Шампунь из горчицы: Горчица как шампунь для укрепления и усиления роста волос — www.wday.ru

Содержание

Уход за волосами в домашних условиях (маски, пилинги и т.д.) - «Эксперимент: отказалась от шампуней, перешла на горчицу. Фото ДО и ПОСЛЕ. Как мыть волосы горчицей.»

История о том, как я докатилась до того, чтоб мыть волосы горчицей и что из этого вышло )) Ну и подробное описание - как мыть волосы горчицей.

 

….….ПРЕДИСТОРИЯ И РАЗНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТЫ........

 

В детстве у меня были волосы очень “так себе”. Крысиный хвостик: длинный, но тонкий. Волос было мало, и те что были были тоненькие.

 

В подростковом возрасте, мне как и всем захотелось экспериментов с цветом. Попробовала оттеночную смывающуюся пенку. Проводя после нее по волосам, в руках каждый раз оставалось СТОЛЬКО волос, что странно что на голове что-то оставалось. Я решила что химические краски к сожалению не для меня.

Потом мама посоветовала хну - мол натуральная, не будет портить, будет помогать. И действительно, хна заметно улучшала качество волос. Вот так они выглядели через 4-5 лет пользования хной: блестящие, яркие, но.....

(2006 год)

....этого мне было мало. Все равно куцый хвостик!! Я хотела чтоб они были как у других - пышные, густые!... И тут как раз стало популярно все натуральное. Я заинтересовалась, и начала экспериментировать!

Вот фото ДО: (2010 год)

Первым делом, начитавшись про пользу уксуса, я заменила кондиционер на уксус.

 

Уксус как кондиционер

Беру чашку (или контейнер от сметаны), наливаю уксус - около столовой ложки-полторы, остальное заливаю чистой водой. После того как помыла волосы, выключаю воду и поливаю голову из чашки.

 

Результаты обрадовали:

  • волосы перестали торчать дыбом на концах. Очень раздражало, что от обычного шампуня+кондиционера корни на следующий день гладкие-прилизанные, а концы как одуванчик! Лучше б уж по всей длине были грязноватые.

  • После того как помыла голову, волосы были вполне себе чистые три дня!!! (вместо двух) Может кондиционер слишком жирный для моих волос?

  • Самый важный для меня результат: после уксуса волосы расчесывались на столько же хорошо как и после кондиционера. А без кондиционера мои волосы расчесать не возможно.

 

После такого удачно опыта решила растраться с шампунем и перейти на натуральные средства. Мой первый рецепт состоял из….муки.

 

Мука

Втирала в волосы сухую ржаную муку. Очень необычный процесс ))))

Муки вобрали волосы очень много, и стали мягко говоря очень объемными )))) Помните фильм семейка Аддамс, там у старушки волосы торчат и серые? вот у меня так же стали... Смывала холодной водой, чтоб мука в тесто не превратилась. Смывала долго, но волосы получились чистыми:

плюсы:

  • Волосы на ощупь стали шелковые-шелковые, мягкие-мягкие!! Так приятно было их щупать )))) От других процедур с волосами такого эффекта уже не было.

  • Как не странно, стали чистыми.

минусы:

  • Никак не хотели высыхать. Обычно мои волосы требуют ну минут 10 феном, а тут минут 20 точно понадобилось! Ощущалось, что волосы слипались все время вместе. Думаю этого потому что я забыла про уксус - от уксуса они становятся “скользящими”.

  • Очень быстро стали грязными.

  • Мука плохо вымылась из волос. Правда потом "сдулась" феном. Хотя может я стормозила и не надо было брать муку грубого помола )))

  • Довольно муторный процесс. Шампунем было на много проще и быстрее.

 

Черный хлеб:

Как:

Мякишь черного хлеба залила кипятком. По хорошему после этого надо было поставить в тепло на некоторое время, чтоб "заквасился". Потом размять (можно пальцами) и тогда уже мазать. Но в первый раз я не ждала, а пользовала как только остыл.

Впечатления:

Жирненькая кашица, такая, мыльная даже! Понравилось втирать в голову )

Результат:

Волосы остались грязноватыми. Может надо нормально замачивать хлеб?

 

Полоскание в горчице

Начиталась страшилок, что от паров горчицы бывает удушье. Что мол девушка на голову намазала, упала в ванной обморок и слава богу дома муж был. Так что мазать на голову побоялась.

Попробовала вот такой способ:

Горчицу - две столовые ложки порошка - размешать в литре прохладной воды. Горячую пользовать нельзя, она создает пары от которых вроде как можно задохнуться.

Как:

Наклониться головой в таз, и "стирать"-полоскать волосы в растворе. Когда чувствуется жжение, "вынуть" голову из таза и смыть проточной водой. )))

 

минусы:

  • Сухой порошок остается на волосах, и похож на перхоть, вымыть до конца у меня не получилось. Правда при сушке феном многое повыпадало.

Плюсы:

 

Шампунь химический обычный

К этому моменту прошел примерно месяц. И я решила попробовать опять шампунь, чтоб напомнить себе, насколько это быстро, удобно и хорошо отмывает.

Результат:

Сам процес привычный и приятный. А вот волосы потом существенно хуже выглядели - Пересушенные концы и жирные корни уже на следующий день.

 

……….ПРОШЕЛ ЕЩЕ МЕСЯЦ-ДВА……..

 

Все это время полоскала волосы в тазике с горчицей. Но во первых надоело, муторно. Во вторых все таки не так хорошо отмывались как шампунем. Поэтому я переборола страх упасть в обморок в ванной и намазала горчицу на голову!

 

горчица на голову:

Чтоб не поливать голову горчичной водичкой, решила сделать "базу". Мякиш черного хлеба был очень приятный по консистенции, вот и сделала все как по рецепту выше: залила кипятком, подержала в тепле, размазала в кашицу. Потом добавила горчицу (1ст.л)

Вышло как раз как эмульсия, не жидкая вода, а как гель.

вот результат:

Выглядели волосы совершенно промытыми, даже лежали точно так же как когда я пользовалась шампунем!

 

Через два месяца пользования горчицей волосы отросли примерно на 10см!! вот -

 

……….ПРОШЛО БОЛЬШЕ ГОДА………..

...Все это время я мыла голову горчицей.

 

Во первых, как я это делаю?

Теперь я мою уже без хлеба, но с желтком.

Началось с того, что я искала какие витамины попить для волос, читала, читала нашла и выписала все витамины, решила посмотреть какую еду кушать где эти витамины есть... а в желтке как раз есть они все!! ну я и решила что лучше не кушать, а прямо на голову мазать.

У меня всегда сильно выпадали волосы - ванная волосами забивалась + по дому на ковре постоянно клоки лежали - муж их "перекати-поле" называл )))

За первые две недели мытья волос горчицей с желтком у меня вообще ни одного не выпало! и ванная месяц не забивалась! потом по чуть чуть все равно начали выпадать, но это нормально - говорят, до 100 волос в день у здорового человека выпадает.

А когда уже полгода прошло как мыла желток+горчица - выпадало намного меньше чем раньше - на ковре ничего не лежало, и ванная вообще больше не забивается (но немного волос все равно остается в ней).. плюс начал расти "подшерсток" - появились новые волосы, которые уже на 20 см отросли! =)) и у меня первые 20 см волос стали по моему в два раза гуще =))) плюс, теперь мою голову где то раз в неделю, они так долго остаются чистыми! а то и реже! а раньше минимум раз в 3 дня надо было мыть..

 

Что я теперь кладу в смесь которую мажу на голову:

 

Горчица - она и смывает жир с головы. должна печь!! (если не печет, значит не свежая), - она своей пекучестью "массажирует" голову, к коже подступает много крови, и волосы хорошо питаются и растут лучше.

раньше я клала - размоченный (кипятком) хлеб - наполнитель (просто горчицу с водой мазать сложно на голову), он создает "мыльность" на голове. Но теперь наловчилась и без него.

желток - кладезь витаминов и тоже наполнитель. Очень важно снять с желтка пленочку!! Она плохо пахнет, в ней белок ) А желток ничем не пахнет.

вода - для консистенции

еще можно добавить -

сок алое веры - очень полезен! но он жирноват, и если его класть в смесь то надо чуть больше горчицы класть

чуточку уксуса - он кондиционирует волосы.

настой ромашки (вместо воды) - просто полезно... иногда, если я мою голову и на столе стоит чай из ромашки, я им и заливаю горчицу.

 

Дальше делаю так - разбиваю яйцо, белок - в чашку, а желток в мисочку (+ снимаю с него пленку и жилки).

Потом туда кладу 2 чайные ложки горчицы (с горкой), и начинаю размешивать подливая водички.

Консистенция может быть любая. Я для себя выбрала консистенцию жидкой сметаны - тогда удобнее всего намазывать.. если более густой сделать, то может и не хватить смеси на всю голову + не особо удобно будет мазать. А если слишком жидко сделать, будет стекать.

размешать надо хорошо, чтоб комочков не было.

потом становлюсь возле раковины (чтоб не обляпать все), и начинаю мазать смесь на пробор.

как намазала, делаю пробор чуточку в сторону, мажу его, потом новый пробор еще в сторону, его мажу,

и так всю голову.

мажу только корни волос, так как потом в душе она стечет по всей длине - готово:

К тому моменту как я заканчиваю всю голову, она уже вся "горит" - печет.

как тока намазала включаю воду - чтоб была температуры тела, не горячая (иначе запечется яйцо + для головы горячая не хорошо - провоцирует жировыделение + горчица от горячей воды начнет пары выпускать - от них кружится голова и щипет глаза),

наклоняюсь над ванной, беру немного воды в руки и "намыливаю" горчицей голову, и смываю. Концы и середину волос не особо мою - у меня жирные корни, а сами волосы не особо.

Либо залажу в душ - эти фотки делала зимой, тогда в квартире слишком холодно, мыла голову отдельно от тела чтоб не мерзнуть ))

вся процедура с замешкой горчицы, намазыванием и смыванием занимает около 15 минут - 5 минут смешать все, 5 минут намазать, 5 смыть.

Быстрее чем с шампунем!! Я шампунь обычно долго из головы вымываю!

готово! =)) почти высушенные волосы:

и видно "подшерсток" - торчит сбоку - это ж не челка! у меня нету челки, я не резала ничего =)) Это начали расти много новых волосиков ))

Вот этот же подшерсток спустя пару месяцев:

 

...............СПУСТЯ ГОД..............

 

Спустя год после того как отказалась от шампуня, мои волосы выглядели вот так:

(2011)

а это опять фото ДО, для сравнения:

 

Сказать, что я довольна, это ничего не сказать ))

6 лет продолжаю мыть горчицей!

Когда забеременела все равно ей мыла (хотя не знаю насколько это разумная идея, мало ли что...), после беременности на меня нашло желание перемен, я попробовала покрасится химией в красный, потом химией в ярко красный, потом химией в черный, потом хной, а теперь басмой (тут подробнее о том как я получаю кислотно-черный цвет басмой). Внушительный список! И самое интересное, что волосы выдержали!!! лет 10 назад они не выдерживали даже оттеночного шампуня!! А теперь выдержали весь этот список! и теперь после всего этого выглядят вот так:

(2016)

 

Предостережения:

  • Внимание! Горчица подходит только для жирных волос. Сухие она пересушивает! А жирные становятся как раз нормальными и медленнее жирнятся.

  • Мне ни разу плохо от горчицы не становилось. Но в инете пару историй об этом есть. Проверяйте на личную непереносимость, и первое время, пока не уверены в ней на 100% не мойте голову когда дома никого нет кто бы мог прийти на помощь!

  • От горчицы волосы первое время растут как бешенные! За первые два месяца пользования горчицей у меня они отросли сантиметров на 10! Я дико обрадовалась, отстригла 20см, думая что они и дальше так расти будут….. Нет. После 2х месяцев походу голова слегка привыкает и бешенный темп сбавляется, так что стригите осторожно

  • Горчица должна жечь! Это и стимулирует приток крови к волосам. По началу кожа не привыкшая, и я смывала сразу как только намазала. А потом по чуть чуть я привыкала, и уже терпела минут 5-10 перед тем как смыть с головы. Знайте свою меру и долго не терпите, смывайте когда становится не комфортно. Через примерно полгода кожа головы привыкает и уже жжения вообще не чувствуется. Я обычно тогда делаю перерыв и мою только желтком. Промывается голова чуть-чуть хуже, но зато через месяц, когда возвращаюсь к горчице, она опять жжет.

  • Берите горчицу (сухой порошок - перемолотые семена горчицы, не соус конечно! ) как можно более мелкого помола - крупные частицы могут в волосах застревать.

  • Многие говорят что первый месяц на горчице волосы отвыкают от шампуня и поэтому выглядят не такими чистыми, как последующие месяца. Мне сложно сказать, первый месяц без шампуня у меня было много не удачных экспериментов и часто они выглядели действительно ужасно ))))

 

Мои выводы:

  • Мне одинаково легко мыть волосы что горчицей что шампунем. Горчицей даже возможно быстрее.

  • Очищают мои волосы и горчица и шампунь одинаково, но на второй день от шампуня корни уже жирные, а концы торчат как у одуванчика, а от горчицы они чисты по всей длине, это на много красивее и это одна из главных причин, почему я мою горчицей.

  • После шампуня корни становятся грязными на 2ой день, на 4 на них уже не приятно смотреть. После горчицы корни становятся грязными на 3-4 день, на 6-7 день на них уже не приятно смотреть.

 

Дополнение про ополаскиватель:

После того как смыла горчицу я выключаю воду, выжимаю волосы и поливаю их ополаскивателем. Пользую следующие рецепты:

  • Яблочный уксус - все как описывала сверху. Его развести проще всего, и эффект очень хороший! Волосы блестят и мягкие и пушистые.
  • Настой крапивы. Звучит как бабушкин рецепт ))) На самом деле я была им приятно шокирована! Беру чайную ложку сухой крапивы, кладу в чашку, заливаю как чай кипятком, закрываю крышкой, и оставляю пока не остынет. Потом через ситечко для чая процеживаю и готово! Волосы выходят после нее шикарные! Как то "богаче" выглядят, мягче, лучше. Правда после того как появился малой, слишком часто забываю ее заварить. Первый раз когда забыла, помыла голову, высушила, смотрю - что-то не то. Потом вспомнила что про крапиву забыла. Внимание, не подходит блондинкам! Делает светлые волосы тусклыми.
  • Сильно перестоявший чайный гриб. Важно чтоб в нем совсем не осталось сахара. Я про свой гриб все время забываю, так что грибного уксуса у меня очень много. Начиталась насколько он полезен, и поливаю

 

Вроде все! Буду еще пару дней дополнять этот отзыв, вспоминая новые детали!

 

Если решитесь попробовать, приятных вам экспериментов! Я уже половину подружек подсадила на горчицу ))))

рецепт приготовления шампуня в домашних условиях, польза и противопоказания

Горчица при регулярном применении улучшает состояние волос, делая их гладкими и послушными, ускоряет рост. Для мытья используют горчичный порошок, который смешивают с дополнительными компонентами. Горчичный шампунь подходит не для каждого типа кожи головы.

Какие волосы можно мыть горчицей

Мыть голову с использованием горчицы рекомендуется тем, кого беспокоит повышенная жирность шевелюры. Горчичные эфирные масла регулируют деятельность сальных желез, тем самым уменьшая образование кожного сала. Также средство подходит тем, у кого волосы жирные у корней, а на кончиках сухие.

Моют горчицей волосы любой длины, в зависимости от этого понадобится от одной до трех столовых ложек порошка. Все средство втирают в волосистую часть головы, равномерно распределяя по ней. На сами волосы приправу не наносят, для них достаточно будет стекающего шампуня.

Голову моют теплой, но не горячей водой. Высокая температура приводит к интенсивной выработке биологически активных веществ, которые раздражают кожный покров, вызывают одышку, слезотечение, чихание.

После мытья нужно тщательно смыть весь порошок.

Лечебные свойства горчицы для волос и кожи головы

Приправа содержит эфирные масла, витамины группы В, аскорбиновую кислоту. Благодаря этим компонентам она оказывает лечебное воздействие:

  • улучшает кровообращение;
  • регулирует деятельность сальных желез;
  • укрепляет волосяные фолликулы.

Если регулярно мыть голову горчичным шампунем, то волосы станут гладкими, блестящими, будут хорошо расчесываться и укладываться, быстро расти. Эффект заметен не сразу, нужно использовать средство не менее двух недель подряд.

Благодаря хорошему кровообращению волосяные фолликулы становятся более прочными. Через месяц использования средства шевелюра заметно густеет. Исчезает кожный зуд, ощущение жирности и загрязненности.

Противопоказания и меры предосторожности

Мыть голову горчицей следует с соблюдением мер предосторожности. Это активное средство может вызвать аллергическую реакцию, раздражение. Не рекомендуется использовать горчичный порошок при сухости, ощущении стянутости кожного покрова.

Не нужно долго держать массу на голове, ее достаточно тщательно втереть и через 1—2 минуты смыть. В противном случае есть риск пересушить кожу, вызвать зуд и раздражение. Во время мытья следует ориентироваться на собственные ощущения — при возникновении жжения или стянутости нужно сразу смывать средство.

Нельзя мыть голову горчицей при раздраженной коже, наличии грибковых и бактериальных заболеваний, экземе.

Перед использованием средства проводят тест на индивидуальную переносимость — смазывают горчичной кашицей кожу локтевого сгиба. Если через 15 минут кожа не покраснела, не стала чесаться — можно использовать горчицу для мытья волос.

Как приготовить шампунь из горчицы в домашних условиях

Чистую горчицу не следует использовать вместо шампуня. Ее можно добавлять в обычный шампунь либо делать его самостоятельно, добавляя различные компоненты. Входит приправа в состав масок. Компоненты подбирают с учетом того, какую проблему нужно устранить.

  1. Добавлять приправу в обычный шампунь рекомендуется тем, у кого нет значительных проблем с шевелюрой. На стандартную бутылку понадобится 2 столовые ложки порошка.
  2. Домашний бальзам для блеска локонов содержит 200 мл воды, 50 мл коньяка, 2 столовые ложки специи.
  3. Выпадение волос. Дополнительные компоненты при этой проблеме — яичный желток, стакан кефира.
  4. Чрезмерная жирность. Готовят смесь из столовой ложки приправы, пригоршни муки, стакана воды. Втирают у корней, через несколько минут смывают.
  5. Маленький объем. Сделать шевелюру более пышной поможет горчичный порошок, смешанный с касторовым маслом.
  6. Редкие ломкие локоны. Для укрепления и придания густоты шевелюре специю смешивают с медом, щепоткой красного перца.

Уход за волосами осуществляют не ежедневно: оптимально — мыть 1 раз в неделю на протяжении трех месяцев.

Смотрите видеорецепты шампуней в домашних условиях:

Мыть голову горчичными средствами полезно при повышенной жирности кожного покрова. Это укрепляет волосяные фолликулы, делает шевелюру густой и послушной. Сочетая разные компоненты, можно баловать себя полезными масками и бальзамами регулярно.

А как вы используете специю при мытье головы? Знаете рецепты домашней горчицы? Поделитесь своими секретами в комментариях, не забудьте рассказать о статье друзьям в социальных сетях.

Горчица для роста волос: горчичная маска и шампунь, рецепты


Горчичная маска – одно из лучших средств для их быстрого роста. А кроме того, горчицу можно использовать для приготовления домашнего шампуня и мыть голову.

При этом вы избежите СЛС и прочей химии, а для жирных волос это вообще находка – после горчичного шампуня они дольше остаются чистыми.

Однако при использовании горчицы следует соблюдать технику безопасности – она может оказаться чересчур жгучей для чувствительной кожи головы, а также вызвать непередаваемые ощущения при попадании в глаза.


Переходим к рецептам с горчичным порошком для волос.

Посмотрите также и другие рецепты масок для быстрого роста волос >>>>>

Горчичная маска

Чудодейственный эффект этой маски основан на её раздражающем действии – благодаря жжению происходит усиленное кровообращение в коже головы, а следовательно – питание волосяных луковиц и усиление роста. Однако, не все горчичные порошки одинаково полезны.

Почему-то сухая горчица производства одной фирмы жжет кожу головы нещадно, а другой – вызывает лишь слабый эффект. Если при нанесении горчичной маски вы не чувствуете жжения, то возможно вам попалась не самый “злой” горчичный порошок и нужно купить этот же продукт другого производителя.

Горчичная маска должна жечь! Именно благодаря своему жжению она так эффективна против выпадения. Кстати, степень жжения зависит также от температуры воды, которой заливается порошок при приготовлении маски. Чем горячее вода, тем сильнее будет жжение.

Кроме того, горчица не будет жечь, если не добавить к ней сахарного песка. Чем больше сахара, чем горячее вода, тем более острой будет маска – так вы можете подобрать индивидуальные пропорции под себя. Ведь если жжение покажется вам невыносимым, вам будет очень трудно выдержать хотя бы 20 минут эту маску на голове.

Очень важно: не наносите средство на кончики волос, желательно ограничиться лишь кожей головы. Ведь горчица сушит волосы. Для защиты кончиков можно нанести немного любого масла на них перед применением.

Рецепты маски для волос с сухой горчицей:

  • Маска наносится на грязные волосы. В зависимости от длины волос возьмите 1-2 столовых ложки горчицы и 0,5-1 чайную ложку сахара и залейте горячей водой до консистенции сметаны. Осторожно нанесите на кожу головы, не втирая, избегая попадания в глаза. Замотайте полиэтиленом и полотенцем. Держите маску 20-40 минут. Смыть можно без шампуня, так как горчица сама прекрасно очищает.
  • Более щадящий вариант – 1 столовая ложка горчичного порошка, 1-2 желтка,  полстакана кефира. Такую маску можно смывать без шампуня.
  • Ещё более нежный вариант – с  маслами: 1 столовая ложка горчичного порошка, 1-2 столовых ложки репейного или касторового масла, яичный желток. Здесь шампунь понадобится, чтобы смыть масла.

Мытье волос горчицей

Используют горчичный порошок и в качестве домашнего шампуня. Это прекрасный способ, если вы хотите избежать воздействия СЛС и других химических компонентов. Тем более что поможет он против выпадения и в этом случае. А жирные корни при мытье таким средством подсушиваются и реже пачкаются.

  • Возьмите 1-2 столовых ложки горчичного порошка и разведите в литре теплой воды. Нанесите на волосы, массируя. Если почувствуете жжение, не торопитесь сразу смывать водой, так как этот эффект вызывает приток крови к коже головы и стимулирует рост. Промойте большим количеством воды.
  • Развести сухую горчицу можно в тазике, 1 столовую ложку на два литра воды. Наклонив голову, опустить волосы в таз и пополоскать. Тщательно промыть чистой водой.
  • В качестве шампуня и маски одновременно можно использовать горчицу таким способом. Развести порошок водой до сметанообразного состояния. Нанести на пряди, втереть в корни и оставить на несколько минут. Затем тщательно смыть.

Рецепт домашнего сухого шампуня из горчичного порошка с травами читайте здесь>>>


P.S. Нас часто спрашивают, можно ли использовать не сухую, а с готовую столовую горчицу. Нужен именно порошок.

Ещё по теме:

Домашние шампуни своими руками

Маски для быстрого роста волос

Ромашка для волос

Загрузка…

Маски для волос из горчицы: стимуляция роста и укрепление

Домашние косметические средства, которые можно легко приготовить из доступных продуктов, ничем не уступают дорогостоящей косметике для волос. Одним из таких продуктов считается горчица. Для жирных волос она и вовсе незаменима, поскольку сокращает выработку кожного сала и немного сушит кожные покровы головы. Благодаря согревающему эффекту горчицы усиливается приток крови к фолликулам, активизируется рост волос, они укрепляются, а главное, уменьшается их выпадение. Кроме того, горчица отличается бактерицидным эффектом, прекрасно очищает волосы от жира и загрязнений. Желающие получить гладкие, крепкие и сияющие локоны непременно должны воспользоваться данным домашним средством.

