чтобы увеличить скорость камеры при фокусировке, и установите «Качество (захват)» на 2560×1920, чтобы максимально повысить качество захваченного изображения. Выберите вкладку «Масштаб», которая понадобится для масштабирования изображения для анализа в ImageJ. Отрегулируйте увеличение до 2x. Включите гибкий свет и подсветку основания микроскопа, чтобы осветить сцену по мере необходимости.
    3. Чтобы сделать снимок, нажмите кнопку «Авто» в NIS Elements. Ваше изображение появится внизу окна, и его можно будет переименовать.Изображения должны автоматически сохраняться в той же папке. (Включите фотографию с гемацитометром или линейкой для масштабирования изображения.)

    Анализ изображений

    1. Загрузите бесплатную программу анализа изображений ImageJ с веб-сайта NIH (http://rsbweb.nih.gov/ij/).
    2. Откройте калибровочное изображение. Выберите инструмент «Линия», увеличьте масштаб (нажмите ‘+’ и удерживайте клавишу пробела, чтобы переместить изображение с курсором) и внимательно проследите известное расстояние на изображении, например 1 мм на линейке. Используйте «Анализировать» и «Установить масштаб», установите известное расстояние и единицу (в данном случае это 1.00 и мм) выберите «Глобальный». Это установит масштаб изображения для всех ваших изображений, поэтому результаты / вывод будут в выбранной вами единице.
    3. Импортируйте папку изображений с помощью «Файл», «Импорт», «Последовательность изображений». Если у вас много изображений, выберите опцию «виртуальный стек», чтобы ускорить импорт. Если изображения не загружаются, перейдите в «Редактировать», «Параметры», «Память и потоки» и увеличьте объем памяти, выделенной ImageJ, исходя из ОЗУ вашего компьютера. Вы также можете открывать по одному изображению за раз, используя «Файл», «Открыть» или «Открыть далее».
    4. В разделе «Анализировать», «Установить измерения …» выберите «Отображать метку», чтобы включить имя файла в выходные данные результатов.
    5. Длина корневого волоса. Откройте изображение корневых волос. Выберите инструмент «Линия» (щелкните правой кнопкой мыши для «прямой линии», «сегментированной линии» или «от руки» в зависимости от ваших предпочтений). Отследите и измерьте длину интересующих корневых волосков. Нажмите «M», чтобы записать измерение в окне результатов. Когда вы закончите измерение всех изображений, не закрывайте изображения – сохраните или скопируйте вывод окна результатов и откройте его как файл с разделителями табуляции в Excel или другом формате электронной таблицы.Создайте новый столбец для количества корневых волосков в своей электронной таблице.
    6. Плотность корневых волос.

    В ImageJ начните с первого корневого образа. Используйте инструмент «Прямоугольник», чтобы выбрать репрезентативную область корня. Нажмите «M», чтобы записать область. Затем визуально подсчитайте количество корневых волосков на выбранном участке. Запишите это количество в свою электронную таблицу. Когда вы закончите со всеми изображениями, скопируйте столбец значений области окна результатов в вашу электронную таблицу. Разделите количество корневых волосков на площадь e.2.

    Уход за корнями и корнями волос описан в углубленной статье на Spews.org

    Содержание пресс-релиза от Accesswire. Сотрудники AP News не участвовали в его создании.

    https://apnews.com/press-release/accesswire/lifestyle-beauty-and-fashion-personal-care-hair-care-d6b861e5bb145eb4e8da99be0b4dbb81

    Нажмите, чтобы скопировать

    Продукты для ухода за волосами с корнями и корнями содержат натуральные ингредиенты Полная и здоровая шевелюра

    ЛОС-АНДЖЕЛЕС, Калифорния / ACCESSWIRE / 6 апреля 2021 г. / Основатели компании Root Root Hair Care рады сообщить, что их продукция недавно была представлена ​​в статье о Spews.орг.

    Чтобы полностью прочитать статью под названием «Обзоры и результаты – Уход за волосами с корнями и корнями для женщин», посетите страницу https://www.spews.org/lifestyle/reviews-results-root-root-hair- забота о женщинах /.

    Как отметил автор статьи Джефф, сегодня на рынке нет недостатка в средствах по уходу за волосами. Большой выбор шампуней, лосьонов и кремов может вызвать у женщин чувство подавленности при покупке этих товаров.

    Чтобы женщины не прибегали к дорогостоящим методам проб и ошибок, чтобы найти лучшие продукты по уходу за волосами для своих нужд, Джефф был вдохновлен ознакомиться с обзорами продуктов по уходу за волосами с корнями, включая восстановление корней, от женщин, которые уже попробовали их.

    Как он выяснил в ходе своего исследования, женщины с большим энтузиазмом относятся к продукту Vitality by Root Root Hair Care после успеха Root Root Recovery, который, как отметил Джефф, может помочь женщинам меньше зависеть от искусственных кремов и лосьонов, содержащих токсины.

    «Многие отзывы о Root Root Vitality хвалят продукт за его натуральные ингредиенты», – написал Джефф, добавив, что в отличие от большинства других продуктов, Root Root Vitality – это поливитамин, который сочетает в себе самые эффективные ингредиенты для роста волос.

    «Этот продукт богат витамином C, витамином B6 и витамином B7. Он также содержит достаточное количество кальция, ниацина и цинка, чтобы помочь вам создать сильные и густые пряди волос ».

    Еще один продукт для ухода за волосами с корнями и корнями, который вызывает довольно положительный шум среди пользователей, называется «Восстановление корней», как упоминалось выше, и представляет собой сыворотку, разработанную для облегчения роста здоровых волос.

    «Тем, кто страдает облысением, трудно достичь радости от здоровых волос.Тем не менее, многие обзоры показывают, что сыворотка от выпадения волос Root Root дает некоторую передышку », – написал Джефф в статье, добавив, что пользователи отметили в своих обзорах, что использование сыворотки Root Root Recovery снижает усадку волос до минимума.

    «Этот продукт также зарекомендовал себя как предотвращающий вырывание прядей за ночь».

    Об уходе за корнями волос:

    Уход за волосами с корнями включает лучшие продукты по уходу за волосами, которые питают волосы и успокаивают кожу головы.Доказано, что Root Root Boost, Root Root Recovery и Root Root Vitality оживляют волосяные фолликулы, борются с выпадением волос и стимулируют отрастание волос. Для получения дополнительной информации посетите https://rootroothaircare.wordpress.com/.

    Контакт:

    Уход за корнями волос

    [email protected]

    305-317-6525

    ИСТОЧНИК: Уход за корнями волос

    См.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.