Как правильно применять горчицу для роста волос

В большинстве случаев из горчицы готовят разнообразные ухаживающие за волосами средства, где она считается преобладающим компонентом. При этом рекомендуется использовать исключительно горчичный порошок. Горчица из магазина пользы не принесет, поскольку в готовом продукте присутствует множество вредных ингредиентов, к примеру уксус и красители.

Но и к использованию горчичного порошка необходимо относиться весьма осмотрительно. Его ни в коем случае нельзя разбавлять кипящей водой, поскольку это вызывает выделение вредоносных и ядовитых масел. Избыточное количество горчицы пересушивает кожные покровы и провоцирует появление перхоти. Именно поэтому в состав горчичных масок включают ингредиенты, которые смягчают влияние жгучего компонента. К горчице можно добавить мед, кисломолочные продукты либо растительные масла. Все добавки, применимые для масок, должны быть теплыми, вода – не горячее 40 градусов. Ингредиенты следует тщательно перемешивать, чтобы получилась однородная смесь.

Маску нужно наносить на немытые волосы, строго по проборам, сразу после приготовления, поскольку со временем острота горчицы возрастает, держать смесь будет невозможно. Кончики волос лучше смазать растительным маслом, это предотвратит их пересушивание. Но следует помнить, что горчичные маски не подходят кожным покровам головы, склонным к аллергическим реакциям и характеризующимся повышенной чувствительностью.

Важно! Прежде чем делать маску первый раз, проверьте, нет ли у вас аллергии на горчицу: нанесите немного смеси на внутреннюю сторону запястья. Маски из горчицы строго противопоказаны, если на коже головы есть воспаления, ранки или порезы.

Разогревающий эффект горчичных средств способствует усилению циркуляции крови и активному питанию волосяных луковиц. Ощущение излишнего жжения должно насторожить вас, тогда косметическую процедуру нужно сразу прервать и тщательно промыть голову. В следующий раз пробуйте уменьшить концентрацию горчичного порошка в смеси и следите, чтобы она не попала в глаза.

Горчичная маска благотворно сказывается и на коже головы, и на самих прядях. Она предотвращает излишнюю сухость локонов и обогащает их нужными питательными веществами. Маску необходимо выдерживать минимум полчаса, но полноценное действие осуществится лишь по прошествии часа. Применяя данное косметическое средство, оберните волосы полиэтиленовой пленкой и укутайте голову потеплее. Смывайте маску теплой водой, а после обязательно используйте кондиционер. Шампунь нужен лишь в том случае, если смесь содержала масла.

Частота применения масок определяется типом и состоянием волос. При жирных локонах их следует делать каждые пять дней, при сухих – не чаще раза в 9 дней, при нормальных достаточно раза в 7 дней. Курс оздоровления – 2 месяца, после двухмесячного перерыва его можно повторить.

Рецепты горчичных масок

При регулярном применении это простое и доступное средство сделает ваши волосы сильными и красивыми.

  1. Маска из горчицы и сахарного песка. К 2 ст. л. нагретой воды примешайте небольшое количество горчичного порошка и репейного масла. К готовой кашице прибавьте ст. л. сахара и яичный желток. Хорошо перемешав ингредиенты, нанесите на кожу головы. По завершении процедуры тщательно вымойте голову, а затем ополосните водой с лимонным соком.
  2. Питательная горчичная маска. К 150 мл подогретого кефира примешайте ст. л. горчичного порошка, желток, мед и миндальное масло. Для аромата добавьте 3 капли масляного раствора розмарина. Все ингредиенты нужно тщательно смешать до однородности.
  3. Увлажняющая горчичная маска. Данное косметическое средство подойдет для волос сухого типа. К горчичному порошку примешайте майонезный соус, сливочное и оливковое масло.
  4. Горчичная маска с кефиром. Соедините ч. л. горчичного порошка, один желток, 2 ст. л. кефира. Полученной массой промажьте каждую прядь.
  5. Укрепляющая маска. Ч. л. горчичного порошка растворите в небольшом количестве воды, примешав ст.л. меда, сока алоэ, репчатого лука, чеснока. Маску нанесите только на волосы и выдержите час-полтора.

Горчичный порошок для мытья волос

Горчица успешно используется и как шампунь для мытья волос. Подобное средство хорошо расщепляет жир на волосяных луковицах, с легкостью очищая локоны. А постоянное его применение способствует красоте, здоровью и густоте шевелюры.

Рецепты горчичного шампуня

  • Залейте 2 ч. л. горчичного порошка 1 л воды. Вымойте голову готовым раствором, тщательно массируя корни и волосы. Хорошо промойте пряди и ополосните водным раствором с лимонным соком.
  • Шампунь-маска из горчицы для создания объема. Разведите желатин в 60 г разогретой воды, доведите его до полного набухания и растворения. После этого добавьте горчицу и один желток. Шампунь из горчичного порошка наносится равномерно и оставляется на полчаса, далее локоны нужно промыть.
  • Горчичный шампунь на базе коньяка. К горчице добавьте полстакана нагретой до 45 градусов воды и 200 мл конька. Готовый раствор равномерно распределите по волосам, втирая его в корни и кожу. Смойте горчичный шампунь, при необходимости его можно нанести повторно. 

Горчица для волос – применение и рецепты масок

Регулярное применение горчицы для волос снижает производство кожного сала и подсушивает кожу головы, что полезно для жирных волос. Она усиливает приток крови к поверхностным слоям дермы, активирует луковицы, укрепляет и ускоряет рост локонов, а также препятствует их выпадению. Волосы после горчицы становятся гладкими, блестящими и сильными, перестают обламываться и сечься.

Особенности использования горчицы для волос

Чаще горчицу применяют для приготовления масок, в которых она выступает как один из ключевых ингредиентов. Для этого рекомендуется брать только горчичный порошок, поскольку готовые пастообразные продукты, продающиеся в магазинах, содержат много вредных добавок. Но и его следует использовать с осторожностью:

  • Горчичный порошок нужно разводить теплой водой, около 35-40°С, поскольку при использовании горячей горчица выделяет токсичные масла.
  • Если горчицу применять неправильно, она может пересушить кожу, что станет причиной возникновения перхоти и ломкости волос. Готовьте горчичные маски только с добавлением других компонентов, например, растительных масел, меда, йогурта, кефира и сливок.
  • Не используйте средства на основе горчицы более 2-х раз в неделю.
  • Обладательницам чувствительной кожи лучше отказаться от горчицы для волос. Осторожно ее следует применять и при склонности к аллергии.
  • Маски из горчицы разогревают кожу и вызывают покалывание и жжение, благодаря этому усиливается циркуляция крови и луковицы лучше снабжаются питательными веществами. Но если во время процедуры жжение становится сильным, ее следует прервать и вымыть голову, а в другой раз добавлять в средство меньше горчицы.
  • Чем дольше будет настаиваться горчица, тем больше из нее выделится химических веществ, провоцирующих жжение.
  • Наносите маску с горчицей только на кожу и корни волос – это поможет избежать пересушивания.
  • Горчичная маска должна выдерживаться не менее 1/4 часа, но лучше ее оставлять на 45-60 минут. После нанесения горчицы голову рекомендуется обернуть полиэтиленом и укутать полотенцем.
  • После масок или шампуней из горчицы используйте кондиционер или бальзам для волос.

Рецепты масок с горчицей

  • Горчично-сахарная маска. В емкости соедините по 2 ст.л. воды, репейного масла и горчичного порошка, добавьте ложку сахара и желток. Перемешайте массу и нанесите ее на волосистую область головы. После завершения процедуры промойте волосы и ополосните водой, подкисленной лимоном.
  • Питательная маска. Подогрейте 100 мл кефира, добавьте желток, по 1 ч.л. меда и масла миндаля, 1 ст.л. горчицы и пару капель масла розмарина. Перемешайте до однородной массы.
  • Маска для сухих волос. Соедините 1 ложку майонеза и оливкового масла, добавьте по 1 ч.л. сливочного масла и горчицы.
  • Кефирная маска. Растворите в 2 ст.л. кефира 1 ч.л. горчицы, добавьте желток и перемешайте.
  • Маска, активирующая рост волос. К 1 ч.л. горчицы добавьте немного воды, чтобы получилась кашеобразная масса. Добавьте по 1 ст.л. меда, сока алоэ, сока чеснока и лука. Перемешайте и нанесите на волосистую область головы не менее, чем на 1,5 часа.

Горчица для мытья волос

Горчица способна заменить шампунь. Она растворяет кожное сало, очищает пряди и избавляет от жирности. Мытье волос с горчицей не усилит рост локонов, как маски, но поможет сделать их красивыми, ухоженными и здоровыми. Вы можете воспользоваться рецептами:

  • Простой горчичный шампунь. Растворите в тазу с 1 литром теплой воды 2 ложки горчичный порошок. Опустите голову так, чтобы волосы полностью погрузились в жидкость и несколько минут массируйте кожу и корни, а затем промойте. Ополосните водой, подкисленной соком лимона.
  • Шампунь-маска, повышающий объем. Соедините 1 ч.л. желатина с 60 гр. теплой воды. Когда он растворится и набухнет, соедините его с 1 ч.л. горчицы и желтком. Нанесите на волосы, выдержите 20 минут и промойте водой.
  • Горчичный шампунь с коньяком. Растворите в 1/2 стакана воды 1 ст.л. горчицы и добавьте 150 мл коньяка. Нанесите состав на волосы и в течение 3-х минут втирайте массажными движениями, затем смойте водой. Средство можно использовать несколько раз.

Шампунь Гармония горчичный для жирных волос

Магазин Остаток на 24.07.2021
1 г. Сергиев Посад, Ул 1-я Рыбная, 19 /22, ТЦ Маяк
Телефон: 8 (495) 255-49-00
График работы: Пн-Пт с 10.00 до 21.00 Сб-Вс с 10.00 - 20.00
Распродан
2 м. Водный стадион, ул Адмирала Макарова, 14.
Телефон: 8 (495) 255-27-93
График работы: Пн-Пт 10:00-21:00 Сб-Вс 10:00-20:00
Распродан
3 г. Химки, ул Маяковского, д. 19/8
Телефон: 8 (495) 255-03-31
График работы: Пн-Пт с 10.00 до 21.00 Сб-Вс с 10.00 - 20.00
Распродан
4 г. Королев, ул Калинина, д.1
Телефон: 8 (495) 255-01-33
График работы: пн-пт 10.00-21.00, сб-вс 10.00-20.00
Распродан
5 м. Лермонтовский проспект, адрес Лермонтовский проспект, д. 19, корпус 1, помещение Д-5
Телефон: 8 (495) 255-01-19
График работы: пн-вс 10.00-21.00
Распродан
6 г. Железнодорожный, Привокзальная площадь, д 1, стр 2
Телефон: 8 (495) 255-56-60
График работы: Пн-Пт с 10.00 до 21.00 Сб-Вс с 10.00 - 20.00
Распродан
7 м. Академическая, ул Профсоюзная, дом 3, первый этаж, пом. 113
Телефон: 8 (495) 255 02 08
График работы: Пн-Пт 10.00 - 21.00 Сб-Вс 10.00 - 20.00
Распродан
8 м. Алтуфьево, Алтуфьевское шоссе, 84
Телефон: 8 (495) 255 46 00
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
9 м. Бабушкинская, ул. Енисейская, д. 11.
Телефон: 8 (495) 255-18-62
График работы: пн-вс - с 9 до 21
Распродан
10 м. Беляево, ул. Профсоюзная, 104
Телефон: 8 (495) 255 57 47
График работы: пн-пт - с 10 до 21 сб-вс - с 10 до 20
Распродан
11 м. Бибирево, ул. Плещеева, д 4, корп1, стр2. рынок «ГранПлюс», наш павильон находится на улице, на территории рынка.
Телефон: 8 (495) 255-08-98
График работы: Пн-Вс с 10 до 20
Распродан
12 м. Войковская, Ленинградское шоссе, д.9, корпус 1
Телефон: 8 (495) 255-08-81
График работы: пн-пт - с 10 до 21, сб-вс - с 10 до 20
Распродан
13 м. Измайловская, ул Первомайская, д 42, ТЦ Измайловский
Телефон: 8 (495) 255-08-40
График работы: Пн - Вс 10.00-21.00
Распродан
14 м. Комсомольская, Комсомольская площадь, д. 2, выход к Казанскому вокзалу, зал ожидания 3
Телефон: 8 (495) 255-07-29
График работы: Пн-Вс с 10.00 до 21.00
Распродан
15 м. Коломенская, проспект Андропова, 26
Телефон: 8 (495) 255 79 90
График работы: пн-пт с 10 до 21 сб-вс с 10 до 20
Распродан
16 м. Крылатское, Осенний бульвар, д. 20, корп.1
Телефон: 8 (495) 255-18-08
График работы: пн-пт - 10 до 21, сб - вс 10 до 20
Распродан
17 м. Кузьминки, ул. Юных Ленинцев, дом 83, корпус 4
Телефон: 8 (495) 255-31-20
График работы: пн-вс с 10 до 20
Распродан
18 м. Курская, ул. Земляной вал, д. 20, строение 3
Телефон: 8 (495) 255-18-63
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
19 м. Люблино, ул. Совхозная, д. 39
Телефон: 8 (495) 255-32-33
График работы: пн-вс - с 9 до 21
Распродан
20 м.Марьино, Новочеркасский бульвар, д. 55 к 2
Телефон: 8 (495) 255-02-09
График работы: пн-пт - с 10 до 21, сб-вс - с 10 до 20
Распродан
21 м.Митино, ул. Митинская 33
Телефон: 8 (495) 255-43-00
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
22 м. Молодежная, ул Ельнинская, дом 23
Телефон: 8 (495) 255-77-23
График работы: с 10 до 20
Распродан
23 м. Новые Черемушки, ул. Профсоюзная д.56
Телефон: 8 (495) 255-22-40
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
24 м. Новогиреево, Свободный проспект, д. 33
Телефон: 8 (495) 255-17-07
График работы: пн-пт - с 10 до 21, сб-вс - с 10 до 20
Распродан
25 г. Реутов, ул. Южная д. 10а, ТЦ Курс
Телефон: 8 (495) 255-79-23
График работы: пн-вс 10.00 - 21.00
Распродан
26 м. Октябрьское поле, г. Москва, ул. Маршала Малиновского, д. 8
Телефон: 8 (495) 255 01 65
График работы: Пн-Вс 10.00-21.00
Распродан
27 м. Парк Культуры, г. Москва, ул. Тимура Фрунзе, д. 8/5
Телефон: 8 (495) 255-18-35
График работы: Пн-Пт с 9.00 до 21.00 Сб-Вс 10.00-20.00
Распродан
28 м. Планерная, ул. Планерная, д. 7, пав. 85.
Телефон: 8 (495) 255-14-67
График работы: пн-вс - с 10 до 20
Распродан
29 м. Пражская, ул. Красного маяка, д 2
Телефон: 8 (495) 255 01 52
График работы: пн- пт 10.00-21.00, сб-вс 10.00-20.00
Распродан
30 м. Савеловская, ул. Новослободская д. 62, корп.1
Телефон: 8 (495) 255-21-22
График работы: Пн-Вс - с 10 до 20:45
Распродан
31 м. Свиблово, ул. Снежная, д 21/1
Телефон: 8 (495) 255-20-50
График работы: Пн-Вс 10.00-21.00
Распродан
32 м. Сокол, г. Москва, ул. Ленинградский проспект 78, к1, вход в наш магазин с улицы Балтийская
Телефон: 8 (495) 255 39 40
График работы: Пн-Пт 10.00-21.00 Сб-Вс 10.00-20.00
Распродан
33 м. Таганская, Таганская улица, 1/2 стр 2
Телефон: 8 (495) 255-01-83
График работы: пн-вс с 10.00 до 21.00
Распродан
34 м. Теплый стан, ул Профсоюзная, д. 129 А, павильон А16, -1 этаж
Телефон: 8 (495) 255-02-47
График работы: пн-вс с 10.00 до 21.00
Распродан
35 м. Улица Скобелевская, бульвар Адмирала Ушакова, д. 8
Телефон: 8 (495) 255-51-10
График работы: пн-пт 10.00-21.00 Сб-вс 10.00-20.00
Распродан
36 м. Университет, площадь Джавахарлала Неру, дом 1, ТЦ «Универ-Сити»,
Телефон: 8 (495) 255-10-27
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
37 м. Цветной Бульвар, улица Цветной бульвар, д. 21с1
Телефон: 8 (495) 255-27-70
График работы: пн-пт 10.00-21.00, сб-вс 10.00-20.00
Распродан
38 м. Чертановская, ул. Чертановская, д. 1Г, ТК "Свод", пав. 2
Телефон: 8 (495) 255-18-59
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
39 м. Щёлковская, ул. 9-я Парковая, владение 61а, стр.1
Телефон: 8 (495) 255-72-22
График работы: пн-пт - с 10 до 21, сб-вс - с 10 до 20
Распродан
40 м. Щукинская, ул. Маршала Василевского д 15
Телефон: 8 (495) 255-14-48
График работы: пн-пт с 10 до 21 сб-вс с 10 до 20
Распродан
41 м. Юго-Западная, пр. Вернадского, 105 корп.4.
Телефон: 8 (495) 255-77-76
График работы: пн-вс - с 10 до 21
Распродан
42 г. Балашиха, Микрорайон Балашиха-1, ул. Парковая, 9, торец дома напротив магазина Дочки Сыночки, остановка ЦПКО, рядом центральный парк ТЦ Пирамида
Телефон: 8 (495) 255-18-93
График работы: пн-вс - с 10 до 20
Распродан
43 г. Зеленоград, корп. 834А
Телефон: +7 (495) 255-08-80
График работы: Пн-Пт 10.00-21.00 Сб-Вс 10.00-20.00
Распродан
44 г. Королёв, проспект Королева, дом 14, стр 6
Телефон: 8 (495) 255-36-75
График работы: Пн-Вс с 10 до 20
Распродан
45 г. Мытищи, ул. Колонцова, дом 2 (рядом с супермаркетом Верный)
Телефон: 8 (495) 255-41-02
График работы: Пн-Вс 10-21
Распродан
46 г. Одинцово, Вокзальная ул. д.2 ТЦ Андромеда
Телефон: +7 (495) 255-01-44
График работы: Пн-Пт 10.00-20.00, Сб-Вс 10.00-19.00
Распродан
47 г. Подольск, Московская область, Революционный проспект, 16
Телефон: 8 (495) 255 12 19
График работы: Пн-Вс 10.00-20.00
Распродан
48 г. Пушкино, ТЦ Пушкинский, ул Тургенева, дом 1, 1 этаж.
Телефон: 8 (495) 255-15-40
График работы: Пн-Вс с 10 до 20
Распродан

Горчичная маска-шампунь. Шампунь из горчицы

Поделиться статьей:  

 

Как сделать шампунь из горчицы? Маска – это, конечно, дело хорошее и для волос полезное, но ведь это также дополнительные временные затраты. А времени у нас зачастую не хватает. Вот если бы можно было сочетать в одном средстве и маску и шампунь – было бы здорово!

Оказывается, нет ничего проще, чем создать такое чудодейственное средство прямо на своей кухне. В состав такой маски-шампуня будет входить горчица, которая поможет волосяным луковицам получить достаточное питание, а кожу головы разогреет и улучшит кровообращение. В результате такой шампунь будет действовать ничем не хуже, чем маска для роста и укрепления волос.

Горчичная маска-шампунь. Шампунь из горчицы.

Итак, для приготовления маски-шампуня на основе горчицы Вам нужно смешать яичный желток с одной чайной ложкой горчичного порошка и половиной стакана кефира. Смесь нанесите на кожу головы и волосы и подержите 20-30 минут. Можно укутать голову махровым полотенцем.

Прелесть этой маски-шампуня в том, что для ее смывания не нужно использовать шампунь или другие дополнительные средства. После того, как подержали маску на волосах полчаса, просто смойте ее теплой водой. Горчица, входящая в состав горчичной маски для волос, улучшит общее состояние волос, а кефир и яичный желток сделают волосы чистыми и свежими. И, заметьте, никакой вредной химии, только полезные природные компоненты.

Кстати, на заметку от автора блога:  перепробовав много разных шампуней, от дорогих и не очень, иностранных и отечественных, пришла к выводу, что самый лучший и недорогой шампунь – это шампуни серии ЧИСТАЯ ЛИНИЯ. Эти шампуни не сушат волосы, не делают их излишне тонкими и наэлетроризованными, волосы долго сохраняют блеск и чистоту, легко укладываются и расчесываются. 

Читайте также: 

Преимущества и способы их использования

Горчица: приправа для хот-догов, да, но ингредиент для ухода за волосами? Честно говоря, мы говорим о горчичном масле , а не о желтом веществе в бутылке со шприцем (так что, пожалуйста, продолжайте читать, прежде чем обращаться к французам). Оказывается, горчичное масло действительно полезно как для волос, так и для кожи головы. Полученный путем прессования горчичного зерна, он давно используется в аюрведической медицине для лечения различных проблем (в том числе проблем с волосами и кожей головы).Проведите быстрый поиск в Интернете, и вы увидите множество информации, рекламирующей его как решение всего, от перхоти до выпадения волос, не говоря уже о бесчисленных видеороликах на YouTube, где женщины обливаются этим. Итак, как именно это маленькое семечко может быть таким полезным для ваших волос? Впереди сертифицированный трихолог и основатель метода трихологии Гауница, Уильям Гауниц, Гретхен Фризе, сертифицированный трихолог из BosleyMD, и доктор Дженнифер Чвалек, сертифицированный дерматолог в Union Square Laser Dermatology в Нью-Йорке, раскрывают тайны горчичного масла.

Горчичное масло

Тип ингредиента: Увлажняющее и противовоспалительное средство

Основные преимущества: Увлажняет кожу головы и волосы, обладает антибактериальными и противогрибковыми свойствами, может способствовать росту волос.

Кому следует его использовать: В целом, всем, кто хочет улучшить общее состояние своих волос и / или кожи головы, а также тем, кто обеспокоен сухостью, выпадением волос или перхотью, говорит Фризе. При этом это может очень раздражать, поэтому важно действовать с осторожностью.

Как часто вы можете его использовать: Вообще говоря, его можно использовать в качестве еженедельного или ежемесячного лечения.

Хорошо сочетается с: Другие масла, которые также полезны для волос и кожи головы, такие как жожоба и кокосовое масло.

Не использовать с: По словам Чвалека, не существует известных ингредиентов, которые нельзя смешивать с горчичным маслом. Однако перед использованием важно провести тест на исправление, чтобы убедиться, что вы переносите это.

Преимущества горчичного масла для волос

«Горчичное масло богато мононенасыщенными и полиненасыщенными жирными кислотами, такими как омега-3 и 6, различными минералами, включая кальций, железо и цинк, а также антиоксидантами, такими как витамины B и E», - говорит Чвалек.Короче говоря, крошечные, но могущественные семена горчицы наполнены множеством полезных для волос и кожи питательных веществ; это также основа аюрведы, используемая для лечения всего, от заболеваний десен до паразитарных инфекций и выпадения волос. Стоит отметить, что он не одобрен FDA для перорального употребления в США, потому что он может содержать высокую концентрацию токсичной эруковой кислоты, но его можно использовать местно на коже головы и волосах, добавляет Чвалек. К этому моменту горчичное масло обладает следующими свойствами:

  • Уменьшает воспаление на коже головы: Упомянутые нами омега-жирные кислоты и антиоксиданты обеспечивают необходимые питательные вещества для волосяного фолликула и действуют как противовоспалительные средства.
  • Обладает антибактериальными и противогрибковыми свойствами: Это делает горчичное масло потенциально хорошим вариантом для решения таких проблем, как перхоть и себорея, говорит Чвалек. Кроме того, горчичное семя также обладает антипаразитарным действием, что делает его эффективным против определенного типа клещей, обнаруживаемых на коже головы, отмечает Гауниц, который много изучал и работал с горчичным маслом.
  • Может способствовать росту волос: Чвалек отмечает, что одно исследование местного травяного масла (в котором в качестве основы использовалось горчичное масло) показало, что оно эффективно не только против перхоти, но также полезно для уменьшения выпадения волос и стимулирования роста волос.Это можно сделать несколькими способами. Во-первых, это противовоспалительные свойства, которые могут помочь предотвратить выпадение волос из-за воспаления. Во-вторых, есть некоторые свидетельства того, что определенные соединения в горчице влияют на определенные рецепторы в волосяном фолликуле, которые играют роль в контроле роста волос, отмечает Чавлек. И, наконец, у некоторых людей выпадение волос может быть вызвано паразитом, известным как demodex folliculorum, , одним из двух типов клещей демодекс, обитающих на коже человека, - объясняет Гауниц.Эти клещи поражают волосяной фолликул и ухудшают рост волос; «Горчичное семя, как известно, убивает этих клещей», - добавляет он. Большой нюанс? Demodex folliculorum питаются маслом; Таким образом, Гауниц советует не использовать горчичное масло для кожи головы и вместо этого говорит, что настойки, приготовленные из молотого горчичного порошка, являются гораздо лучшим вариантом (подробнее об этом позже).
  • Улучшает общий вид волос: Хотя все эти преимущества в значительной степени связаны с воздействием горчичного масла на кожу головы, поскольку оно очень богато жирными кислотами, оно также может помочь сгладить секущиеся кончики и сделать волосы более блестящими, - говорит Чвалек. .

Рекомендации по типу волос

Горчичное масло можно использовать для всех типов волос, но, возможно, не для всех типов кожи . Все эксперты, с которыми мы беседовали, согласны с тем, что это может быть чрезвычайно раздражающим - мы говорим о покраснении, покалывании, даже жжении из-за раздражающих кожу соединений, таких как (опять же) эруковая кислота и аллилтиоцианат, - объясняет Чавлек. Перед нанесением на кожу головы необходимо провести пластырь, чтобы убедиться, что ваша кожа справится с этим, а тем, у кого чувствительная кожа, следует действовать с особой осторожностью.Точно так же часто рекомендуется сочетать горчичное масло с другими маслами, чтобы минимизировать вероятность раздражения.

Как использовать горчичное масло для волос

Хотя есть некоторые научные данные, подтверждающие пользу горчичного масла, нет исследований, подтверждающих лучший способ его использования », - отмечает Чавлек. Один из вариантов - сделать так называемое« быстрое смазывание маслом »:« Возьмите примерно чайную ложку масла. "Горчичное масло и массажными движениями в кожу головы в течение пяти минут непосредственно перед мытьем шампунем", - предлагает Фризе.В качестве альтернативы, чтобы повысить ставку, вы можете нанести такое же количество на кожу головы, затем надеть шапочку для душа и оставить на 30 минут, говорит она. Шапочка для душа удерживает тепло и помогает маслу лучше проникать в нее. Если вы собираетесь сделать последнее, рекомендуется смешать горчичное масло с другим маслом; Кокосовый орех - хороший вариант, особенно если у вас очень сухие волосы, - говорит Фризе. Это поможет минимизировать вероятность раздражения кожи головы горчичным маслом и даст вам дополнительные преимущества от вторичного масла.(В любом случае, сначала убедитесь, что вы сделали этот патч-тест, а затем тщательно вымыли шампунь.) В целом, вы можете делать любое из этих процедур еженедельно или ежемесячно, - говорит Чавлек, хотя снова она отмечает, что это основано на анекдотических, а скорее чем научные доказательства.

Вернемся к точке зрения Гауница об использовании порошка: он говорит, что лучший способ воспользоваться местными преимуществами горчицы - это приготовить настойку с порошком молотых семян горчицы, а не использовать ее в виде масла. (Он также добавляет, что очень сложно найти чистое высококачественное горчичное масло, и что многие продукты на рынке содержат все виды растительных масел, которые в конечном итоге могут нейтрализовать полезные свойства горчицы.Он предлагает смешать 1/4 чайной ложки с двумя унциями воды для местного применения, хотя подчеркивает, что это нужно делать с осторожностью, учитывая вероятность раздражения.

Преимущества горчичного масла для волос

Мы выросли в индийской семье и не нуждаемся в знакомстве с горчичным маслом , также известным как Sarson ka tel . От того, чтобы сделать наш aam ka achaar еще более восхитительным, до улучшения вкуса карри из баранины и жареной рыбы, горчичное масло подарило нам несколько воспоминаний .

Вспомните те детские дни, когда каждое воскресенье зимой, когда вы смотрели свои любимые телешоу, мама заставляла вас сесть и массировать голову большим количеством масла. Горчичное масло обладает рядом полезных свойств: от повышения иммунитета до защиты организма от простуды и кашля, укрепления корней волос и питания кожи.

По мере взросления не многие из нас придерживаются той же процедуры ухода за волосами по воскресеньям, которую поощряли наши матери.Однако, если вы чувствуете, что городская жизнь и плотный график, загрязнение окружающей среды и отсутствие надлежащего ухода сделали ваши прекрасные локоны вялыми и безжизненными, Femina Wellness Expert порекомендует использовать горчичное масло. Нужны еще причины, чтобы перейти на это домашнее средство? Здесь вы можете узнать больше о преимуществах горчичного масла для волос . Прокрутите ниже:



Хотя горчичное масло используется в нескольких продуктах , некоторых людей отталкивает его густая консистенция и резкий запах.Однако если отойти от этих недостатков, горчичное масло отлично подойдет для ваших блестящих локонов . «Эти свойства горчичного масла делают его очень популярным и востребованным ингредиентом для ухода за волосами. Вы можете безопасно использовать горчичное масло для волос. для глубокого кондиционирования волос, борьбы с перхотью, помощи в росте волос и предотвращения преждевременного поседения», - говорит доктор Ринки Капур, дерматолог-консультант, косметолог и дерматохирург The Esthetic Clinics.

1. Польза горчичного масла для волос
2.Вот что может предотвратить горчичное масло
3. Эффективные способы использования горчичного масла для роста волос
4. Советы экспертов по использованию горчичного масла
5. Часто задаваемые вопросы: горчичное масло

Преимущества горчичного масла для волос

Столкнулись с проблемами с волосами? Тогда горчичное масло - именно тот эликсир, которого вы так долго ждали. Он имеет множество преимуществ для здоровья волос и кожи головы . «Горчичное масло имеет правильный баланс омега-3 кислот и омега-6 жирных кислот, а также обогащено витамином Е и богато антиоксидантами, что многократно увеличило его полезные свойства. Горчичное масло используется в качестве солнцезащитного крема. , лекарство от потрескавшихся губ , естественный стимулятор для тела, отбеливает зубы , борется с простудой и гриппом, помогает снять мышечное напряжение, удаляет загар и темные пятна и осветляет цвет кожи. и т.д. ", - поясняет доктор Ринки Капур.


1. Натуральный кондиционер

Горчичное масло , обогащенное альфа-жирными кислотами, которое помогает сохранить влажность ваших волос и сохраняет волосы свежими и упругими, является натуральным кондиционером. делает волосы мягкими, гладкими, шелковистыми и объемными.

2. Питает волосы

Некоторые люди в наше время сталкиваются с проблемами выпадения волос, и истончения волос, , что обычно происходит, когда наши волосяные фолликулы недоедают и не повреждены. Однако если вы регулярно массируете волосяные фолликулы с горчичным маслом , вы можете вернуть своим волосам силу и блеск.

3. Полон минералов, витаминов и антиоксидантов

Знаете ли вы, что горчичное масло является отличным источником железа , магния, кальция и витаминов, таких как A, D, E и K, а также антиоксидантов? Это острое масло для волос также содержит полезные свойства цинка, бета-каротина и селена, которые способствуют росту волос и помогают сдерживать преждевременную седину.> / п>

4. Повышает кровообращение

Некоторые эксперты по волосам утверждают, что основной причиной выпадения и истончения волос является недоедание корней. Если вы хотите, чтобы ваши вялые локоны снова обрели жизнь, попробуйте с использованием горчичного масла для массажа волос . «Это естественный стимулятор. При нанесении на кожу головы он стимулирует систему кровообращения и улучшает кровообращение», - говорит Амрин Шейх, главный диетолог и диетолог больницы Вокхардт в Мумбаи.

Лучший способ реализовать это - нагреть масло с помощью гвоздики и осторожно массировать волосы пальцами.Делайте это дважды в неделю для лучших результатов.

5. Способствует росту волос

Регулярный массаж волос с использованием горчичного масла сделает ваши волосы мягкими, блестящими и здоровыми. Так как горчичное масло богато антиоксидантами и некоторыми другими питательными веществами, оно стимулирует более быстрый рост волос

6. Противогрибковые свойства

Горчичное масло имеет высокое содержание эруковой кислоты, а также содержит АЛК, которая помогает в очищении кожи головы и уничтожении бактерий и грибков, которые блокируют волосяные фолликулы и приводят к образованию на коже головы.

7. Предотвращает появление перхоти


Так как горчичное масло богато антиоксидантами и обладает антибактериальными свойствами, регулярное его использование может помочь сохранить кожу головы в чистоте и не будет перхотью.

Вот что может предотвратить горчичное масло

Сухие волосы
• Шелушащаяся кожа головы
Ломкость волос
• Вьющиеся волосы
Секущиеся кончики
• Тепловые повреждения
• Повреждения от воды

Эффективные способы использования горчичного масла для роста волос

Вот несколько наборов для волос, предложенных доктором Ринки Капур, которые помогут стимулировать рост волос здоровым образом:

1.Пакет с горчичным маслом и йогуртом

Смешайте в миске йогурт и горчичное масло. Нанесите эту смесь на кожу головы. Оберните волосы горячим полотенцем и оставьте примерно на 30-40 минут. Смыть мягким шампунем . Это успокаивает кожу головы, а делает волосы блестящими и мягкими. .

Совет для профессионалов: Используйте этот пакет не реже одного или двух раз в неделю в течение месяца.

2. Пакет с горчичным маслом и алоэ вера

Смешайте в миске немного горчичного масла и алоэ вера. .Нанесите эту смесь на волосы и кожу головы. Оставьте на один час и смойте обычным шампунем и кондиционером. Это предотвратит повреждение волос .

Совет для профессионалов: Повторяйте это средство два раза в неделю для получения эффективных результатов.

3. Пакетик горчичного масла и лимонного сока

Возьмите немного горчичного масла, лимонного сока и порошка пажитника в равных количествах и хорошо перемешайте все три в миске. Смешайте в равных количествах и нанесите на волосы. Вымойте через час для более мягких, упругих и здоровых волос. .

Совет для профессионалов: Если у вас чувствительная кожа головы, это лучший выбор для вас.

4. Пакет с горчичным маслом и бананом

Сделайте пачку спелого банана и горчичного масла. Вы можете добавить в смесь немного йогурта , чтобы разбавить консистенцию. Нанесите на кожу головы , чтобы предотвратить вьющиеся волосы . Для достижения наилучших результатов используйте его два раза в неделю.

Совет для профессионалов: Не используйте фен после обработки, так как он оставит ваши волосы сухими и вьющимися.

Советы экспертов по использованию горчичного масла

Горчичное масло абсолютно безопасно для использования , однако вы должны сделать легкий тест по крайней мере за 24 часа, прежде чем наносить масло на кожу головы. Некоторые общие побочные эффекты горчичного масла - это аллергические реакции, такие как высыпания на коже в виде высыпаний и волдырей; он также может вызвать раздражение глаз и вызвать закупорку пор , если не промыть его должным образом.


Горчичное масло можно использовать в качестве самостоятельного ингредиента в уходе за волосами , просто массируя его на коже головы для улучшения кровообращения.Хорошо помассируйте и накройте волосы шапочкой для душа. Через 30 минут умойтесь обычным способом и используйте мягкий шампунь и кондиционер.

-Перед использованием проведите тест-патч

-Не используйте его ежедневно

- Немного нагрейте для лучшего результата

-Можно сделать масок для волос с различными ингредиентами

Часто задаваемые вопросы: Горчичное масло

В: Почему горчичное масло запрещено в некоторых странах?

A: Не многие знают об этом в Индии, но горчичное масло запрещено в США, Канаде и Европейском Союзе из-за высокого содержания эруковой кислоты в горчичном масле, которое вызывает сердечных заболеваний .Варианты горчичного масла, продаваемые в этих регионах, должны иметь четкую этикетку с надписью «только для наружного использования».

Q: Что лучше: оливковое масло или горчичное масло?

A: Оливковое масло и горчичное масло сильно отличаются друг от друга , но оба имеют свои полезные свойства, поскольку оба обогащены полезными ненасыщенными жирами по сравнению с другими маслами. Горчичное масло имеет более высокую температуру дымления и более экономично по сравнению с оливковым маслом .

В: Может ли горчичное масло помочь в отрастании волос?

A: Горчичное масло - именно тот эликсир, которого вы так долго ждали. Он имеет множество преимуществ для здоровья волос и кожи головы. Вы можете использовать горчичное масло в качестве самостоятельного ингредиента для ухода за волосами, просто массируя его на коже головы, чтобы улучшить кровообращение. Хорошо помассируйте и накройте волосы шапочкой для душа. Через 30 минут умойтесь обычным способом и используйте мягкий шампунь и кондиционер.

Подпишитесь на наш канал на YouTube

Люди, которые смотрели это, также смотрели

За этикеткой «Только для внешнего использования»

Из-за ошибки редактирования в исходный текст было включено неточное описание насыщенных жиров.Текст обновлен. Мы сожалеем об ошибке.

Когда я был подростком, мой отец прошел этап маринования всего, что мог. Казалось, что каждая банка, которую он мог достать, неизбежно будет наполнена пряными овощами - всем, от баклажанов и моркови до фруктов, таких как зеленые манго, - и поставлена ​​на наши подоконники, чтобы маринады сохли на солнце.

Индийские соленые огурцы - или ачара , как их обычно называют - отличаются от солений, с которыми знакомо большинство неиндийских людей.Хотя аахары маринуют с использованием соли, кислоты и иногда сахара, они также полагаются на комбинации специй и масел, чтобы придать овощам аромат и создать условия, неблагоприятные для вредных бактерий.

В Индии тип масла, используемого на кухне, меняется в зависимости от географического положения и оказывает сильное влияние на региональные кухни. Например, в более теплых частях страны кунжутное масло используется во многих рецептах, и в результате многие блюда в этих регионах характеризуются ореховым ароматом кунжутного масла.Но на севере преобладает масло, извлекаемое из семян горчицы, что придает безошибочный аромат васаби многим блюдам, особенно аахарам, таким как те, что делал мой отец.

Горчичное масло - чрезвычайно популярное масло среди домашних поваров в Китае, России и в Южной Азии, особенно в северном индийском штате Западная Бенгалия, а также в Бангладеш и Пакистане. В отличие от масел, которые просто пропитаны семенами горчицы, настоящее горчичное масло - это жир, извлеченный из семян горчичного растения. В Индии масло получают из семян черной горчицы сорта Brassica nigra .В России и Китае его получают из семян бурой горчицы сорта Brassica juncea .

Как и большинство кулинарных масел, горчичное масло имеет множество применений. Вы можете использовать его для обжаривания или обжаривания овощей, а его ароматические качества делают его идеальным для разогрева специй и чили для тадка - горячего масла с приправами, которое используется в качестве завершающего штриха для многих блюд. Кроме того, поскольку у него особенно высокая температура дымления - около 480 ° F [248,89 ° C], что выше, чем у рапсового или даже виноградного масла, это отличный жир для жарки во фритюре, например, кусочков свежей рыбы в кляре и его можно использовать вместо оливкового масла при жарке овощей.

Салат из заправленных горчичным маслом огурцов с фундуком и измельченными хлопьями красного перца.

Почему горчичное масло помечено «Только для наружного применения»

Несмотря на популярность горчичного масла в некоторых частях мира, его продажа в Соединенных Штатах в съедобных целях запрещена, а бутылки с горчичным маслом должны продаваться с этикетками, на которых указано «Только для внешнего использования». В голову приходит очевидный вопрос, который мне часто задают: «Ну, если это нормально для людей в Индии, почему мы не можем приготовить и съесть это здесь? Индийцы готовили из этого на протяжении веков, и они в порядке."

Чтобы понять, почему ограничена продажа горчичного масла, необходимо более внимательно изучить его состав. Все жиры и масла состоят из комбинации глицерина и смеси молекул, называемых жирными кислотами, и состав жирных кислот в данном масле или жире определяет их поведение. Например, жиры с высоким содержанием насыщенных * жирных кислот - животные жиры, такие как сало и жир, и некоторые жиры растительного происхождения, такие как кокосовое масло, - будут вести себя как твердые вещества при комнатной температуре.Жиры с более высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот, например оливковое и арахисовое масло, при комнатной температуре ведут себя как жидкости.

* Для получения дополнительной информации о различиях между насыщенными и ненасыщенными жирами щелкните здесь.

Горчичное масло богато ненасыщенными жирными кислотами, но оно также содержит особый тип жирной кислоты, называемой эруковой кислотой, которая лежит в центре споров вокруг этого масла. Семена растений семейства капустных, в которое входят рапс и горчица, а также капуста и капуста, все содержат разное количество эруковой кислоты.Ранние экспериментальные исследования на животных в 1950-х годах показали, что эруковая кислота, возможно, сыграла роль в развитии сердечных заболеваний.

У этого исследования было два заметных следствия. Во-первых, в ответ на это канадские ученые создали масло канолы (комбинация слов «Канада» и « ola », старое английское слово, обозначающее нефть, хотя некоторые говорят, что «ола» является аббревиатурой для « масло с низким содержанием кислоты ») путем тщательной селекции растений рапса, которые дали семена с чрезвычайно низким уровнем эруковой кислоты.(Они также очистили масло с помощью ряда промышленных процессов, чтобы лишить его любого из его естественного горчичного тепла, чтобы создать более универсальный нейтральный продукт.)

Другое дело, что горчичное масло из-за высокого уровня эруковой кислоты было запрещено продавать в Америке для употребления в пищу. Горчичное масло было разрешено продавать только для использования в качестве лечебного массажного масла, поэтому бутылки в индийских продуктовых магазинах имеют маркировку «Только для наружного использования». Но безопасность употребления эруковой кислоты все еще под вопросом.Большинство данных по эруковой кислоте получено в результате исследований на животных, а информация об исследованиях на людях основана на экспериментах на клеточных культурах и эпидемиологических исследованиях питания популяций, которые дают противоречивые результаты. Насколько мне известно и из того, что я читал, существуют явные различия в том, как разные животные реагируют на эруковую кислоту и метаболизируют ее.

Стоит ли готовить с горчичным маслом?

Честно говоря, вам решать, использовать ли это. Но, к счастью, появилась новая опция.Несколько лет назад я наткнулся на первое и единственное пищевое горчичное масло, одобренное Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, под названием Yandilla, которое вы можете купить в Интернете. Произведенное в Австралии, это масло извлекается из семян горчичного растения, выведенного специально для уменьшения количества содержащейся в нем эруковой кислоты, при этом сохраняя при этом эфирный аромат горчичного масла - качественному маслу канолы с нейтральным вкусом не хватает.

По сравнению с другими горчичными маслами, доступными в индийских продуктовых магазинах, яндилла намного светлее по цвету и вязкости, но при этом обладает такой же степенью вкуса васаби.Со своей стороны, как и другие знакомые мне индийцы, у меня нет проблем с использованием горчичного масла, не одобренного FDA, всякий раз, когда я хочу получить его острый аромат или повторить один из аахаров моего отца, но если вас беспокоит потенциальные опасности проглатывания эруковой кислоты, вам следует попробовать Yandilla.

Наука о вкусе горчичного масла

Причина, по которой яндила с относительно низким содержанием эруковой кислоты по вкусу очень похожа на другие горчичные масла, заключается в том, что уникально острый характер горчичного масла происходит от совершенно не связанной молекулы: синигрина.

Когда семена черной и коричневой горчицы измельчаются, синигрин превращается ферментом под названием мирозиназа в аллилизотиоцианат ***, ту же молекулу, которая придает хрену и васаби их огненную природу.

*** Семена белой (желтой) горчицы редко используются для производства масел, поскольку при их измельчении образуется гораздо менее острая молекула, известная как п-гидроксибензилизотиоцианат.

Аллилизотиоцианат растворим в жире и чрезвычайно летуч; Если вы сильно вдохнете горчичное масло, вы сразу же почувствуете жжение, вызванное аллилизотиоцианатом внутри носа.Это ощущение вызвано чувствительностью слизистых оболочек, называемой хеместезисом, которая запускается связыванием аллилизотиоцианата с определенными сенсорными рецепторами, которые обнаруживают боль и воспаление (это явление отвечает за другие, похожие ощущения жжения, возникающие при употреблении любого из овощей из овощей. семейство brassica, включая хрен и васаби.)

Как использовать горчичное масло

Как я сказал выше, его можно использовать разными способами: жарить, тушить или добавлять в смесь для аахара.

Если вы хотите, чтобы его острый толчок был особенно мощным, вам нужно нагреть масло, что увеличивает летучесть его мощных ароматических молекул, отправляя их в воздух и вверх по носовым ходам. Например, чтобы подбодрить raita , я обжариваю специи в горячем горчичном масле и сбрызгиваю его сверху. Просто обратите внимание, что, хотя нагревание масла дает вам больший аромат, он также приводит к немного менее острому горчичному маслу на небе, именно потому, что вы вытеснили некоторые из этих молекул из масла в воздух.

В конце концов, о горчичном масле лучше всего думать как о любом другом ароматном масле, таком как оливковое масло, кунжутное масло или масло грецкого ореха. Я поливаю им салаты, как в рецепте салата из огурцов, который я разработал для этой статьи, и использую его в качестве финишного масла для многих блюд, независимо от того, сосредоточены ли они на овощах, рыбе, птице или стейке - практически везде, где я думаю, что это васаби. как край будет сиять.

границ | Интраколоническое горчичное масло вызывает висцеральную боль у мышей с помощью TRPA1-зависимых и независимых механизмов: роль повреждения тканей и рецепторов P2X

Введение

Висцеральная боль очень часто встречается в клинической практике, и это основная причина обращения за медицинской помощью ( Drewes et al., 2020). Катионный канал TRPA1 (временный рецепторный потенциал анкирина 1) был предложен в качестве потенциальной мишени для лечения этого конкретного типа боли (например, Lapointe and Altier, 2011). Горчичное масло (аллилизотиоцианат) является острым компонентом горчицы, хрена и васаби (Bandell et al., 2004). Было показано, что горчичное масло, а также другие электрофильные химические вещества (например, формалин) могут напрямую активировать TRPA1 (Jordt et al., 2004; Macpherson et al., 2007; McNamara et al., 2007), который локализован в субнаборе ноцицепторов, экспрессирующих TRPV1 (Story et al., 2003). Когда горчичное масло вводится в толстую кишку грызунов, оно вызывает ноцицептивные реакции сразу после этого из-за прямой активации ноцицепторов, упомянутых выше, и за этими реакциями следует механическая гипералгезия, относящаяся к брюшной стенке (Laird et al., 2001). Этот последний процесс является результатом центральной сенсибилизации (Urban and Gebhart, 1999), о чем может свидетельствовать фосфорилирование (активация) регулируемых внеклеточными сигналами киназ (ERK1 / 2) в спинном мозге (Gao and Ji, 2009).Кроме того, активация нейронов, экспрессирующих TRPA1, горчичным маслом приводит к нейрогенному воспалению, которое способствует экстравазации плазмы и отеку, что способствует возникновению боли (Matsuda et al., 2019).

Стоит отметить, что не все эффекты горчичного масла имеют нейронное происхождение, поскольку было показано, что этот химический раздражитель способен повреждать слизистую оболочку толстой кишки даже после денервации (Laird et al., 2000). Кроме того, хотя введение низких доз этого альгогенного химического вещества в соматическую ткань активирует исключительно TRPA1, высокие дозы могут надежно активировать другие подмножества ноцицептивных нейронов, помимо ноцицепторов, экспрессирующих TRPA1 (Braz and Basbaum, 2010).Эти TRPA1-независимые эффекты высоких доз горчичного масла могут быть связаны с повреждением тканей и высвобождением прогальгетических медиаторов поврежденными клетками, а не с непосредственным воздействием нейронов. Следовательно, высокие дозы горчичного масла могут быть полезны для изучения боли, вызванной повреждением тканей. АТФ действует на нейрональные рецепторы P2X и, как известно, является одним из основных альгогенных химических веществ, выделяемых при повреждении клеток (Cook and McCleskey, 2002). Фактически, пуринергический антагонизм был предложен как многообещающий терапевтический инструмент для облегчения боли при воспалительных заболеваниях кишечника, таких как болезнь Крона и язвенный колит (Burnstock, 2017), которые характеризуются макроскопическими поражениями толстой кишки, которые, несомненно, способствуют возникновению боли (Gecse and Vermeire, 2018).Однако, насколько нам известно, вклад TRPA1 (прямая активация нейронов) и рецепторов P2X (АТФ из поврежденной ткани) в висцеральную боль, вызванную горчичным маслом, никогда не изучался.

Принимая во внимание эти антецеденты, мы стремились изучить вклад TRPA1 и пуринергических рецепторов в ноцицептивные ответы и отраженную гипералгезию, вызванную низкими и высокими дозами горчичного масла внутри толстой кишки. Сначала мы проверили, может ли лечение резинифератоксином, лекарством, способным избирательно удалять TRPV1-экспрессирующие нейроны (Montilla-García et al., 2018) (который, как описано выше, содержит ноцицепторы TRPA1 +), изменяет поведенческие проявления, гистологические изменения в толстой кишке (такие как появление нейрогенного отека и явное повреждение ткани) и активацию нейронов в спинном мозге (измеряется как фосфорилирование ERK). ), индуцированные внутрикостным горчичным маслом. Во-вторых, мы протестировали эффекты пуринергического антагониста TNP-ATP (Honore et al., 2002) на изменения поведения, вызванные низкими и высокими дозами горчичного масла, и сравнили их с эффектами, вызванными фармакологическим антагонизмом TRPA1 AP18 ( Цубота-Мацунами и др., 2012).

Методы

Экспериментальные животные

Экспериментальными животными были взрослые самки мышей CD-1 (Charles River, Барселона, Испания) массой 25–30 г. Животные были акклиматизированы в наших помещениях для животных в течение как минимум 1 недели перед тестированием и содержались в клетках для колоний (1145T Tecniplast, Varese, Италия) с древесным гранулятом тополя в качестве подстилки (Safe, Augy, Франция) при температуре и освещении. контролируемые помещения (22 ± 1 ° C, свет в 08.00 ч, выключение в 20.00, замена воздуха каждые 20 мин).Стандартная лабораторная диета (диета Harlan Teklad Research, Мэдисон, Висконсин, США) и водопроводная вода были доступны ad libitum до начала экспериментов. Тестирование проводилось во время световой фазы (с 9.00 до 15.00 ч) и в произвольное время в течение эстрального цикла. С мышами обращались в соответствии с международными стандартами (директива Совета европейских сообществ 2010/63), а процедуры были одобрены Комитетом по этике исследований Университета Гранады. Чтобы уменьшить количество животных в этом исследовании, мы использовали тех же мышей для поведенческих исследований, гистологического анализа и иммуноокрашивания, когда это возможно.

Лекарства и администрация лекарственных средств

Мы оценили эффекты селективного антагониста TRPA1 AP18 (4- (4-хлорфенил) -3-метилбут-3-ен-2-оксим) и пуринергического антагониста TNP-ATP (2 ', Тетранатриевая соль 3'-O- (2,4,6-тринитрофенил) аденозин-5'-трифосфата) (обе поставляются Sigma-Aldrich, Барселона, Испания) при ноцицептивном поведении, вызванном горчичным маслом, и отнесенной гипералгезии. AP18 растворяли в 7,5% ДМСО с 0,5% Твина 80 и доводили до 100% объема с помощью PBS. TNP-ATP растворяли в физиологическом растворе.AP18 (10 мг / кг) или TNP-ATP (25 мкг / кг) или их растворители вводили внутрибрюшинно в объеме 10 мл / кг за 30 и 5 минут до внутрикостного введения горчичного масла, соответственно, как эти Сообщается, что лекарства проявляли активность при введении этим путем в это время до использования химического альгогена (Xu et al., 2008; Tsubota-Matsunami et al., 2012). Растворы лекарств готовили непосредственно перед началом экспериментов.

Оценка ноцицептивного поведения и отнесенной гипералгезии, вызванной интраколоническим горчичным маслом

Доза горчичного масла, вводимая для оценки висцеральной боли у мышей, значительно варьируется между исследованиями и обычно колеблется от 0.От 5% до 2,5% (Laird et al., 2001; Li et al., 2013; Sałaga et al., 2015; Zielińska et al., 2015). Поэтому мы выбрали дозы 0,5 и 2,5% горчичного масла в качестве низких и высоких доз для сравнения в большинстве описанных здесь экспериментов. Мышей содержали в отдельных прозрачных пластиковых коробках (7 × 7 × 13 см) на приподнятой платформе с полом из проволочной сетки, а небольшие зеркала позади и под камерами облегчили наблюдение за поведением животных. После 40-минутного периода привыкания животных удаляли из отсеков, а после нанесения вазелина на перианальную область, чтобы избежать стимуляции соматических областей, 50 мкл раствора горчичного масла (Sigma-Aldrich) (от 0.От 5 до 2,5%), растворенного в PEG 400 (Bourgeois et al., 2014), закапывали в толстую кишку через задний проход через тонкую канюлю с закругленным концом (внешний диаметр 0,61 мм; длина 4 см), подключенную к 1710 TLL. Микрошприц Hamilton (Teknokroma, Барселона, Испания). Контрольным животным такой же объем носителя горчичного масла вводили внутриклеточно. После закапывания животных немедленно возвращали в отсек, где количество ноцицептивных поведений (облизывание, растяжение и сокращение живота) подсчитывалось в течение 20 минут, разделенных на четыре периода по 5 минут каждый (Laird et al., 2001; Гонсалес-Кано и др., 2013).

После оценки поведения, связанного с болью, описанного выше, наличие отраженной гипералгезии определяли путем тестирования количества реакций отмены на точечную механическую стимуляцию живота. Нить фон Фрея (Touch-Test Sensory Evaluators, North Coast Medical Inc., Гилрой, Калифорния, США), откалиброванная до 0,16 г (3,22 мН), накладывалась на нижнюю / среднюю часть живота, избегая перианальных и внешних областей гениталий. Нить накладывали 10 раз по 2 с каждый с интервалами между нанесениями не менее 5 с, и подсчитывали количество положительных откликов из 10 применений.Реакция на нить считалась положительной, если наблюдались немедленное лизание или царапание места нанесения, резкое втягивание живота или прыжки.

Экспериментатор, который оценивал поведенческие реакции, не знал, как лечить экспериментальных животных. Каждое животное использовалось только один раз и получало разовую концентрацию горчичного масла или его носителя и разовую дозу одного лекарства или его растворителя.

Оценка ноцицептивных ответов, вызванных интраплантарной инъекцией формалина или горчичного масла

Ноцицептивные ответы, вызванные внутриподошвенным введением химических раздражителей, оценивали, как описано ранее (Shields et al., 2010), с небольшими изменениями. Вкратце, 20 мкл низкой дозы (0,5%) разбавленного формалина (Sigma-Aldrich), растворенного в физиологическом растворе, или горчичном масле, приготовленном, как описано в предыдущем разделе, вводили интраплантарно в дорсальную поверхность правой задней лапы с помощью Микрошприц 1710 TLL Hamilton (Teknokroma) и игла 30 1/2 калибра. Сразу после инъекции животное помещали в стеклянный цилиндр для наблюдения. Контрольным животным тот же объем носителя, который использовался для формалина или горчичного масла, вводили внутриподошвенно.Время, потраченное на облизывание или укусы инъекционной лапы, регистрировалось в течение 10 минут сразу после инъекции.

In vivo Абляция нейронов, экспрессирующих TRPV1

Мы использовали резинифератоксин (RTX, Tocris Cookson Ltd., Бристоль, Соединенное Королевство) в качестве «молекулярного скальпеля» для избирательной абляции нейронов, экспрессирующих TRPV1. После индукции анестезии изофлураном (IsoVet®, B. Braun, Барселона, Испания) каждое животное получало однократную дозу RTX (50 мкг / кг), растворенного в 10% Tween 80 и 10% этаноле в физиологическом растворе (0.9% NaCl) внутрибрюшинно (Montilla-García et al., 2017). Животные контрольной группы получали равный объем носителя. После внутрибрюшинной инъекции мышей помещали в их домашние клетки на следующие 5 дней, после чего проводили поведенческое тестирование или сбор образцов.

Определение

TrpA1 и TrpV1 Экспрессия Образцы

РНК были извлечены из 12 ганглиев дорсальных корешков L6 (DRG), объединенных от шести разных животных. Полную РНК выделяли на среде фенол / хлороформ с использованием реагента Trizol (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и осаждения этанолом в соответствии с инструкциями Института Сэнгера © (ftp: // ftp.sanger.ac.uk/pub/resources/mouse/sigtr/RTPCR.pdf). Концентрацию и качество РНК оценивали спектрофотометрически с помощью прибора NanoDrop ND-1000 и электрофоретически с окрашиванием бромидом этидия.

кДНК первой цепи синтезировали с использованием 1 мкг каждого образца РНК в реакционном объеме 20 мкл, содержащем 5 мМ MgCl 2 , 1 × буфер RT, 1 мМ dNTP, 1 ед. / Мкл ингибитора РНКазы, 2,5 мкМ олиго ( dT) 16 и обратная транскриптаза MuLV 2,5 Ед / мкл (Applied Biosystems, Мадрид, Испания). Смесь инкубировали при 42 ° C в течение 15 мин и при 99 ° C в течение 5 мин.

Относительную количественную оценку уровней мРНК TrpA1 и TrpV1 в мышиных DRG проводили с помощью ПЦР в реальном времени. Праймеры, охватываемые интронами, были разработаны для амплификации TrpA1 и TrpV1 , а мышиный β-актин был использован для нормализации общего количества мРНК. Последовательности праймеров, размеры продуктов ПЦР и номера доступа в GenBank для каждого гена приведены в таблице 1. Реакции ПЦР были установлены путем объединения разведенной кДНК (5 мкл) в качестве матрицы с 0.Конечная концентрация каждой пары праймеров 5 мкМ и 12,5 мкл 2 × SYBR Green PCR Master Mix (Promega, Мадрид, Испания) и доводили до конечного объема 25 мкл стерильной водой, свободной от нуклеаз (Bio-Rad, Hercules , Калифорния, США). Образцы первоначально денатурировали при 94 ° C в течение 2 минут, затем следовали 40 циклов по 30 с для денатурации при 94 ° C, 30 с отжига при 60 ° C и 30 с для удлинения при 72 ° C на Techne Quantica ™ Real. -временная ПЦР-система. Анализ кривой плавления использовали для проверки специфичности амплификации.Все реакции проводили в трех экземплярах с контролями без матрицы. При каждом условии использовали три независимых биологических повтора.

ТАБЛИЦА 1 . Последовательности праймеров (5'-3 ') и размеры продуктов ПЦР.

Гистология

После того, как была вызвана глубокая анестезия изофлураном, мышам внутрисердечно перфузировали 20 мл физиологического раствора, а затем 4% раствор параформальдегида (Scharlab, Барселона, Испания). Толстую кишку удалили и зафиксировали в 4% параформальдегиде в течение 2 часов при 4 ° C.Образцы обезвоживали и заключали в парафиновые блоки. Срезы депарафинизировали ксилолом и регидратировали перед тем, как срезы ткани (5 мкм) окрашивали гематоксилин-эозином (Panreac, Castellar del Vallès, Испания). Морфометрический анализ каждого окрашенного среза был выполнен с помощью программного обеспечения ImageJ (версия 1.48, Wayne Rasband, NIH, Bethesda, MD, США), а площадь подслизистой оболочки (расположенная между собственной пластинкой и мышечной оболочкой) была измерена и нормализована по отношению к общая площадь отдела толстой кишки как показатель отека.Изображения были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse 50i, оснащенного камерой DS-Ri1 (Nikon Instruments Europe BV, Амстердам, Нидерланды), с увеличением 4 × и 10 ×.

Иммуногистохимия

Мышей перфузировали транскардиально, как описано выше, и собирали L6 DRG и соответствующий сегмент спинного мозга L3. Ткани подвергали последующей фиксации, дегидратировали и заливали парафином, как описано выше, перед иммуноокрашиванием.

Иммуноокрашивание TRPV1 и NeuN проводили в L6 DRG, где расположено большинство колоректальных афферентов (Robinson et al., 2004; Guo et al., 2019). После депарафинизации срезы тканей инкубировали с блокирующим раствором (5% нормальная ослиная сыворотка, 0,3% Triton X-100 в TBS) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем срезы инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с козьим антителом против TRPV1 (sc-12498, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Гейдельберг, Германия) в блокирующем растворе. После инкубации срезы промывали три раза по 10 минут каждый и инкубировали в течение 1 часа со вторичным ослиным антителом против козла Alexa Fluor-488 (A-11055, 1: 500; Invitrogen) и конъюгированным мышиным антителом против NeuN. (MAB377A5, 1: 500, Merck Millipore, Мадрид, Испания).Затем срезы промывали три раза по 10 мин каждый и закрепляли с помощью ProLong® Gold Antifade Mountant (Life Technologies, Alcobendas, Испания). Изображения получали с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа (модель A1, Nikon Instruments Europe BV).

Срезы ткани из сегмента спинного мозга L3 обрабатывали для извлечения антигена путем нагревания паром в 0,01 М цитратном буфере, pH 6,0, в течение 20 мин. Активность эндогенной пероксидазы гасили 3% H 2 O 2 в метаноле, pH 7.4, на 15 мин. Затем срезы промывали TBS с 0,1% Tween 20 и инкубировали в блокирующем растворе (2,5% кроличья сыворотка) в течение 20 минут. После этого следовала инкубация с первичным антителом против киназ, регулируемых фосфо-внеклеточным сигналом (pERK1 / 2) (4370S, 1: 200; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, США) в инкубационной камере при комнатной температуре в течение 60 мин. . Набор для обнаружения полимеров ImmPRESS ® HRP Anti-Rabbit IgG (пероксидаза) (MP-7401, Vector Laboratories, Burlingame, CA, США) использовали в соответствии с инструкциями производителя, и иммунореакцию визуализировали с помощью пероксидазы ImmPACT ™ DAB. (HRP) субстрат (SK-4105, Vector Laboratories) в течение 20 с.

Статистический анализ

Когда сравнивали несколько средних, в зависимости от эксперимента использовали односторонний или двусторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Бонферрони. При сравнении двух средних значений использовался непарный тест Стьюдента t . Данные qPCR в реальном времени анализировали с помощью статистики теста Стьюдента t и сравнительного метода Ct (метод 2-∆∆Ct) (Livak and Schmittgen, 2001). Исходные данные Ct были нормализованы относительно экспрессии β-актина.Во всех сравнениях различия между значениями считались значимыми, когда значение p было ниже 0,05. Все статистические анализы были выполнены с помощью программы SigmaPlot 12.0 (Systat Software Inc., Сан-Хосе, Калифорния).

Результаты

Ноцицептивные ответы и соответствующая гипералгезия, вызванная различными дозами интраколонического горчичного масла

Животные, получавшие интраколоническое лечение носителем горчичного масла, почти не показали поддающихся измерению болевых реакций (например, лизание, растяжение или сокращение живота) во время весь период наблюдения (20 мин) (рис. 1А).Внутриколонное введение горчичного масла в любой из трех испытанных доз (0,5, 1,0 или 2,5%) вызывало поведение, связанное с болью, которое было максимальным в период сразу после введения (0–5 мин) (рис. 1А). Хотя количество ноцицептивных форм поведения, вызванных каждой из трех доз, не различается заметно в течение первых 5 минут после применения, продолжительность ноцицептивного ответа зависела от дозы. При использовании химического раздражителя в концентрации 0,5% поведенческие реакции быстро уменьшались через 5 мин и почти полностью исчезали через 15–20 мин.Однако, когда использовалась концентрация горчичного масла 2,5%, ноцицептивные ответы сохранялись лишь с небольшим уменьшением в течение 20-минутного периода наблюдения. Доза горчичного масла 1,0% показала промежуточную картину: ноцицептивное поведение уменьшалось в течение первых 5–10 минут, а затем оставалось стабильным в течение оставшихся 10 минут (рис. 1А).

РИСУНОК 1 . Ноцицептивное поведение и отраженная гипералгезия, вызванная различными дозами горчичного масла в толстой кишке. (A) Динамика ноцицептивного поведения у мышей в течение 20 минут после внутриполостного введения горчичного масла (MO, 0.5, 1,0 или 2,5%) или его носителя, измеренные за 5-минутные периоды. (B) Ноцицептивное поведение в течение всего периода наблюдения (0–20 мин) после введения MO или его носителя у мышей из экспериментальных групп, показанных в (A) . (C) Ответы на механическую стимуляцию 0,16 г нитью фон Фрея в брюшной стенке мышей через 20 минут после закапывания MO или его носителя. (A – C) Каждая точка и вертикальная линия представляют собой среднее ± SEM значений, полученных у 8-10 мышей на группу.Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: p <0,05, p <0,01; двусторонний (A) или односторонний (B и C) ANOVA с последующим тестом Бонферрони.

Дозовая зависимость поведенческих эффектов, вызванных горчичным маслом, стала более очевидной, когда мы суммировали общее количество болевых реакций в течение 20-минутного периода оценки после применения химического раздражителя (рис. 1B).

Мы также оценили гипералгезию брюшной стенки для точечной механической стимуляции после инстилляции горчичного масла. Животные, которым вводили химический альгоген-носитель, реагировали только в 10% случаев при стимуляции тонкой (0,16 г) нитью фон Фрея (рис. 1С). После закапывания 0,5% горчичного масла животные показали усиленные ответы в тесте фон Фрея, отвечая на 55 ± 5% стимуляции (рис. 1C). Сенсибилизация к механической стимуляции была еще более очевидной в тестах с 1.0 или 2,5% горчичного масла, демонстрируя четкую дозовую зависимость с ответами на 88 ± 3,74% стимуляций в группе, получавшей горчичное масло в концентрации 2,5% (рис. 1C).

Мы выбрали 0,5 и 2,5% горчичного масла как низкую и высокую дозу, соответственно, для последующих экспериментов.

Дифференциальные эффекты удаления нейронов, экспрессирующих TRPV1, на ноцицептивное поведение и указанную гипералгезию, вызванную низкими и высокими дозами горчичного масла

Сначала мы провели двойное иммуноокрашивание в L6 DRG, чтобы пометить пан-нейрональные маркеры NeuN и TRPV1 в ткани. образцы от мышей, обработанных RTX или его растворителем.Хотя было обнаружено, что NeuN экспрессируется в сомах всех нейронов DRG, TRPV1 был мечен только в некоторых небольших нейронах у контрольных мышей, обработанных растворителем RTX (рис. 2A, верхние панели). У животных, получавших RTX, мы не обнаружили заметного окрашивания TRPV1, хотя метка NeuN все еще присутствовала (рис. 2A, нижние панели), что позволяет предположить, что абляция нейронов была ограничена популяцией TRPV1 +. Идентичные результаты были обнаружены в L4 DRG (данные не показаны). Как и ожидалось, и в результате удаления нейронов, экспрессирующих TRPV1, мРНК TrpV1 в L6 DRG была явно снижена (рис. 2В).Кроме того, мРНК для TrpA1 также была заметно снижена у животных, получавших RTX, в той же степени, что и транскрипты TrpV1 (рис. 2В). Эти результаты предполагают, что нейроны TRPA1 + являются частью популяции нейронов, экспрессирующих TRPV1.

РИСУНОК 2 . Резинифератоксин уничтожает большинство нейронов, экспрессирующих TRPV1. (A) Двойное мечение NeuN (красный) и TRPV1 (зеленый) в ганглии заднего корешка L6 (DRG). Верхние панели: образцы от контрольных (обработанных физиологическим раствором) мышей.Нижние панели: образцы мышей, обработанных резинифератоксином (RTX). Масштабная линейка 100 мм. (B) Относительная количественная оценка уровней мРНК TrpA1 и TrpV1 с помощью ПЦР в реальном времени в L6 DRG от мышей, получавших RTX или физиологический раствор. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших RTX или физиологический раствор: ** p <0,01 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Сообщалось, что ноцицептивные эффекты низких доз формалина и горчичного масла, вводимых интраплантарно, были отменены у мышей с нокаутом TRPA1 (Braz and Basbaum, 2010).Поэтому, чтобы проверить, приводит ли RTX-индуцированная абляция TRPV1-экспрессирующих нейронов к функциональному подавлению активности TRPA1, мы оценили ноцицептивные ответы, вызванные внутриподошвенной инъекцией низкой дозы (0,5%) формалина или горчичного масла у животных, получавших растворитель. или RTX. И формалин, и горчичное масло вызывали сильное облизывание / кусание инъецированной задней лапы у контрольных животных, тогда как ответы были заметно снижены у мышей, получавших RTX (дополнительные рисунки S1A, B). Таким образом, в наших экспериментальных условиях лечение RTX вызывало значительное удаление нейронов, экспрессирующих TRPV1, и сопутствующее снижение транскрипции TrpA1, что сопровождалось уменьшением болевых реакций, вызванных известными активаторами TRPA1, введенными в соматическую ткань.

Затем мы исследовали влияние RTX-индуцированной абляции TRPV1-экспрессирующих нейронов как на ноцицептивное поведение, так и на гипералгезию брюшной стенки, вызванную низкой (0,5%) и высокой дозой (2,5%) горчичного масла в толстой кишке. Лечение RTX почти полностью устраняло ноцицептивное поведение, вызванное низкой дозой внутрикостного горчичного масла, как во время пика болевых реакций в течение первых 5 минут после введения горчичного масла, так и в последующие 5-минутные интервалы в течение 20-минутного периода оценки (рис. 3А).Когда мы тестировали высокую дозу горчичного масла (2,5%), мы обнаружили значительное, хотя и частичное снижение начальных ноцицептивных ответов в течение 5-минутного периода сразу после введения химического раздражителя, но после этого начального снижения болевые реакции в RTX у животных, получавших лечение, увеличилось до значений, близких к значениям, наблюдаемым у животных, получавших растворитель RTX, в течение всех последующих 5-минутных периодов в течение 20-минутного периода оценки (Рисунок 3B).

РИСУНОК 3 .Дифференциальные эффекты удаления нейронов, экспрессирующих TRPV1, на ноцицептивное поведение, вызванное внутрикостным введением низкой и высокой доз горчичного масла. Влияние обработки резинифератоксином (RTX) или его растворителем (физиологический раствор) на динамику ноцицептивного поведения у мышей в течение 20 минут (измеренных за периоды 5 минут) после внутрикостного введения горчичного масла (MO) 0,5% (A) и 2,5% (B) или его носитель (C) Ноцицептивное поведение в первые 5 мин (0–5) и в следующие 15 мин (5–20) после введения МО или его носителя в мыши из экспериментальных групп, представленных в (A) и (B) . (A – C) Каждая точка или столбик и вертикальная линия представляют собой среднее ± SEM значений, полученных у 8–10 мышей на группу. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: * p <0,05, ** p <0,01; и между значениями, полученными у мышей, получавших MO и физиологический раствор или RTX: # p <0,05, ## p <0,01 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Чтобы облегчить сравнение эффекта абляции TRPV1 + нейрона на ноцицептивные ответы, вызванные обеими дозами внутрикостного горчичного масла в начальный период после введения химического раздражителя и в более длительные моменты времени, мы сгруппировали болевые реакции в течение 5 Период –20 мин после каждой дозы горчичного масла отдельно от первоначальной записи в течение первых 0–5 мин.Этот анализ ясно показал полное ингибирование RTX ноцицептивных ответов, вызванных 0,5% горчичным маслом, как непосредственно, так и в более длительные периоды после введения химического раздражителя, и что при использовании 2,5% горчичного масла RTX только частично обращал ноцицептивные ответы во время начальный 5-минутный период и не имел эффекта в течение оставшихся 5-20 минут (рис. 3C).

Когда мы тестировали механическую гипералгезию брюшной стенки, вызванную низкими и высокими дозами горчичного масла у животных, получавших RTX или его растворитель, мы обнаружили, что удаление нейрона TRPV1 приводило к полной реверсии тактильной гиперчувствительности в 0.Группа 5% горчичного масла, но не оказала никакого эффекта в группе дозы 2,5% (Рисунок 4).

РИСУНОК 4 . Дифференциальные эффекты удаления нейронов, экспрессирующих TRPV1, на отраженную гипералгезию, индуцированную внутрикостным введением низкой и высокой доз горчичного масла. Ответы на механическую стимуляцию 0,16-граммовой нитью фон Фрея в брюшной стенке мышей, получавших резинифератоксин (RTX) или его растворитель (физиологический раствор), через 20 минут после инстилляции MO (0,5 и 2,5%) или его носителя.Каждая полоса и вертикальная линия представляют собой среднее ± SEM значений, полученных у 8-10 мышей на группу. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: ** p <0,01; и между значениями, полученными у мышей, получавших MO и физиологический раствор или RTX: ## p <0,01 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Следовательно, TRPV1 + нейроны (которые экспрессируют TRPA1), по-видимому, необходимы как для болеоподобного поведения, так и для отраженной гипералгезии, индуцированной интра-толстым 0.5% горчичного масла, тогда как их роль, по-видимому, ограничена в ноцицептивных реакциях, вызванных 2,5% горчичного масла, и, по-видимому, не участвуют в тактильной гиперчувствительности, вызванной этой высокой дозой химического раздражителя.

Роль TRPV1-экспрессирующих нейронов в гистологических изменениях в толстой кишке после введения низких и высоких доз горчичного масла

Чтобы определить, вызывает ли горчичное масло наблюдаемые изменения в толстой кишке, которые могут объяснить описанные нейрононезависимые от TRPV1 болевые реакции В предыдущем разделе мы провели гистологические исследования на животных, получавших RTX или его растворитель.

Внутри ободочное введение 0,5% горчичного масла не вызывало явных гистологических изменений, и мы наблюдали только легкий (незначительный) отек по сравнению с образцами от мышей, получавших носитель, измеренный как увеличение площади подслизистой оболочки по отношению к общей площади. отдела толстой кишки. Процент площади подслизистой оболочки составлял 13,41 ± 2,01% у животных, получавших носитель, и 18,14 ± 4,52% у животных, получавших низкую дозу горчичного масла ( p > 0,05). Однако 2.5% горчичное масло вызывало заметные гистологические изменения, включая выраженный отек (рис. 5A, верхние левые панели; рис. 5B), а также серьезное повреждение тканей, о чем свидетельствует потеря эпителия и повреждение крипт (рис. 5A, нижние левые панели). Обработка RTX не вызвала очевидных изменений внешнего вида срезов толстой кишки у мышей, получавших носитель горчичного масла (рис. 5A, верхние правые панели), но полностью ослабила отек, вызванный 2,5% этого химического раздражителя (рис. 5A, верхние правые панели). ; Рисунок 5B).Интересно, что повреждение эпителия и крипт все еще присутствовало у животных, получавших 2,5% горчичное масло, несмотря на удаление TRPV1 с помощью RTX (рис. 5A, нижние правые панели).

РИСУНОК 5 . Нейроны, экспрессирующие TRPV1, влияют на отек, но не на повреждение тканей после интра-толстого введения высокой дозы горчичного масла. (A) Вверху: микрофотографии репрезентативных срезов толстой кишки, окрашенных гематоксилином-эозином, у мышей, которым давали горчичное масло (MO) 2,5% или его носитель и лечили резинифератоксином (RTX) или его растворителем (физиологический раствор).Масштабная линейка 250 мкм. Внизу: детали эпителия в заштрихованных областях на верхних панелях. Шкала 100 мкм. (B) Количественная оценка подслизистой оболочки относительно общей площади сечения толстой кишки (как показатель отека) у мышей, получавших MO или его носитель и обработанных RTX или физиологическим раствором. Каждая полоса и вертикальная линия представляют собой среднее значение ± SEM значений, полученных у четырех-шести мышей на группу. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: * p <0.05; и между значениями, полученными у мышей, получавших MO и физиологический раствор или RTX: # p <0,05 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Таким образом, наши результаты предполагают, что, хотя отек, вызванный интраокольным введением высокой дозы горчичного масла, полностью зависел от присутствия TRPV1-экспрессирующих нейронов, повреждение эпителия толстой кишки, по-видимому, опосредовано механизмами, независимыми от этой популяции нейронов. .

Вклад нейронов, экспрессирующих TRPV1, в активацию нейронов (pERK) в спинном мозге после введения высокой дозы горчичного масла

Мы проверили, стимулируется ли стимуляция толстой кишки 2.5% горчичное масло индуцировало активацию (фосфорилирование) ERK1 / 2 в спинном мозге L3 (иннервируемом нейронами L6 DRG) в качестве суррогатной меры активации ноцицептивных нейронов и зависимости этого процесса от RTX-чувствительных нейронов. Поскольку как поверхностные пластинки спинного рога спинного мозга, так и нейроны пластинки X вовлечены в висцеральную боль (Traub and Murphy, 2002), мы провели эти исследования в обеих областях.

Мы не обнаружили заметного окрашивания pERK1 / 2 в спинном мозге мышей, получавших физиологический раствор или RTX (в отсутствие горчичного масла), в поверхностном дорсальном роге или в области, окружающей центральный канал (пластинка X).На рисунках 6A, B (левые панели) представлены репрезентативные изображения, а на рисунке 6C показаны количественные данные для количества клеток pERK1 / 2 +. Напротив, значительное увеличение количества клеток pERK1 / 2 + было отмечено в этих областях в образцах от мышей, получавших 2,5% горчичного масла интраколонически (Фигуры 6A – C). Обработка RTX заметно снизила окрашивание pERK1 / 2 в образцах от мышей, получавших 2,5% горчичного масла, но только в поверхностном дорсальном роге, без влияния на мечение pERK1 / 2 в пластинке X, где мечение оставалось повышенным, несмотря на устранение TRPV1-экспрессии нейроны (Рисунки 6A – C).

РИСУНОК 6 . Экспрессия pERK1 / 2 в спинном мозге после интра-толстого введения высокой дозы горчичного масла лишь частично зависит от нейронов, экспрессирующих TRPV1. (A) Репрезентативные микрофотографии иммуноокрашивания pERK1 / 2 в поверхностном дорсальном роге и (B) в области, окружающей центральный канал (пластинка X) спинного мозга L3 после интраполостного введения 2,5% горчичного масла (MO ) или его носитель в образцах от контрольных (обработанных физиологическим раствором) животных (верхние панели) и мышей, обработанных резинифератоксином (RTX, нижние панели).Шкала 100 мкм. (C) Количественная оценка количества клеток, экспрессирующих pERK1 / 2, в поверхностном дорсальном роге и пластинке X после внутрикостного введения 2,5% MO или его носителя в образцах от мышей, обработанных RTX или физиологическим раствором. Каждая полоса и вертикальная линия представляют собой среднее ± SEM значений, полученных у восьми животных. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: ** p <0,01; и между значениями, полученными в поверхностном спинном роге у мышей, получавших MO и физиологический раствор или RTX: ## p <0.01 (двусторонний дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Таким образом, 2,5% горчичного масла вызывают заметную активацию ERK1 / 2 в областях спинного мозга, связанных с висцеральной болью. Нейроны, экспрессирующие TRPV1, по-видимому, участвуют в этой активации только в поверхностном дорсальном роге, тогда как активация pERK1 / 2 в пластинке X не зависит от этой популяции нейронов.

Влияние фармакологического антагонизма пуринорецепторов TRPA1 и P2X на ноцицептивные ответы и указанную гипералгезию, вызванную низкими и высокими дозами горчичного масла

Учитывая, что 2.5% горчичное масло (но не низкая 0,5% доза) вызывало значительное повреждение эпителия толстой кишки, мы предположили, что не зависящие от нейронов TRPV1 поведенческие реакции, которые мы наблюдали с высокой дозой горчичного масла, могут быть связаны с веществами, выделяемыми при повреждении тканей. Поскольку АТФ является одним из канонических химических альгогенов, высвобождаемых во внеклеточную среду после гибели клеток (Cervero et al., 1993), мы изучили влияние антагониста P2X TNP-ATP на ноцицептивное поведение и отразили гипералгезию у животных, получавших 0.5 и 2,5% горчичного масла, и сравнил его эффекты с эффектами антагонизма рецепторов TRPA1 со стороны AP18.

Введение растворителей AP18 или TNP-ATP не оказывало значительного влияния на болевое поведение, вызванное внутрикостным введением как низкой, так и высокой дозы горчичного масла (данные не показаны). AP18 полностью устранял ноцицептивное поведение, индуцированное низкой дозой интра-толстого горчичного масла в течение 20-минутного периода наблюдения (рис. 7A). Однако этот антагонист TRPA1 вызывал только частичное снижение начальных ноцицептивных ответов в течение 5-минутного периода сразу после введения высокой дозы горчичного масла, не влияя на ноцицептивные ответы в течение последующих 5-минутных периодов до конца 20-минутного периода. (Рисунок 7B).Эффекты TNP-ATP на висцеральную боль, вызванную горчичным маслом, показали картину, отличную от той, которую оказывает AP18. Антагонист P2X не изменял ноцицептивные ответы, вызванные 0,5% горчичным маслом, в любое время в течение периода наблюдения (фигура 7A). TNP-ATP также не смог изменить начальные болевые реакции в течение 5 минут сразу после введения 2,5% горчичного масла, но почти полностью исключил болевые реакции в более длительные моменты времени от 5 до 20 минут после введения химического раздражителя (рис. 7Б).

РИСУНОК 7 . Дифференциальные эффекты антагонизма TRPA1 и P2X на ноцицептивное поведение, вызванное внутрикостным введением низкой и высокой доз горчичного масла. Влияние внутрибрюшинного введения AP18 (10 мг / кг) или TNP-ATP (25 мкг / кг) на временную динамику ноцицептивного поведения мышей в течение 20 минут (измеряемых в течение 5-минутных периодов) после внутрикостного введения горчицы масло (MO) 0,5% (A) и 2,5% (B) или его носитель (C) Ноцицептивное поведение в первые 5 мин (0–5) и в последующие 15 мин (5–20 ) после введения MO или его носителя мышам из экспериментальных групп показали в (A) и (B) . (A – C) Каждая точка или столбик и вертикальная линия представляют собой среднее ± SEM значений, полученных у шести-восьми мышей на группу. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: * p <0,05, ** p <0,01; и между значениями, полученными у мышей, получавших только MO или AP18 или TNP-ATP: # p <0,05, ## p <0,01 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Чтобы облегчить сравнение эффекта AP18 и TNP-ATP на ноцицептивные ответы, вызванные каждой дозой горчичного масла в начальный период после введения химического раздражителя и в более длительные моменты времени, мы сгруппировали болевые реакции в течение 5–20 минут после применения каждой дозы горчичного масла отдельно от первоначальных ответов в течение первых 0–5 минут (рис. 7C).Этот анализ ясно показал, что антагонизм TRPA1 обычно снижает ноцицептивные ответы, вызванные 0,5% горчичным маслом, тогда как при использовании высокой дозы химического раздражителя, по-видимому, участвуют дополнительные механизмы в ноцицептивных ответах, особенно через 5 минут после введения горчичного масла и после этого. . Принимая во внимание заметные ингибирующие эффекты TNP-ATP на поздние ноцицептивные ответы, вызванные 2,5% горчичным маслом, механизмы, лежащие в основе этих эффектов, по-видимому, включают участие рецепторов P2X.

Мы также протестировали механическую гипералгезию, вызванную низкой и высокой дозой горчичного масла, у животных, получавших АР18 и TNP-ATP. Мы обнаружили, что AP18 заметно изменил тактильную гиперчувствительность при использовании 0,5% горчичного масла, но показал минимальные (незначительные) эффекты у животных, получавших 2,5% дозу химического раздражителя (рис. 8). С другой стороны, TNP-ATP не смог обратить вспять упомянутую гипералгезию, вызванную 0,5% горчичным маслом, хотя это привело к значительному снижению тактильной гиперчувствительности, вызванной 2.5% этого химического раздражителя. Эти результаты снова указывают на различную роль рецепторов TRPA1 и P2X в боли, вызванной различными дозами тестируемого здесь горчичного масла.

РИСУНОК 8 . Дифференциальные эффекты антагонизма TRPA1 и P2X на отраженную гипералгезию, вызванную введением внутрь толстой кишки низкой и высокой доз горчичного масла. Ответы на механическую стимуляцию 0,16 г филамента фон Фрея в брюшной стенке мышей, получавших внутрибрюшинно AP18 (10 мг / кг) или TNP-ATP (25 мкг / кг), через 20 мин после инстилляции MO (0.5 и 2,5%) или его транспортное средство. Каждая полоса и вертикальная линия представляют собой среднее значение ± SEM значений, полученных у шести-восьми мышей на группу. Статистически значимые различия между значениями у мышей, получавших MO или его носитель: ** p <0,01; и между значениями, полученными у мышей, получавших только MO или AP18 или TNP-ATP: ## p <0,01 (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

Обсуждение

В этом исследовании мы показываем, что как ноцицептивные реакции, так и отнесенная механическая гипералгезия в брюшной стенке, вызванная внутрикостным введением низкой дозы горчичного масла (0.5%) были отменены обработкой «молекулярным скальпелем» RTX и антагонистом TRPA1 AP18, но не пуринергическим антагонистом TNP-ATP. Однако, когда использовалась более высокая доза (2,5%) горчичного масла, ноцицептивные реакции и отраженная гипералгезия почти полностью не зависели от RTX или AP18, но были существенно ингибированы TNP-ATP.

Наши результаты показывают, что системная обработка RTX полностью устраняет окрашивание TRPV1 в DRG и заметно снижает мРНК TrpV1 , указывая на то, что RTX успешно устраняет подавляющее большинство нейронов, экспрессирующих TRPV1.Мы также показываем, что обработка RTX заметно снижает мРНК TrpA1 в той же степени, что и мРНК TrpV1 . Эти результаты предполагают, что нейроны TRPA1 + также были уничтожены этим нейротоксином, и согласуются с ранее описанным расположением нейронов TRPA1 + в подмножестве ноцицепторов, экспрессирующих TRPV1 (Story et al., 2003; La et al., 2011; Le Pichon и Чеслер, 2014). Удаление нейронов, экспрессирующих TRPV1 (и последующее удаление нейронов TRPA1 +), привело к отмене ноцицептивного поведения, вызванного внутриподошвенным введением низкой дозы формалина или горчичного масла, как показано здесь и в предыдущих исследованиях (Shields et al., 2010), что указывает на функциональное нарушение TRPA1 + нейронов под действием RTX. Ноцицептивное поведение и отраженная гипералгезия, вызванная 0,5% горчичным маслом, введенным интра-толстым путем, также были устранены не только удалением TRPV1-экспрессирующих нейронов, но также антагонистом TRPA1 AP18, поддерживающим избирательное TRPA1-опосредованное действие на висцеральную боль, вызванную этим химическим раздражителем, когда используется в этой низкой дозе. Эти последние результаты согласуются с предыдущими исследованиями, показывающими, что боль, вызванная подобными дозами горчичного масла, купировалась антагонизмом TRPA1 (Pereira et al., 2012).

При использовании более высокой дозы горчичного масла внутри толстой кишки (2,5%) полученные нами результаты были диаметрально противоположными. RTX или AP18 индуцировали некоторое улучшение ноцицептивных ответов на начальной стадии после интра-толстого введения горчичного масла, но уже через 5 минут после введения химического раздражителя ноцицептивные ответы больше не изменялись обработкой RTX или AP18. Отмеченная гипералгезия после нанесения 2,5% горчичного масла также показала ограниченную (незначительную) чувствительность к AP18 и отсутствие чувствительности к RTX.Следовательно, в течение первых 5 минут после применения этой высокой дозы горчичного масла активация TRPA1 оказала некоторое влияние на наблюдаемые поведенческие эффекты, тогда как в более поздние моменты времени (5–20 минут) висцеральная боль перестала зависеть от этого механизма.

Мы наблюдали, что введение высокой дозы горчичного масла в толстую кишку вызывало заметные гистологические изменения в толстой кишке. К ним относятся выраженный отек, который отсутствовал после удаления нейронов TRPV1 +. Известно, что активация TRPA1 приводит к локальному высвобождению нейропептидов, таких как вещество P или пептид, связанный с геном кальцитонина (CGRP), среди других, которые вызывают расширение сосудов и повышенную проницаемость сосудов, что способствует появлению отека (Engel et al., 2011; Мацуда и др., 2019). Следовательно, у мышей с аблацией нейронов TRPV1 + отсутствие отека после высокой дозы горчичного масла может быть связано с действием TRPA1. Однако, поскольку RTX не влиял ни на поздние ноцицептивные реакции, ни на отраженную гипералгезию, несмотря на заметное ингибирование отека, вызванного горчичным маслом, участие этого нейрогенного воспаления в висцеральной боли, вызванной 2,5% горчичным маслом, по-видимому, ограничено.

Используя pERK1 / 2 в качестве маркера нейрональной активации и центральной сенсибилизации после вредной стимуляции (Gao and Ji, 2009), мы обнаружили, что 2.5% горчичное масло вызывало значительную активацию нейронов в основном в поверхностном дорсальном роге, но также и вокруг центрального канала (пластинка X), что полностью согласуется с предыдущими исследованиями, в которых использовались эквивалентные маркеры нейрональной активации (экспрессия Fos ) (Traub and Murphy, 2002). ). Интересно, что мы показываем, что удаление нейронов TRPV1 + устраняет только ограниченную часть клеток pERK1 / 2 + в поверхностном дорсальном роге, не затрагивая pERK1 / 2 в пластинке X, что полностью согласуется с избирательным расположением центральных окончаний TRPV1. афференты в пластинке I и внешней пластине II (Cavanaugh et al., 2009). Следовательно, значительная часть нейрональной активации после интра-толстого введения высокой дозы горчичного масла не зависела от нейронов TRPV1 (и, следовательно, не была связана с действиями TRPA1), что может объяснить, почему ноцицептивное поведение и отраженная гипералгезия могут все еще присутствовать, несмотря на устранение предполагаемой нейрональная мишень горчичного масла. Эти результаты ясно указывают на роль дополнительных механизмов, отличных от активации TRPA1, в управлении болевым поведением после интра-толстого введения 2.5% горчичное масло.

В дополнение к отечному ответу толстой кишки, вызванному высокой дозой горчичного масла, мы также наблюдали серьезное повреждение эпителия толстой кишки, которое не зависело от нейронов, экспрессирующих TRPV1, учитывая, что оно не было изменено удалением ноцицепторов TRPV1 +. с RTX. Сообщалось, что горчичное масло способно разрушать барьер плотного соединения, по крайней мере, в культивируемых эпителиальных клетках желудка, независимо от TRPA1 (Tashima et al., 2014), и этот эффект может частично объяснять повреждение тканей, о котором мы сообщаем. здесь.Цитозольные факторы, высвобождаемые после гибели клеток, как известно, представляют собой быстрые ноцицептивные сигналы, а цитозольный АТФ является одной из наиболее важных молекул-посредников в запуске ноцицепции после этого процесса (Cook and McCleskey, 2002). Сенсорные нейроны экспрессируют пуринергические рецепторы семейства P2X для обнаружения внеклеточного АТФ, и мы показываем, что антагонист P2X TNP-ATP был способен заметно снижать как поздние ноцицептивные ответы, так и отраженную гипералгезию, вызванную 2,5% горчичным маслом, что указывает на то, что ATP ( а не активация TRPA1) способствует болевому поведению.Насколько нам известно, это первый отчет, показывающий, что действие горчичного масла на болевое поведение может быть отменено пуринергическим антагонистом. Однако сообщалось, что TNP-ATP снижает ноцицептивные ответы или активацию нейронов, вызванную висцеральной стимуляцией уксусной кислотой (Honore et al., 2002; Xu et al., 2008), что, как и высокая доза горчичного масла, может быть может вызывать повреждение тканей с последующим высвобождением АТФ. Стоит отметить, что TNP-ATP является конкурентным антагонистом с наномолярным сродством к рецепторам P2X1 и P2X3, тогда как он на несколько порядков менее эффективен в отношении других рецепторов P2X (обзор North and Jarvis, 2013).Рецепторы P2X1 экспрессируются в DRG на незначительных уровнях (Xu and Huang, 2002; Chen et al., 2016), но высоко экспрессируются в гладких мышцах и тромбоцитах (Mahaut Smith et al., 2019). Следовательно, маловероятно, что рецепторы P2X1 участвуют в ноцицептивных эффектах, вызываемых 2,5% горчичного масла. Однако подтип P2X3 хорошо изучен в физиологии боли (Burnstock, 2016). Известно, что пептидергические и непептидергические ноцицепторы представляют собой хорошо обособленные популяции нейронов у мышей (Zwick et al., 2002; Прайс и Флорес, 2007; Montilla-García et al., 2018), и хотя рецепторы P2X3 экспрессируются непептидергическими нейронами у этого вида, TRPV1 экспрессируется пептидергическими ноцицепторами (Zwick et al., 2002). Следовательно, принимая во внимание, что АТФ ощущается экспрессирующими P2X нейронами, которые отличаются от ноцицепторов, экспрессирующих TRPV1, активация P2X АТФ, высвобождаемого после повреждения ткани, может частично объяснять как активацию pERK в спинном мозге, так и обнаружение того, что болевое поведение в ответ на высокие дозы горчичного масла, по-видимому, не зависят от нейронов TRPV1 +, как сообщается здесь.

Научные доказательства роли рецепторов TRPA1 и P2X3 в обработке боли привели к разработке селективных антагонистов для обеих мишеней. Несколько антагонистов TRPA1 проходят клинические испытания для лечения послеоперационной или нейропатической боли и в настоящее время проходят клиническую проверку (Souza Monteiro de Araujo et al., 2020). Пока что ни один из них не вызывает побочных эффектов, но окончательные данные об их эффективности и безопасности еще не доступны общественности (Souza Monteiro de Araujo et al., 2020). Кроме того, антагонисты P2X3 проходят клинические испытания с многообещающими результатами в отношении боли при остеоартрите и с хорошим профилем безопасности, поскольку сообщалось, что после лечения часто наблюдаются только нарушения вкуса (гипогевзия или дисгевзия) (Krajewski, 2020). Хотя и TRPA1, и P2X были предложены в качестве многообещающих фармакологических мишеней для лечения висцеральной боли (например, Lapointe and Altier, 2011; Burnstock, 2017), наши результаты показывают, что когда висцеральная боль вызвана повреждением ткани, облегчение боли за счет антагонизма P2X, по-видимому, помогает быть намного более эффективным, чем ингибирование TRPA1.У пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника, такими как болезнь Крона и язвенный колит, наблюдаются макроскопические болезненные поражения в толстой кишке (Gecse and Vermeire, 2018). Следовательно, мы можем предположить, что пуринергический антагонизм может с большей вероятностью показать эффективность, чем ингибирование TRPA1 в этой популяции пациентов.

Стоит отметить, что TNP-ATP не полностью изменил болевое поведение или отразил гипералгезию, вызванную высокой дозой горчичного масла, что позволяет предположить, что в болевом поведении участвуют другие механизмы, помимо TNP-ATP-чувствительных рецепторов P2X.Они могут включать другие пуринергические рецепторы (нечувствительные к TNP-ATP), а также множество дополнительных процицептивных медиаторов, таких как глутамат, кинины, цитокины и трофические факторы, которые, как и АТФ, как известно, способствуют возникновению боли после повреждения ткани (Amaya и др., 2013). Следовательно, наше открытие частичного эффекта TNP-ATP на висцеральную боль после повреждения ткани, вызванного 2,5% горчичным маслом, можно объяснить одновременным участием дополнительных механизмов, комплементарных активации P2X.

В заключение, мы обнаружили, что низкая доза (0,5%) внутрикостного горчичного масла вызывает висцеральную боль у мышей, что полностью зависит от действия TRPA1, тогда как при использовании высокой дозы (2,5%) этого химического раздражителя, висцеральная боль перестает зависеть от активации TRPA1 уже через 5 минут после введения, и на нее влияют рецепторы P2X, предположительно активируемые АТФ, высвобождаемым в поврежденной ткани. Предлагаемые механизмы воздействия низкой и высокой дозы горчичного масла проиллюстрированы на рисунке 9.Следовательно, ингибирования TRPA1 недостаточно для существенного уменьшения висцеральной боли, возникающей в результате повреждения ткани, тогда как пуринергический антагонизм, по-видимому, является более эффективной стратегией.

РИСУНОК 9 . Предлагаемые механизмы эффектов, вызванных низкой и высокой дозой горчичного масла. Низкая доза (0,5%) горчичного масла внутри толстой кишки вызывает висцеральную боль способом, полностью зависящим от действия TRPA1, тогда как при использовании высокой дозы (2,5%) этого химического раздражителя висцеральная боль в значительной степени зависит от рецепторов P2X, предположительно активируемых посредством АТФ выделяется поврежденной тканью.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Уход за животными соответствовал институциональным (Комитет по этике исследований Университета Гранады, Испания), региональным (Хунта де Андалусия, Испания) и международным стандартам (Директива Совета европейских сообществ 2010/63).

Вклад авторов

Концептуализация, RG-C, MC, JMB и EJC; Сбор данных, RG-C, AM-G, GP, JMT, JC и EF-S; Написание - Оригинальный вариант: RG-C, JMB и EJC; Написание - рецензирование и редактирование, все авторы; Приобретение финансирования, JMB и EJC.

Финансирование

Это исследование было частично поддержано Государственным исследовательским агентством Испании (10.13039 / 501100011033) под эгидой MINECO (номер гранта PID2019-108691RB-I00) и Хунтой Андалусии (грант CTS-109).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Благодарим К.Шашоку за улучшение использования английского языка в рукописи.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphar.2020.613068/full#supplementary-material.

Ссылки

Амая Ф., Идзуми Ю., Мацуда М. и Сасаки М. (2013). Травмы тканей и связанные с ними медиаторы обострения боли. Curr. Нейрофармакол . 11, 592–597. doi: 10.2174 / 1570159X11311060003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bandell, M., Стори, Г. М., Хван, С. В., Вишванат, В., Эйд, С. Р., Петрус, М. Дж. И др. (2004). Канал ядовитых холодных ионов TRPA1 активируется едкими соединениями и брадикинином. Neuron 41, 849–857. doi: 10.1016 / s0896-6273 (04) 00150-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bourgeois, C., Werfel, E., Galla, F., Lehmkuhl, K., Torres-Gómez, H., Schepmann, D., et al. (2014). Синтез и фармакологическая оценка 5-пирролидинилхиноксалинов как нового класса периферически ограниченных агонистов κ-опиоидных рецепторов. J. Med. Chem . 57, 6845–6860. doi: 10.1021 / jm500940q

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Браз, Дж. М., и Басбаум, А. И. (2010). Дифференциальная экспрессия ATF3 в нейронах ганглия задних корешков выявляет профиль первичных афферентов, задействованных различными вредными химическими стимулами. Боль 150, 290–301. doi: 10.1016 / j.pain.2010.05.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кавано, Д. Дж., Ли, Х., Ло, Л., Шилдс, С. Д., Зилка, М. Дж., Басбаум, А. И. и др. (2009). Определенные подмножества немиелинизированных первичных сенсорных волокон опосредуют поведенческие реакции на вредные термические и механические стимулы. Proc. Natl. Акад. Sci. США . 106, 9075–9080. doi: 10.1073 / pnas.07106

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cervero, F., Gilbert, R., Hammond, R.G., and Tanner, J. (1993). Развитие вторичной гипералгезии после безболезненной термической стимуляции кожи: психофизическое исследование на человеке. Боль 54, 181–189. DOI: 10.1016 / 0304-3959 (93) -6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, L., Liu, Y. W., Yue, K., Ru, Q., Xiong, Q., Ma, B. M., et al. (2016). Дифференциальная экспрессия АТФ-зависимых рецепторов P2X в DRG между моделями хронической невропатической боли и висцералгии на крысах. Пуринергический сигнал 12, 79–87. doi: 10.1007 / s11302-015-9481-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Drewes, A.М., Олесен, А.Э., Фармер, А.Д., Сигети, Э., Ребур, В., и Олесен, С.С. (2020). Желудочно-кишечные боли. Нац. Преподобный Дис. Праймеры 6 (1), 1. 10.1038 / s41572-019-0135-7

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Engel, M.A., Leffler, A., Niedermirtl, F., Babes, A., Zimmermann, K., Filipović, M. R., et al. (2011). TRPA1 и вещество P опосредуют колит у мышей. Гастроэнтерология 141, 1346–1358. doi: 10.1053 / j.gastro.2011.07.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gao, Y.Дж. И Джи Р. Р. (2009). C-Fos и PERK, что является лучшим маркером нейрональной активации и центральной сенсибилизации после вредной стимуляции и повреждения тканей? Open Pain J 2, 11–17. doi: 10.2174 / 18763863000011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gecse, K. B., and Vermeire, S. (2018). Дифференциальная диагностика воспалительных заболеваний кишечника: имитации и осложнения. Ланцет Гастроэнтерол. Hepatol 3, 644–653. DOI: 10.1016 / S2468-1253 (18) 30159-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гонсалес-Кано, Р., Мерлос, М., Байенс, Дж. М., и Сендан, К. М. (2013). Рецепторы σ1 участвуют в висцеральной боли, вызванной внутриполостным введением капсаицина мышам. Анестезиология 118, 691–700. doi: 10.1097 / ALN.0b013e318280a60a

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Guo, T., Bian, Z., Trocki, K., Chen, L., Zheng, G., and Feng, B. (2019). Оптическая запись показывает топологическое распределение функционально классифицированных колоректальных афферентных нейронов в интактной пояснично-крестцовой DRG. Phys. Репу . 7, e14097. doi: 10.14814 / phy2.14097

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Оноре, П., Микуса, Дж., Бианки, Б., Макдональд, Х., Картмелл, Дж., Фалтинек, К. и др. (2002). TNP-ATP, мощный антагонист рецептора P2X3, блокирует вызванное уксусной кислотой сокращение живота у мышей: сравнение с контрольными анальгетиками. Боль 96, 99–105. DOI: 10.1016 / s0304-3959 (01) 00434-1

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jordt, S.Э., Баутиста, Д. М., Чуанг, Х. Х., МакКеми, Д. Д., Зигмунт, П. М., Хёгестетт, Э. Д. и др. (2004). Горчичное масло и каннабиноиды возбуждают сенсорные нервные волокна через TRP-канал ANKTM1. Природа 427, 260–265. doi: 10.1038 / nature02282

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

La, J. H., Schwartz, E. S., and Gebhart, G. F. (2011). Различия в экспрессии канала V1 переходного рецепторного потенциала, канала A1 переходного рецепторного потенциала и механочувствительных двух поровых K + каналов между пояснично-висцеральными и тазовыми нервами мочевого пузыря и толстой кишки мышей. Неврология 186, 179–187. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2011.04.049

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., and Cervero, F. (2001). Новая модель висцеральной боли и гипералгезии у мышей. Боль 92, 335–342. DOI: 10.1016 / s0304-3959 (01) 00275-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лэрд, Дж. М., Оливар, Т., Роза, К., Де Фелипе, К., Хант, С.П., и Cervero, F. (2000). Дефицит висцеральной боли и гипералгезии мышей с нарушением гена рецептора тахикинина NK1. Неврология 98, 345–352. doi: 10.1016 / s0306-4522 (00) 00148-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ле Пишон, К. Э. и Чеслер, А. Т. (2014). Функциональное и анатомическое рассечение соматосенсорных субпопуляций с использованием генетики мышей. Фронт. Нейроанат . 8, 21. doi: 10.3389 / fnana.2014.00021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Li, C., Чжу, Ю., Шеной, М., Пай, Р., Лю, Л., и Пасрича, П. Дж. (2013). Анатомическая и функциональная характеристика дуодено-панкреатического нервного рефлекса, который может вызывать острый панкреатит. Am. J. Physiol. Гастроинтест. Liver Physiol . 304, G490 – G500. doi: 10.1152 / ajpgi.00012.2012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ливак К. Дж. И Шмитген Т. Д. (2001). Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-Delta Delta C (T)). Методы 25, 402–408. doi: 10.1006 / meth.2001.1262

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Macpherson, L. J., Xiao, B., Kwan, K. Y., Petrus, M. J., Dubin, A. E., Hwang, S., et al. (2007). Ионный канал, необходимый для обнаружения химического повреждения. Дж. Neurosci . 27, 11412–11415. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.3600-07.2007

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mahaut Smith, M. P., Evans, R. J., and Vial, C. (2019).Разработка мыши с нокаутом рецептора P2X1-eYFP для отслеживания рецепторов в реальном времени. Пуринергический сигнал 15, 397–402. doi: 10.1007 / s11302-019-09666-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

McNamara, C. R., Mandel-Brehm, J., Bautista, D. M., Siemens, J., Deranian, K. L., Zhao, M., et al. (2007). TRPA1 опосредует боль, вызванную формалином. Proc. Natl. Акад. Sci. США . 104, 13525–13530. doi: 10.1073 / pnas.0705924104

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Montilla-García, Á., Пераццоли, Г., Техада, М. А., Гонсалес-Кано, Р., Санчес-Фернандес, К., Кобос, Э. Дж. И др. (2018). Модально-специфические периферические антиноцицептивные эффекты агонистов μ-опиоидов на тепловые и механические стимулы: вклад рецепторов сигма-1. Нейрофармакология 135, 328–342. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2018.03.025

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Montilla-García, A., Tejada, M. A., Perazzoli, G., Entrena, J. M., Portillo-Salido, E., Fernández-Segura, E., и другие. (2017). Сила захвата у мышей с воспалением суставов: ревматологический функциональный тест, чувствительный к боли и анальгезии. Нейрофармакология 125, 231–242. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2017.07.029

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Перейра, Л. М., Лима-Жуниор, Р. К., Бем, А. Х., Тейшейра, К. Г., Грасси, Л. С., Медейрос, Р. П. и др. (2012). Блокада TRPA1 с помощью HC-030031 ослабляет висцеральную ноцицепцию по механизму, независимому от резидентных клеток воспаления, оксида азота и опиоидной системы. евро. Дж. Пейн 17 (2), 223–233. doi: 10.1002 / j.1532-2149.2012.00177.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Прайс, Т. Дж., И Флорес, К. М. (2007). Критическая оценка совместной локализации между пептидом, связанным с геном кальцитонина, веществом P, иммунореактивностью типа 1 временного рецепторного потенциала ваниллоидного подсемейства 1 и связыванием изолектина B4 в первичных афферентных нейронах крысы и мыши. Дж. Пейн 8, 263–272. DOI: 10.1016 / j.jpain.2006.09.005

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Робинсон, Д. Р., Макнотон, П. А., Эванс, М. Л., и Хикс, Г. А. (2004). Характеристика первичной спинномозговой афферентной иннервации толстой кишки мышей с использованием ретроградного мечения. Neuro. Гастроэнтерол. Motil . 16, 113–124. doi: 10.1046 / j.1365-2982.2003.00456.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sałaga, M., Kowalczuk, A., Zielinska, M., Błaewicz, A., and Fichna, J. (2015).Дихлорметановый экстракт Calea zacatechichi проявляет антидиарейные и антиноцицептивные эффекты на моделях мышей, имитирующих синдром раздраженного кишечника. Арка Наунин-Шмидеберг. Pharmacol . 388, 1069–1077. doi: 10.1007 / s00210-015-1142-1

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шилдс, С. Д., Кавано, Д. Дж., Ли, Х., Андерсон, Д. Дж., И Басбаум, А. И. (2010). Болевое поведение в формалиновом тесте сохраняется после удаления подавляющего большинства ноцицепторов С-волокон. Боль 151, 422–429.doi: 10.1016 / j.pain.2010.08.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Соуза Монтейро де Араужо, Д., Нассини, Р., Джеппетти, П., и Де Логу, Ф. (2020). TRPA1 как терапевтическая мишень для ноцицептивной боли. Мнение эксперта. Ther. Targets 24, 997–1008. doi: 10.1080 / 14728222.2020.1815191

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Story, Г. М., Пайер, А. М., Рив, А. Дж., Эйд, С. Р., Мосбахер, Дж., Хричик, Т. Р. и др.(2003). ANKTM1, TRP-подобный канал, экспрессируемый в ноцицептивных нейронах, активируется низкими температурами. Cell 112, 819–829. doi: 10.1016 / s0092-8674 (03) 00158-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ташима, К., Кабашима, М., Мацумото, К., Яно, С., Хаген, С. Дж., И Хори, С. (2014). «Капсаицин-чувствительная нервная афферентация и желудочно-кишечный тракт: от скамейки к постели» в Аллилизотиоцианат, острый ингредиент васаби и горчичного масла, нарушает параклеточный барьер желудка в первичных культурах из желудка крысы через TRPA1-независимый путь .Редакторы К. Такеучи, О. Абдель-Салам и Г. Мозсик (Хорватия, Балканы: InTech), 1–25.

Google Scholar

Трауб, Р. Дж., И Мерфи, А. (2002). Воспаление толстой кишки вызывает экспрессию fos в грудопоясничном отделе спинного мозга, повышая активность спинопарабрахиального пути. Боль 95, 93–102. DOI: 10.1016 / s0304-3959 (01) 00381-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цубота-Мацунами, М., Ногучи, Ю., Окава, Ю., Секигучи, Ф., и Кавабата, А.(2012). Висцеральная боль, вызванная сероводородом в толстой кишке, и соответствующая гипералгезия включают активацию каналов Ca (v) 3.2 и TRPA1 у мышей. J. Pharmacol. Sci . 119, 293–296. doi: 10.1254 / jphs.12086sc

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Xu, G.Y., и Huang, L.Y. (2002). Периферическое воспаление сенсибилизирует опосредованные рецептором P2X ответы в нейронах ганглиев задних корешков крыс. Дж. Neurosci . 22, 93–102. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.22-01-00093.2002

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сюй, Г. Ю., Шеной, М., Уинстон, Дж. Х., Миттал, С., и Пасрича, П. Дж. (2008). Р2Х рецептор-опосредованная висцеральная гипералгезия на крысиной модели хронической висцеральной гиперчувствительности. Кишечник 57, 1230–1237. doi: 10.1136 / gut.2007.134221

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zielińska, M., Ben Haddou, T., Cami-Kobeci, G., Sałaga, M., Jarmu, A., Padysz, M., et al. (2015). Противовоспалительный эффект двойного агониста ноцицептина и опиоидных рецепторов, BU08070, при экспериментальном колите у мышей. евро. J. Pharmacol . 765, 582–590. doi: 10.1016 / j.ejphar.2015.09.021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цвик, М., Дэвис, Б. М., Вудбери, К. Дж., Беркетт, Дж. Н., Кербер, Х. Р., Симпсон, Дж. Ф. и др. (2002). Нейротрофический фактор, происходящий из глиальной клеточной линии, является фактором выживания для изолектин B4-положительных, но не ваниллоидных рецепторов 1-положительных нейронов мышей. Дж. Neurosci . 22, 4057–4065. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.22-10-04057.2002

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Frontiers | Угон горчично-масляной бомбы: как секвестрирующая глюкозинолаты блоха справляется с растительной мирозиназой

Введение

Многие растения отпугивают травоядных с помощью химической защиты, которая активируется при повреждении тканей (Morant et al., 2008). Соединение химической защиты обычно хранится в виде неактивного конъюгата глюкозы в вакуоли растительных клеток. При повреждении растительной ткани фрагмент глюкозы гидролизуется защитной β-глюкозидазой, изначально локализованной отдельно от конъюгата глюкозы, которая высвобождает токсичные и сдерживающие соединения (Morant et al., 2008; Pentzold et al., 2014b). Активированная химическая защита обычно более эффективна при отпугивании жевательных травоядных, вызывающих обширное повреждение тканей, чем при отпугивании насекомых менее инвазивными режимами кормления, такими как сокососы (Pentzold et al., 2014б).

У ряда травоядных насекомых выработалась устойчивость к этой стратегии защиты растений (Pentzold et al., 2014b), а некоторые высокоадаптированные виды даже накапливают (секвестрируют) растительные глюкозиды в своих телах и используют их для защиты от хищников (Kazana et al., 2007 ; Opitz, Müller, 2009; Beran et al., 2019). Однако в настоящее время не совсем понятно, как жевательные насекомые предотвращают гидролиз проглоченных растительных глюкозидов растительными β-глюкозидазами. Исследование с личинками рекового пилильщика ( Athalia rosae ) предполагает, что быстрое всасывание проглоченных глюкозидов (глюкозинолатов) через эпителий кишечника предотвращает их гидролиз в кишечнике; возможно, этому способствует низкая активность растительной β-глюкозидазы в передней части кишечника (Abdalsamee et al., 2014). Был также предложен механизм быстрого поглощения, позволяющий личинкам корневого червя западной кукурузы ( Diabrotica virgifera virgifera ) секвестрировать бензоксазиноидные глюкозиды; однако не было доказательств снижения активности β-глюкозидазы в личиночном кишечнике (Robert et al., 2017). Личинки обыкновенной моли ( Zygaena filipendulae ), которые секвестрируют цианогенные глюкозиды, избегают экстенсивной активности β-глюкозидазы растений за счет режима питания с разрезанием листьев, вызывая лишь незначительное повреждение тканей. Более того, щелочной pH в просвете средней кишки личинок москитной моли подавляет активность β-глюкозидазы растений (Pentzold et al., 2014а).

Изолирующие травоядные животные должны избегать гидролиза поглощенных ими растительных глюкозидов, но степень, в которой активность растительной β-глюкозидазы влияет на секвестрацию глюкозидов, оценивалась редко. Модель растения из латуни Arabidopsis thaliana предлагает идеальную систему для решения этого вопроса. Активированная защита Arabidopsis и других растений отряда Brassicales представляет собой глюкозинолат-мирозиназную систему (Halkier, Gershenzon, 2006; Blažević et al., 2020). Глюкозинолаты представляют собой структурно разнообразную группу тиоглюкозидов, производных от аминокислот, которые гидролизуются β-тиоглюкозидазами, называемыми мирозиназами. Образующийся аглюкон нестабилен и может давать образование различных продуктов гидролиза, включая изотиоцианаты, нитрилы и эпитионитрилы (рис. 1). Образующиеся продукты гидролиза зависят от различных факторов, таких как структура боковой цепи глюкозинолата, условия pH и присутствие так называемых белков-спецификаторов растений (Wittstock et al., 2016). Среди возможных продуктов гидролиза изотиоцианаты являются наиболее реактивными и, следовательно, токсичными для мелких травоядных (Jeschke et al., 2016a). Мутант с двойным нокаутом Arabidopsis tgg1 × tgg2 ( tgg ) лишен мирозиназной активности в листьях (Barth and Jander, 2006) и, таким образом, может использоваться для сравнительных исследований кормления с соответствующим Arabidopsis Col- 0 дикий тип (дикий тип). Например, в экспериментах по кормлению, проведенных с капустной блохой, Psylliodes chrysocephala , взрослые жуки секвестрировали в шесть раз больше глюкозинолатов из мирозиназодефицитного мутанта Arabidopsis tgg , чем из дикого типа (Beran et al., 2018). В аналогичном эксперименте по кормлению, проведенном с личинками хрена-блошки, Phyllotreta armoraciae , только следы секвестрированных глюкозинолатов были обнаружены у личинок дикого типа, тогда как сравнительно высокие уровни глюкозинолатов были обнаружены у личинок, питавшихся tgg (Sporer et al. др., 2020). В отличие от личинок P. armoraciae , взрослые жуки были способны связывать глюкозинолаты из листьев дикого типа (Yang et al., 2020), что позволяет предположить, что активность мирозиназы растений имеет более сильное влияние на секвестрацию глюкозинолатов у личинок по сравнению со взрослыми особями.Активность мирозиназы растений влияет не только на секвестрацию, но и на пищевое поведение блох Phyllotreta . В полевых экспериментах крестоцветная блоха, Phyllotreta cruciferae , вызывала меньше повреждений при кормлении на Brassica rapa растениях, отобранных по высокой активности мирозиназы, чем на растениях, отобранных по низкой активности мирозиназы (Siemens and Mitchell-Olds, 1996).

Рисунок 1. Схематический обзор вопросов, рассматриваемых в этом исследовании.Хреновая блоха, Phyllotreta armoraciae , изолирует глюкозинолаты из своих латунных растений-хозяев и, таким образом, может преодолевать активность мирозиназы растений. Здесь мы исследуем влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов (I) и влияние гидролиза глюкозинолатов на массу и запасы энергии жука (II). Кроме того, мы анализируем возможные механизмы, которые могут способствовать секвестрации, влияя на активность мирозиназы растений: быстрое поглощение проглоченных глюкозинолатов из кишечника (III), ингибирование (IV) и переваривание (V) растительных мирозиназ, а также условия рН кишечника (VI). .

Здесь мы исследовали влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов, влияние гидролиза глюкозинолатов на продуктивность жуков и потенциальные механизмы, которые способствуют секвестрации интактных глюкозинолатов на стадии взрослой жизни у P. armoraciae (Рисунок 1). В предыдущем исследовании кормления мы извлекли около 35% от общего количества проглоченных глюкозинолатов из листьев дикого типа в теле жука и фекалиях, тогда как метаболическая судьба более 60% от общего количества проглоченных глюкозинолатов оставалась неизвестной (Yang et al., 2020). Одно из возможных объяснений состоит в том, что невосстановленные глюкозинолаты гидролизуются растительными мирозиназами. Чтобы исследовать эту возможность, мы провели серию сравнительных экспериментов по кормлению с дефицитными мирозиназой и растениями дикого типа Arabidopsis . В природе P. armoraciae тесно связаны с хреном, Armoracia rusticana - видом растений, который характеризуется высоким уровнем аллилглюкозинолата (Li and Kushad, 2004; Ciska et al., 2017).Поэтому мы дополнительно исследовали влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию аллилглюкозинолата путем добавления интактного глюкозинолата в листьев Arabidopsis . Мы наблюдали отрицательное влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов и подтвердили, что часть проглоченных глюкозинолатов гидролизуется у P. armoraciae . Таким образом, мы спросили, несет ли метаболизм продуктов гидролиза глюкозинолата метаболические затраты в P.armoraciae . Наконец, мы исследовали возможные механизмы, которые позволяют P. armoraciae частично предотвращать гидролиз проглоченных глюкозинолатов растительной мирозиназой.

Материалы и методы

Растения и насекомые

Пищевые растения, Brassica juncea cv. «Бау Син» и Brassica rapa cv. «Yu-Tsai-Sum» (Known-You Seed Co., Ltd., Тайвань) выращивали в камере с контролируемой средой (24 ° C, относительная влажность 55%, 14 часов света / 10 часов темноты). Arabidopsis thaliana растений культивировали в условиях короткого дня в камере с контролируемой средой (21 ° C, относительная влажность 55%, 10-часовой световой / 14-часовой период темноты). Эксперименты проводились с A. thaliana Col-0 (дикий тип) и двумя мутантами на фоне A. thaliana Col-0: с дефицитом мирозиназы A. thaliana tgg1 × tgg2 ( tgg ) двойной мутант с нокаутом (Barth and Jander, 2006) и мутант с двойным нокаутом A. thaliana myb2 8 × myb29 ( myb ), который не продуцирует алифатические глюкозинолаты (Sønderby et al., 2007).

Лабораторное выращивание Phyllotreta armoraciae было начато в октябре 2012 года на жуках, собранных с растений хрена в Лаасдорфе, Тюрингия, Германия. Жуки относительно небольшие, их длина тела взрослой особи составляет около 3 мм, а вес составляет около 2–3 мг на жука. Жуков выращивали на горшечных 3–4-недельных растениях B. juncea или B. rapa в камере с контролируемой средой (24 ° C, относительная влажность 60%, 14 часов света / 10 часов темноты).Взрослым жукам давали новые растения каждую неделю, а растения с яйцами содержали отдельно для развития личинок. Через 3 недели весь оставшийся растительный материал удаляли, а почву, содержащую куколок, хранили в пластиковых контейнерах (объем 9 л, Lock & Lock, Сеул, Южная Корея). Новорожденных взрослых особей собирали каждые 2–3 дня. Если не указано иное, эксперименты проводились с недавно появившимися жуками, выращенными на растениях B. juncea . Мы не определяли пол использованных в экспериментах жуков, если не указано иное.

Эксперименты по секвестрации

Чтобы проанализировать, влияет ли активность мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов у жуков P. armoraciae , мы провели эксперименты по секвестрации с дефицитным мирозиназой мутантом Arabidopsis tgg и соответствующим Col-0 дикого типа.

В эксперименте мы кормили вновь появившихся жуков в течение 1 дня отделившимися листьями растений Arabidopsis дикого типа или tgg растений ( n = 28 на генотип, два жука на повторность).На следующий день каждый оставшийся лист взвешивали, замораживали в жидком азоте и хранили при -20 ° C до сублимационной сушки. Чтобы обеспечить переваривание проглоченного растительного материала, мы кормили жуков еще на один день на листьях Arabidopsis myb перед тем, как жуков взвешивали, замораживали в жидком азоте и хранили при -20 ° C до экстракции. Экстракцию и анализ глюкозинолатов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с детектированием на диодной матрице (HPLC-DAD) проводили, как описано в Beran et al.(2014). Взрослые жуков P. armoraciae превращают проглоченный 4-метилсульфинилбутил (4MSOB) глюкозинолат, главный алифатический глюкозинолат в растениях Arabidopsis дикого типа и tgg , в 4-метилтиобутил (4MTB) глюкозинолат (2020). Поэтому мы суммировали концентрации глюкозинолатов 4MSOB и 4MTB на мг сырой массы в каждом образце жуков и выразили эту концентрацию относительно концентрации обоих глюкозинолатов на мг сырой массы в соответствующем образце листа, которая была установлена ​​на 1.Чтобы установить, кормят ли жуки в равных количествах обеими линиями Arabidopsis , мы количественно оценили повреждение корма (2 жука на листовой диск диаметром 16 мм) в течение 1 дня с использованием программного обеспечения Fiji (Schindelin et al., 2012) ( n = 8 на генотип).

В эксперименте 2 мы скармливали вновь появившихся жукам Arabidopsis дикого типа, tgg или myb листьев в течение 1 дня ( n = 5, 5 жуков на повторность). После этого кал собирали в 50 мкл сверхчистой воды, содержащей 0.1% (об. / Об.) Муравьиной кислоты, смешанной с 50 мкл чистого метанола и хранящейся при -20 ° C. Жуков замораживали в жидком азоте и хранили при -20 ° C до экстракции. Оставшиеся листья взвешивали, замораживали в жидком азоте и сушили вымораживанием. Образцы фекалий гомогенизировали в течение 2 минут при 25 Гц в TissueLyzerII (Qiagen, Hilden, Германия) с использованием металлических шариков. Жуков гомогенизировали в 500 мкл 50% (об. / Об.) Метанола с помощью пластиковых пестиков. Высушенные вымораживанием листья гомогенизировали до порошка, как описано для образцов фекалий, и экстрагировали 800 мкл 50% (об. / Об.) Метанола.Образцы центрифугировали при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g и супернатанты хранили при -20 ° C до анализа с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (LC-MS / MS). В этом эксперименте мы количественно определили только продукты гидролиза, полученные из глюкозинолата 4MSOB и глюкозинолата 4MSOB, поскольку в настоящее время не существует метода ЖХ-МС / МС для количественного определения продуктов гидролиза, полученных из глюкозинолата 4MTB. Идентификацию и количественное определение метаболитов, полученных из глюкозинолата 4MSOB и глюкозинолата 4MSOB в образцах, проводили на системе ВЭЖХ Agilent 1200 (Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США), подключенной к тандемному масс-спектрометру API3200 (AB Sciex Germany GmbH, Дармштадт, Германия). с использованием кривых внешних стандартов, полученных из аутентичных стандартов каждого соединения, как описано у Beran et al.(2018). После количественной оценки мы вычитали средние количества каждого метаболита в телах или фекалиях контрольных жуков, питавшихся myb (фоновый контроль), из тех, которые были обнаружены у жуков дикого типа или tgg .

В эксперименте 3 мы скармливали вновь появившихся жукам в течение 1 дня листьев Arabidopsis дикого типа или tgg листьев, содержащих 300 нмоль аллилглюкозинолата, который вводили путем помещения черешка в водный раствор аллилглюкозинолата (Carl Roth, Mannheim, Германия), как описано у Schramm et al.(2012). Этот эксперимент был проведен на взрослых жуках, выращенных на растениях B. rapa , которые не продуцируют аллилглюкозинолат (Beran et al., 2018). Глюкозинолатный профиль голодных жуков, выращенных на B. rapa , анализировали, как описано в Beran et al. (2014) ( n = 20, с 5 жуками на повторность), чтобы подтвердить, что аллилглюкозинолат не присутствует у жуков. Чтобы облегчить распределение аллилглюкозинолата с добавками в листе, мы поместили черешок в реакционную пробирку, наполненную водой.Новорожденных жуков скармливали шипами Arabidopsis листьев в течение 1 дня ( n = 10 на генотип, 5 жуков на повторность), а листья с колючками аллилглюкозинолата без жуков содержали в тех же условиях, что и контрольный образец ( n ). = 8–10 на генотип). Каждый лист отбирали отдельно, замораживали в жидком азоте, лиофилизировали и гомогенизировали с металлическими шариками в течение 2 минут при 25 Гц в TissueLyzerII (Qiagen). Жуков взвешивали и замораживали в жидком азоте.Кал собирали в 100 мкл сверхчистой воды и смешивали с 100 мкл чистого метанола. Образцы листьев и жуков гомогенизировали в 1 мл и 800 мкл 50% (об. / Об.) Метанола соответственно. После центрифугирования в течение 10 мин при 16000 × g супернатанты собирали. Образцы фекалий гомогенизировали, как описано для листьев, и центрифугировали при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g . Супернатант собирали, растворитель выпаривали с использованием азота и экстракты повторно растворяли в 80 мкл 50% метанола.Образцы хранили при -20 ° C до ЖХ-МС / МС, как описано у Malka et al. (2016) с использованием модифицированного градиента элюирования. Градиент состоял из муравьиной кислоты (0,2%) в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B) и выполнялся следующим образом: 1,5% (об. / Об.) B (1 мин), 1,5–5% (об. / Об.). ) B (5 мин), 5–7% (об. / Об.) B (2 мин), 7–12,6% (об. / Об.) B (4 мин), 12,6–100% (об. / Об.) B (0,1 мин. ), 100% (об. / Об.) B (0,9 мин), от 100 до 1,5% (об. / Об.) B (0,1 мин) и 1,5% (об. / Об.) B (3,85 мин). Аллилглюкозинолат количественно определяли с использованием внешней калибровочной кривой.Мы получили 97,8 ± 6,5 и 109,5 ± 4,4% (среднее ± стандартное отклонение) глюкозинолата с колючками из неповрежденных (контрольных) листьев дикого типа и tgg листьев, соответственно, показывая, что только небольшие количества аллилглюкозинолата с колючками метаболизировались в листьях Arabidopsis . в наших условиях анализа. Чтобы определить, сколько аллилглюкозинолата съели жуки, мы вычитали количество аллилглюкозинолата, обнаруженное в каждом скармливаемом листе, из среднего количества аллилглюкозинолата, извлеченного из соответствующих необитаемых контрольных листьев.Количество аллилглюкозинолата, которое было извлечено из жуков и фекалий, было выражено по отношению к общему потребленному количеству, которое было установлено на 100%.

В эксперименте № 4 мы скармливали вновь появившихся жукам листьев Arabidopsis дикого типа с шипами аллилглюкозинолата или tgg листьев (приготовленных, как описано в эксперименте 3 ) в течение 1 дня и одновременно собирали свободное пространство на Porapak-Q Ловушки для сбора летучих TM (25 мг; ARS, Inc., Гейнсвилл, Флорида, США) ( n = 6–7 на генотип, 8 жуков на повторность). Листья без жуков служили контролем ( n = 4 на генотип). Сбор летучих и анализ образцов с помощью газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС) выполняли, как ранее описано в Sporer et al. (2020). Аллилизотиоцианат количественно определяли в образцах свободного пространства над продуктом, используя внешнюю калибровочную кривую, полученную из аутентичного стандарта (Sigma-Aldrich, Steinheim, Германия). Количество глюкозинолата на кормленного жука определяли, как описано в эксперименте Эксперимент 1 .

Эксперимент с производительностью

Чтобы выяснить, оказывает ли гидролиз проглоченных глюкозинолатов отрицательное влияние на продуктивность жуков, мы сравнили сырой вес и запасы энергии у жуков, которые кормились в течение 10 дней на арабидопсисе дикого типа или tgg листовых дисках. Мы разделили вновь появившихся жуков на самцов и самок и случайным образом отнесли их к одному из двух генотипов Arabidopsis ( n = 10 самок на генотип, n = 8–9 самцов на генотип).Каждому жуку давали новый листовой диск неповрежденного растения Arabidopsis каждый день в течение 10 дней подряд. После 10 дней кормления жуков взвешивали, замораживали в жидком азоте и хранили при -20 ° C до анализа энергетических запасов. Содержание растворимого белка, общих липидов, гликогена и растворимых углеводов у отдельных жуков определяли, как описано в Foray et al. (2012) с небольшими доработками. Вместо 96-луночного боросиликатного микропланшета мы использовали 96-луночный микропланшет из кварцевого стекла (Hellma Analytics, Müllheim, Германия), покрытый прозрачной клейкой пленкой MicroAmp (Applied Biosystems, Waltham, MA, США).Планшет нагревали с помощью ThermoMixer (Eppendorf, Гамбург, Германия), а для измерений использовали считыватель Tecan Infinite 200 Reader (Tecan, Crailsheim, Германия). В качестве контроля мы количественно определили уровни растворимого белка, аминокислот и сахаров в розеточных листьях растений Arabidopsis дикого типа и мутантных растений tgg (подробности см. В дополнительных материалах).

Распределение глюкозинолатов в

P. armoraciae вскоре после проглатывания

Чтобы исследовать, быстро ли поглощенные глюкозинолаты всасываются через эпителий кишечника у P.armoraciae , мы позволили вновь появившимся жукам поесть в течение 1 мин на листьях дикого типа или tgg . Через 5 мин жуков препарировали на кишку и оставшееся тело (без головы; n = 3, 3 жука на повторность). Жуков без подкормки использовали в качестве фонового контроля ( n = 2–3, 3 жука на повторность). Перед взятием образцов иссеченные кишки дважды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) pH 7,4 (Bio-Rad, Мюнхен, Германия). Образцы гомогенизировали в 500 мкл 80% метанола, содержащего 0.4 мкМ 4-гидроксибензилглюкозинолата в качестве внутреннего стандарта с использованием пластиковых пестиков и хранения при -20 ° C до экстракции и анализа с помощью ЖХ-МС / МС, как описано выше в , Эксперимент 2 . Мы количественно определили глюкозинолат 4MSOB в каждом образце, используя кривую внешнего стандарта, и выразили распределение глюкозинолата в кишечнике и остальной части тела относительно общего количества, обнаруженного в обоих образцах (установлено на 100%).

Анализы ингибирования мирозиназы

Чтобы определить, соответствует ли P.armoraciae может ингибировать поглощенную активность мирозиназы, мы провели анализ активности мирозиназы с экстрактами содержимого кишечника взрослых жуков. Содержимое кишечника взрослых собирали следующим образом: рассеченные кишки промывали буфером для экстракции [20 мМ 2- (N-морфолино) этансульфоновая кислота (MES), pH 5,2], содержащим ингибиторы протеаз (cOmplete, без ЭДТА, Roche, Mannheim, Германия) и разрезать в продольном направлении, чтобы собрать содержимое кишечника в 2,5 мкл буфера для экстракции. Для каждого образца содержимое кишечника 20 жуков объединяли, замораживали в жидком азоте и хранили при -20 ° C до экстракции ( n = 4).Образцы гомогенизировали металлическими шариками в течение 2 минут при 25 Гц в TissueLyzer II, центрифугировали при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g и супернатант разделяли на две части, одну из которых кипятили в течение 5 минут при 99 ° C. .

Анализы

(общий объем 50 мкл) состояли из 0,1 мМ аскорбиновой кислоты (Fluka, Buchs, Швейцария), 0,2 мМ глюкозинолата 4MSOB (субстрат), 0,5 нг / мкл частично очищенной мирозиназы из Sinapis alba (Sigma-Aldrich, подробности белка очистка описана в дополнительном материале) и (а) экстракт содержимого кишечника (соответствует четырем жукам), (б) экстракт содержимого кипяченого кишечника или (в) буфер для экстракции (контроль).Анализы с экстрактами кишечника, но без мирозиназы, и анализы, содержащие только субстрат, использовали в качестве дополнительных контролей. Анализы инкубировали в течение 15 минут при 30 ° C, реакцию останавливали кипячением в течение 5 минут при 99 ° C и экстрагировали 100 мкл 80% метанола, содержащего 0,2 мМ 4-гидроксибензилглюкозинолата в качестве внутреннего стандарта. Активность мирозиназы определяли путем количественного определения оставшегося количества глюкозинолата 4MSOB в каждом анализе, как описано в , Эксперимент 1 .

Обнаружение фермента мирозиназы и активности в фекалиях жуков

Чтобы определить, соответствует ли P.armoraciae может расщеплять проглоченные ферменты мирозиназы растений, мы собрали фекалии 90 взрослых особей, которые питались листьями арабидопсиса дикого типа в течение 1 дня в общем объеме 1 мл 20 мМ буфера MES pH 6,5, содержащего ингибиторы протеаз (cOmplete, без ЭДТА) ). После гомогенизации с металлическими шариками в течение 3 минут при 25 Гц в TissueLyzer II и центрифугирования при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g мы осаждали растворимые белки в супернатанте с помощью трихлоруксусной кислоты и промывали осадок ацетоном.Осадок белка растворяли в буфере Лэммли (Bio-Rad), кипятили в течение 15 минут при 95 ° C и разделяли на 12,5% -ном готовом геле Criterion Tris-HCl (Bio-Rad). Полосы белка окрашивали коллоидным кумасси G250 (Carl Roth), вырезали из геля и расщепляли свиным трипсином (Promega, Madison, WI, США), как описано у Shevchenko et al. (2006). Образцы повторно растворяли в 30 мкл 1% (об. / Об.) Муравьиной кислоты и 2 мкл анализировали с помощью анализа нано-UPLC-MS E , как описано у Vassão et al.(2018). Данные были получены с использованием независимого от данных сбора данных, называемого улучшенным MS E . Данные МС собирали с использованием программного обеспечения MassLynx v4.1 (Waters, Milford, MA, США).

Обработка данных nano-UPLC-MS E и идентификация белков выполнялись следующим образом: полученный континуум данных LC-MS E обрабатывали с использованием ProteinLynx Global Server (PLGS) версии 2.5.2 (Waters) для генерировать спектры ионов продукта для поиска в базе данных в соответствии с алгоритмом учета ионов, описанным в Li et al.(2009). Обработанные данные сравнивали с базой данных эталонных последовательностей (Refseq), содержащей последовательностей Arabidopsis thaliana, последовательностей (40785 последовательностей, загруженных из базы данных идентичных групп белков в Национальном центре биотехнологической информации (NCBI) в сочетании с базой данных, содержащей общие контаминанты (O'Leary). et al., 2016). Поиск в базе данных выполнялся с коэффициентом ложного обнаружения (FDR) 2% со следующими параметрами: минимальное количество фрагментов на пептид (3), пептидов на белок (1), фрагментов на белок (7) , и максимальное количество пропущенных сайтов триптического расщепления (1).Поиск был ограничен триптическими пептидами с фиксированным карбамидометилированием остатков цистеина наряду с переменным окислением метионина. Белки были классифицированы в соответствии с алгоритмом, описанным в программе PAnalyzer (Prieto et al., 2012), и разделены на четыре группы: убедительные, неразличимые, неоднозначные и неокончательные. Окончательные и неотличимые попадания считались уверенными совпадениями.

Чтобы определить, выделяет ли P. armoraciae активный фермент мирозиназы, мы проанализировали активность мирозиназы в гомогенатах фекалий и сравнили эту активность с соответствующей поглощенной активностью мирозиназы в листьях.Мы использовали недавно появившиеся жуков P. armoraciae , выращенных на B. rapa , и скармливали их в течение 1 дня листьев myb , обладающих мирозиназной активностью, но без глюкозинолата 4MSOB ( n = 6, 6 жуков на реплику). ). Листья взвешивали до и после кормления для определения свежей массы съеденных растений. Во время эксперимента листья снабжали водой, и средний пропорциональный прирост массы интактных листьев использовали для корректировки начальной массы листа ( n = 16).Кал из каждой реплики собирали в 130 мкл буфера для экстракции [20 мМ MES-буфер, pH 6,5, содержащий ингибиторы протеаз (cOmplete, без EDTA)]. Кал и скармливаемые листья замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до экстракции. Образцы фекалий гомогенизировали металлическими шариками при 25 Гц в течение 2 минут в TissueLyzer II. Соответствующие образцы замороженных листьев гомогенизировали металлическими шариками при 25 Гц в течение 2 мин в предварительно охлажденном держателе образцов для предотвращения оттаивания. Для каждой повторности мы рассчитали съеденную свежую массу и экстрагировали соответствующее количество гомогенизированной растительной ткани в том же объеме буфера, который использовался для экстракции фекалий.После центрифугирования при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g супернатант непосредственно использовали для анализа активности мирозиназы. Анализы состояли из 25 мкл буфера для экстракции, 5 мкл 11 мМ водного раствора глюкозинолата 4MSOB и (а) 25 мкл гомогената фекалий или (b) 25 мкл экстракта листьев. Анализы, содержащие только буфер для экстракции и субстрат, служили фоновым контролем ( n = 3). Чтобы проверить, оказывают ли экстракты фекалий ингибирующее действие на активность мирозиназы растений, мы дополнительно провели анализы, в которых мы смешали 25 мкл гомогената фекалий с 25 мкл соответствующего экстракта листьев и 5 мкл субстрата глюкозинолата.За исключением трех анализов с комбинированными экстрактами фекалий и листьев, все анализы были выполнены с двумя техническими повторностями. Анализы инкубировали в течение 30 минут при 30 ° C, останавливали кипячением в течение 5 минут при 95 ° C и добавляли 50 мкл 60% (об. / Об.) Метанола. После анализа активности образцы, содержащие гомогенаты фекалий, центрифугировали при 4 ° C в течение 10 минут при 16000 × g , собранный супернатант и конечные образцы хранили при -20 ° C до анализа LC-MS / MS. Глюкозинолат 4MSOB определяли количественно, как описано в , Эксперимент 2 , и активность мирозиназы выражали как нмоль глюкозинолата 4MSOB, гидролизованного в минуту, и мг (проглоченного) свежего веса растения.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен в R 3.3.1 (R Core Team, 2018) или в SigmaPlot 11.0 (Systat Software). Подробности статистического анализа, выполненного для каждого набора данных, приведены в дополнительной таблице 1.

Результаты

Активность растительной мирозиназы влияет на секвестрацию глюкозинолатов

Мы исследовали влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов у P. armoraciae путем сравнения относительного накопления глюкозинолатов 4MSOB и 4MTB у взрослых, которые питались листьями Arabidopsis с (диким типом) или без ( tgg ) мирозиназы. активности ( Эксперимент 1 ).Жуки, получавшие Tgg , накапливали в два раза более высокие уровни глюкозинолатов, чем жуки, получавшие дикий тип (критерий суммы рангов Манна-Уитни, U = 482,000, p <0,001; Рисунок 2A), тогда как скорость питания жуков и уровни глюкозинолатов имели не различаются между обоими генотипами растений (результаты статистического анализа представлены в дополнительной таблице 1).

Рисунок 2. Активность мирозиназы растений влияет на секвестрацию глюкозинолатов у P. armoraciae . (A) Накопление 4-метилсульфинилбутил (4MSOB) и 4-метилтиобутил (4MTB) глюкозинолатов у взрослых особей P. armoraciae после кормления Arabidopsis дикого типа и с дефицитом мирозиназы tgg n 909 на генотип растения). Глюкозинолаты жуков и скармливаемых листьев экстрагировали, превращали в десульфо-глюкозинолаты и анализировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с детектором на диодной матрице (HPLC-DAD). Концентрация глюкозинолата на мг сырой массы жуков выражается относительно концентрации на мг сырой массы растения в соответствующем листе после кормления, которая была установлена ​​на 1.Коробчатые диаграммы показывают медианное значение и 25 и 75 процентили. Точки представляют собой точки данных, которые лежат за пределами 10 -го и 90 -го процентилей. Данные сравнивались с помощью критерия суммы рангов Манна-Уитни ( ∗∗∗ p <0,001) (B) Относительный состав глюкозинолата 4MSOB и продуктов гидролиза, обнаруженных в телах и фекалиях дикого типа или tgg -fed взрослые особи ( n = 5 на генотип растения). Жуки, которые питались мутантом Arabidopsis myb , служили контролем ( n = 5).Глюкозинолаты и продукты гидролиза экстрагировали 50% метанолом и анализировали жидкостной хроматографией в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (LC-MS / MS). Количество метаболитов определяли с использованием кривых внешнего стандарта. Средние количества каждого метаболита, обнаруженного у контрольных жуков и их фекалий, вычитали из соответствующих образцов жуков дикого типа и tgg жуков. Соотношение продуктов гидролиза по отношению к общему количеству обнаруженных глюкозинолатов и продуктов гидролиза в телах и фекалиях у жуков дикого типа и tgg -пищевых жуков (установлено 100%, соответственно) сравнивали с помощью теста Стьюдента t (жуки: p = 0.025, кал ∗∗∗ p <0,001). Результаты статистического анализа показаны в дополнительной таблице 1. Цианид 4MSOB соответствует продукту гидролиза нитрила глюкозинолата 4MSOB. Другие метаболиты на основе изотиоцианата включают конъюгат изотиоцианат-глутатион 4MSOB, конъюгат изотиоцианат-цистеинилглицин 4MSOB, конъюгат 4MSOB изотиоцианат-цистеин, 2- (4- (метилсульфинил) бутиламино) -4,5-MSOB-ацетил-4-MS-дигидротиацин. .

Чтобы определить, является ли более низкое накопление глюкозинолата у жуков дикого типа результатом гидролиза глюкозинолата, мы проанализировали уровни глюкозинолата 4MSOB и известных продуктов гидролиза в организме и фекалиях жуков дикого типа и жуков, питающихся tgg ( Эксперимент 2 ).Поскольку уровни обнаруженных метаболитов сильно различались между повторами (дополнительная таблица 2), мы сравнили количества продуктов гидролиза относительно общих количеств глюкозинолата и продуктов гидролиза в каждом образце. Мы обнаружили значительно более высокую долю продуктов гидролиза в образцах тела и фекалиях жуков дикого типа, чем в соответствующих образцах жуков, питавшихся tgg (Рисунок 2B; жуки: тест Стьюдента t , t = 2,754. , p = 0.025, кал: Студент t -тест, t = 7,229, p <0,001). Цианид 4MSOB представлял собой доминирующий продукт гидролиза в образцах организма и кала, тогда как были обнаружены только следы свободных и метаболизированных изотиоцианатов (дополнительная таблица 2 и рисунок 2B). В целом продукты гидролиза глюкозинолатов составляли 28% и 2,2% от общего количества обнаруженных метаболитов у жуков дикого типа и tgg , соответственно (тела и фекалии). В совокупности наши результаты показывают, что часть проглоченного глюкозинолата 4MSOB гидролизуется мирозиназой растений, но гидролиз глюкозинолата также происходит независимо от активности мирозиназы растений.

Поскольку аллилглюкозинолат представляет собой основной глюкозинолат в естественном растении-хозяине P. armoraciae , мы количественно оценили влияние активности мирозиназы растения на метаболическую судьбу проглоченного аллилглюкозинолата (, эксперимент 3 ). Этот эксперимент был проведен с жуками, выращенными на B . rapa и, следовательно, не содержат аллилглюкозинолата (дополнительная таблица 3). Жуки, получавшие Tgg , накапливали на 9% больше от общего количества аллилглюкозинолата, чем жуки, получавшие дикий тип (Таблица 1), что подтверждает отрицательное влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию.В отдельном эксперименте по кормлению мы количественно оценили эмиссию летучего продукта гидролиза аллилглюкозинолата аллилизотиоцианата (, эксперимент 4, ) и обнаружили значительно более высокие количества аллилизотиоцианата в свободном пространстве жуков дикого типа, чем в свободном пространстве тгг. жуков (рис. 3А). Однако в этом эксперименте мы не обнаружили разницы в количестве секвестрированного аллилглюкозинолата у жуков дикого типа и жуков, питающихся tgg (фиг. 3B; результаты статистического анализа суммированы в дополнительной таблице 1).

Таблица 1. Извлечение проглоченного аллилглюкозинолата у P. armoraciae .

Рисунок 3. Влияние активности растительной мирозиназы на секвестрацию аллилглюкозинолата у P. armoraciae . Взрослых жуков кормили листами Arabidopsis с добавлением аллилглюкозинолата с (диким типом) и без ( tgg ) мирозиназной активностью в течение 1 дня ( n = 6-7 на генотип растения). (A) Летучие вещества в свободном пространстве над паром собирали на адсорбенте Porapaq-Q TM , элюировали гексаном и анализировали методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии.Количество выделившегося аллилизотиоцианата (AITC; m / z 99) определяли количественно с использованием кривой внешнего стандарта. Обнаруженные количества AITC были скорректированы путем вычитания фонового излучения, обнаруженного в сборах летучих, выполненных без жуков, которые служили в качестве контроля. Суммы AITC сравнивались с помощью критерия суммы рангов Манна-Уитни (*** p <0,001). (B) Количества секвестрированного аллилглюкозинолата у жуков определяли количественно после преобразования в десульфо-глюкозинолат с использованием внутреннего стандарта с помощью HPLC-DAD.Количества аллилглюкозинолата сравнивали с помощью теста Стьюдента t и достоверно не различались (n.s., p > 0,05). Результаты статистического анализа представлены в дополнительной таблице 1.

Питание

Arabidopsis Генотипы с активностью мирозиназы или без нее не влияют на массу и запасы энергии жука

Чтобы определить, влияет ли гидролиз глюкозинолата на продуктивность жука, мы сравнили сырой вес жука и различные запасы энергии у самцов и самок после кормления Arabidopsis дикого типа и tgg в течение 10 дней после эклозии.В качестве контроля мы сравнили питательную ценность листьев дикого типа и tgg и не обнаружили различий в отношении общих уровней растворимого белка, свободных аминокислот, растворимых сахаров и глюкозинолатов между растениями дикого типа и tgg растений (дополнительная таблица 4) . Кормовые растения не влияли на вес жука или уровни растворимого белка, липидов, гликогена и растворимых углеводов как у мужчин, так и у женщин (дополнительная таблица 5).

P. armoraciae Быстро абсорбирует глюкозинолаты через кишечник

Установить, соответствует ли п.armoraciae может быстро абсорбировать проглоченные глюкозинолаты, мы проанализировали распределение глюкозинолата 4MSOB у жуков P. armoraciae вскоре после кормления в течение 1 мин на листьях дикого типа и tgg листьях. Мы извлекли более 80% от общего обнаруженного глюкозинолата 4MSOB из организма (без кишечника), и это распределение глюкозинолатов не отличалось между жуками дикого типа и жуками, получавшими tgg (тест Стьюдента t , t = 0,075 , p = 0.944, рис. 4А).

Рис. 4. Распределение глюкозинолата 4MSOB в организме взрослых жуков P. armoraciae вскоре после приема пищи (A) и влияние экстрактов содержимого кишечника жуков на активность мирозиназы растений в in vitro ферментных анализах (B ) . (A) Жукам давали кормиться в течение 1 минуты листьями Arabidopsis с (диким типом) или без ( tgg ) активностью мирозиназы, и через 5 минут их разрезали на кишечник и остальную часть тела ( n = 3). на генотип растения).Жуков экстрагировали 80% метанолом, и глюкозинолат 4MSOB определяли количественно с помощью ЖХ-МС / МС с использованием кривой внешнего стандарта. Распределение глюкозинолата 4MSOB в кишечнике и остальной части тела выражается относительно общего количества, обнаруженного в обоих образцах (установлено на 100%). (B) Ферментные анализы проводили с частично очищенной мирозиназой Sinapis alba , которую инкубировали с глюкозинолатом 4MSOB в качестве субстрата в присутствии необработанного экстракта содержимого кишечника P.armoraciae , экстракт содержимого кипяченой кишки или буфер ( n = 4 на обработку). Активность мирозиназы определяли путем количественного определения глюкозинолатного субстрата 4MSOB в каждом анализе после преобразования в десульфо-глюкозинолат и анализа с помощью HPLC-DAD. Анализы без мирозиназы служили фоновым контролем, и активности вычитали из соответствующих образцов. Активность мирозиназы сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ( p <0,001). Разные буквы указывают на существенные различия между группами.Результат статистического анализа показан в дополнительной таблице 1.

Экстракты содержимого кишечника

P. armoraciae снижают активность мирозиназы in vitro

Чтобы определить, может ли секвестрация глюкозинолатов облегчаться подавлением активности мирозиназы растений в просвете кишечника P. armoraciae , мы проанализировали влияние экстрактов содержимого кишечника жуков на активность мирозиназы растений в тестах in vitro . По сравнению с контрольными анализами экстракты содержимого кишечника значительно снижали активность мирозиназы до 50% (ANOVA, F = 85.639, р. <0,001). Экстракты вареного содержимого кишечника снижали активность мирозиназы значительно меньше, чем необработанные экстракты (рис. 4В).

P. armoraciae выделяет неактивный фермент мирозиназы

Чтобы выяснить, деградируют ли мирозиназы Arabidopsis TGG1 и TGG2 в кишечнике P. armoraciae , мы проанализировали протеом кала. Мы обнаружили в общей сложности 14 пептидов, происходящих от мирозиназы Arabidopsis TGG1, в двух белковых полосах от 55 до 70 кДа, покрывающих 34% аминокислотной последовательности TGG1 (Фигуры 5A, B и дополнительная таблица 6).Диапазон молекулярной массы, в котором мы обнаружили пептиды TGG1, приблизительно соответствует прогнозируемой (61,1 кДа) и кажущейся (75 кДа) молекулярной массе TGG1 (Zhou et al., 2012). TGG2-специфические пептиды не были обнаружены в фекалиях с помощью нашего подхода.

Рис. 5. Обнаружение мирозиназ Arabidopsis в кале P. armoraciae. (A) Одномерный гель SDS / PAGE неочищенного белкового экстракта фекалий. Цифрами обозначены образцы, вырезанные для протеомного анализа с помощью нано-UPLC-MS E (показаны только нечетные числа).Пептиды, производные TGG1, были обнаружены в полосах, отмеченных звездочкой (*). (B) Выравнивание аминокислотной последовательности мирозиназ Arabidopsis, TGG1 (AT5G26000.1) и TGG2 (AT5G25980.2). Идентичные аминокислоты в последовательности TGG2 обозначены точкой. Пептиды, выделенные черным фоном, были обнаружены с помощью нано-UPLC-MS E (дополнительная таблица 6). Только один обнаруженный пептид соответствовал TGG1 и TGG2.

Поскольку протеомный анализ показывает, что P.armoraciae выделяет интактную мирозиназу, мы сравнили уровни поглощенной активности мирозиназы с уровнями экскретируемой. Активность мирозиназы, обнаруженная в фекалиях, соответствовала менее чем 4% проглоченной активности (фиг. 6, t = 10,449, p <0,005). Мы дополнительно добавили экстракты мирозиназы растений в гомогенаты фекалий, но наблюдали аналогичную активность, как и в контрольных анализах (рис. 6, t = 0,158, p = 1.000).

Рисунок 6. Судьба проглоченной растительной мирозиназной активности у P. armoraciae . Уровни активности растворимой растительной мирозиназы анализировали в экстрактах, приготовленных из интактных листьев Arabidopsis myb , и в соответствующем количестве переваренного листового материала (фекалий). Кроме того, экстракты мирозиназы растений были совместно инкубированы с соответствующим экстрактом фекалий ( n = 5–6 на обработку). Активность мирозиназы определяли добавлением глюкозинолата 4MSOB к каждому образцу. После 30 мин инкубации реакцию останавливали кипячением.Оставшийся глюкозинолатный субстрат количественно определяли с помощью LC-MS / MS. Активность мирозиназы в интактных листьях сравнивали с таковой в переваренных листьях и при совместной инкубационной обработке с помощью парных тестов Стьюдента t , соответственно ( ∗∗ p <0,005; н.у., p > 0,05). Результаты статистического анализа представлены в дополнительной таблице 1.

Обсуждение

Ферментативная активность защитных растительных β-глюкозидаз является основным барьером на пути секвестрации растительных глюкозидов травоядными насекомыми (Morant et al., 2008; Pentzold et al., 2014b). Здесь мы исследовали влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию глюкозинолатов у P. armoraciae и изучили возможные механизмы, которые позволяют взрослым жукам подавлять гидролиз глюкозинолатов во время кормления и пищеварения. Мы продемонстрировали отрицательное влияние активности мирозиназы растений на секвестрацию и подтвердили, что часть проглоченных глюкозинолатов гидролизуется мирозиназами растений. Мы обнаружили два механизма, которые могут снизить скорость гидролиза глюкозинолатов в кишечнике: быстрое всасывание проглоченных глюкозинолатов через эпителий кишечника и подавление активности мирозиназы растений в просвете кишечника.

В предыдущих количественных исследованиях кормления P. chrysocephala мирозиназы растений гидролизовали примерно 75% от общего количества проглоченных глюкозинолатов (Beran et al., 2018; Ahn et al., 2019), тогда как только около 10% проглоченных аллилглюкозинолатов были гидролизован в нашем количественном исследовании с использованием P. armoraciae . Хотя P. chrysocephala и P. armoraciae принадлежат к разным родам, они имеют схожие размеры тела и режимы питания и поэтому вызывают сопоставимые повреждения при кормлении.Таким образом, наши результаты показывают, что взрослых особей P. armoraciae лучше приспособлены к преодолению активности мирозиназы растений, чем взрослых особей P. chrysocephala .

Растительные мирозиназы гидролизовали фракцию проглоченных глюкозинолатов и, таким образом, отрицательно влияли на секвестрацию глюкозинолатов у P. armoraciae (Рисунки 2, 3 и Таблица 1). Хотя скорость связывания глюкозинолата 4MSOB и аллилглюкозинолата нельзя сравнивать напрямую, поскольку для количественной оценки использовались разные методы, наши результаты указывают на более сильное влияние активности мирозиназы растений на глюкозинолат 4MSOB, чем на аллилглюкозинолат.Биохимические исследования с мирозиназ арабидопсиса, TGG1 и TGG2 выявили схожую активность обоих ферментов по отношению к этим двум глюкозинолатам (Zhou et al., 2012), поэтому маловероятно, что предпочтения субстратов мирозиназ Arabidopsis повлияли на секвестрацию. Подобный глюкозинолат-зависимый эффект активности растительной мирозиназы на секвестрацию наблюдался также у личинок P. armoraciae (Sporer et al., 2020). Личинки секвестрировали аллилглюкозинолат из B.juncea , но почти не содержит глюкозинолатов из листьев Arabidopsis дикого типа. Хотя мы обнаружили аналогичные уровни активности растворимой мирозиназы в экстрактах сырого протеина листьев Arabidopsis и листьев B. juncea в ферментных анализах, мы не можем исключить, что разные уровни активности мирозиназы в Arabidopsis и B. juncea были ответственными. для этого результата. Тем не менее, наши результаты предполагают, что метаболическая судьба проглоченного аллилглюкозинолата у P.armoraciae в меньшей степени подвержен действию растительной мирозиназы, чем глюкозинолаты Arabidopsis . Поскольку аллилглюкозинолат представляет собой доминирующий глюкозинолат в хрене (Li and Kushad, 2004), у P. armoraciae могли быть разработаны специфические механизмы, позволяющие избежать гидролиза характерного глюкозинолата его естественного растения-хозяина.

Продукты гидролиза глюкозинолатов, в частности изотиоцианаты, как хорошо известно, оказывают негативное влияние на рост и развитие насекомых, нарушая их питание (Agrawal and Kurashige, 2003; Jeschke et al., 2016b, 2017; Sun et al., 2019). В наших экспериментальных условиях кормление жуков Arabidopsis с активностью мирозиназы или без нее не влияло на вес или запасы энергии взрослых особей P. armoraciae . Кроме того, пищевое растение не влияло на время развития, вес и запасы энергии личинок P. armoraciae (подробности см. В дополнительном материале и в дополнительной таблице 7). Хотя воздействие продуктов гидролиза глюкозинолатов может влиять на другие параметры фитнеса, такие как плодовитость самок или скорость вылупления яиц (Sun et al., 2019), наши текущие результаты показывают, что P. armoraciae могут переносить гидролиз глюкозинолатов.

Предыдущие эксперименты по кормлению, проведенные с травоядными чешуекрылыми-универсалом, показали, что изотиоцианат 4MSOB является основным продуктом гидролиза глюкозинолата 4MSOB в Arabidopsis (Schramm et al., 2012; Jeschke et al., 2017). Однако вместо изотиоцианата мы обнаружили в основном продукт гидролиза нитрила глюкозинолата 4MSOB в телах и фекалиях P. armoraciae (рис. 2B).Есть несколько возможных объяснений этого неожиданного результата: изотиоцианат 4MSOB, возможно, не был полностью извлечен с помощью наших методов экстракции, потому что он вступил в реакцию с белками или метаболизировался жуком или ассоциированными кишечными микробами (Brown and Hampton, 2011; Jeschke et al. , 2015; van den Bosch, Welte, 2017; Friedrichs et al., 2020; Shukla, Beran, 2020). Альтернативно, P. armoraciae может управлять результатом гидролиза глюкозинолата и способствовать образованию менее реакционноспособного нитрила вместо изотиоцианата.Манипуляция гидролизом глюкозинолатов происходит, например, у личинок белокочанной бабочки, которые экспрессируют в кишечнике так называемый белок-спецификатор нитрила (Wittstock et al., 2004). Фактически, перенаправление гидролиза глюкозинолата в сторону менее токсичных нитрилов может объяснить, почему активность мирозиназы растений не оказывала заметного влияния на производительность P. armoraciae . Необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять механизм, лежащий в основе необычного состава продуктов гидролиза глюкозинолата у P.armoraciae .

Как жевательные насекомые, вызывающие обширное повреждение тканей, предотвращают гидролиз проглоченных растительных глюкозидов, в настоящее время не совсем понятно. Одним из предлагаемых механизмов является быстрое всасывание растительных глюкозидов через эпителий кишечника, разделяющий субстрат и фермент (Abdalsamee et al., 2014; Pentzold et al., 2014b; van Geem et al., 2014). Хотя мы наблюдали очень быстрое поглощение проглоченных глюкозинолатов у P. armoraciae , остается неясным, действительно ли это предотвращает гидролиз глюкозинолатов в просвете кишечника.Более того, мы ожидали найти меньше глюкозинолатов в кишечнике жуков дикого типа из-за наличия мирозиназной активности. Неожиданно мы обнаружили аналогичные пропорции глюкозинолатов в кишечнике tgg - и жуков дикого типа, хотя мы не можем исключить, что глюкозинолаты, обнаруженные в кишечнике, были пространственно отделены от мирозиназ растений, либо в оставшейся неповрежденной растительной ткани, либо в эпителий кишечника.

Предполагается, что абсорбция полярных защитных соединений растений, таких как глюкозинолаты, через кишечник опосредуется мембранными переносчиками (Discher et al., 2009; Петченка, Агравал, 2016). Мы недавно идентифицировали глюкозинолат-специфические транспортеры, принадлежащие к суперсемейству главных фасилитаторов (MFS) у P. armoraciae , и обнаружили, что два транспортера глюкозинолатов экспрессируются в передней кишке, что указывает на их роль в захвате глюкозинолатов. Однако подавление экспрессии этих переносчиков не влияло на поглощение проглоченных глюкозинолатов у взрослых, что указывает на то, что дополнительные или другие переносчики опосредуют абсорбцию глюкозинолата у P.armoraciae (Yang et al., 2021).

Другим объяснением обнаружения глюкозинолатов в кишечнике P. armoraciae является ингибирование активности растительной мирозиназы в кишечнике. Экстракты содержимого кишечника снижали активность мирозиназы растений на 30–50% в анализах in vitro , причем вареные экстракты ингибировали активность мирозиназы значительно меньше, чем необработанные экстракты (рис. 4B). Эти результаты показывают, что активность проглоченных растительных мирозиназ, возможно, снижена в просвете кишечника P.armoraciae . Интересно, что экстракты содержимого кишечника близкородственного блохового жука P. chrysocephala также снижали активность растительной мирозиназы in vitro , но, в отличие от P. armoraciae , не было разницы между вареным и необработанным экстрактом (см. к дополнительному материалу, дополнительному рисунку 1). Однако наблюдаемые эффекты экстрактов содержимого кишечника на активность мирозиназы могут не быть специфичными для блох-жуков, улавливающих глюкозинолаты.Для дальнейшего изучения этого вопроса в будущие эксперименты следует включить дополнительные контроли, такие как стандартные растворы белков и экстракты содержимого кишечника других видов насекомых. В целом, на активность мирозиназы растений могут влиять различные факторы, включая уровни аскорбиновой кислоты (кофактора мирозиназ), сульфата, хлорида натрия и ионов серебра (Shikita et al., 1999; Andersson et al., 2009; Bhat and Vyas, 2019; Марцинковская и Елен, 2020). Кроме того, pH кишечника может иметь сильное влияние на активность потребляемых растительных ферментов (Pentzold et al., 2014б). Например, сильно щелочной pH просвета средней кишки личинок москитной моли резко снижает активность цианогенной β-глюкозидазы в мацератах листьев Lotus corniculatus (Pentzold et al., 2014a). Напротив, нейтральный pH гомогенатов кишечника глюкозинолат-секвестрирующих личинок репового пилильщика оказывал лишь незначительное влияние на активность съеденной растительной мирозиназы (Abdalsamee et al., 2014). Сообщается, что у жесткокрылых значения pH в кишечнике колеблются от 5 до 8 (Terra and Ferreira, 1994).Например, сравнение pH кишечника двух близкородственных блох-блох из рода Longitarsus выявило видоспецифичные значения pH 7,0 и 5,3 (Pankoke and Dobler, 2015). Гомогенаты кишечника P. armoraciae показали кислый pH (подробности описаны в дополнительном материале), который вряд ли окажет сильное влияние на активность мирозиназы растений.

Мирозиназа из S. alba и другие защитные для растений β-глюкозидазы были в значительной степени устойчивы к перевариванию в личиночном кишечнике чешуекрылых широкого профиля Spodoptera littoralis и, таким образом, сохраняли большую часть активности после переваривания (Vassão et al., 2018). Наш протеомный анализ фекалий жуков также показывает, что Arabidopsis мирозиназа TGG1 сопротивлялась перевариванию у P. armoraciae , тогда как TGG2 не был обнаружен в фекалиях (Рисунок 5 и Дополнительная таблица 5). Поскольку экспрессия TGG2 ограничена клетками, ассоциированными с флоэмой (Barth and Jander, 2006), жуки, вероятно, потребляли меньше TGG2, чем TGG1, избегая средней жилки и жилок листа (личное наблюдение). Несмотря на обнаружение фермента TGG1, мы почти не обнаружили активности мирозиназы в фекалиях P.armoraciae . Мы проверили наличие ингибитора (ов) мирозиназы в гомогенатах фекалий, но не наблюдали подавления пиковой активности мирозиназы в условиях нашего анализа (рис. 6). Таким образом, мы предполагаем, что проглоченный TGG1 был инактивирован во время прохождения через кишечник у P. armoraciae . Предыдущие исследования с реповым пилильщиком и пяденицей также показали, что мирозиназы растений не полностью активны в кишечнике (Abdalsamee et al., 2014; Sun et al., 2019). Однако основной механизм (ы) ингибирования мирозиназы в кишечнике специализированных травоядных животных, включая P.armoraciae еще предстоит определить.

P. armoraciae обладает эндогенной мирозиназной активностью, которая позволяет личинкам использовать секвестрированные глюкозинолаты для защиты от хищников (Sporer et al., 2020). Интересно, что мы обнаружили продукты гидролиза глюкозинолата в организме и фекалиях личинок и взрослых особей, которые питались мутантом tgg с дефицитом мирозиназы (взрослые: рисунки 2B, 3A, личинки: см. Дополнительные материалы, дополнительную таблицу 8 и дополнительную таблицу 2). ).Эти данные свидетельствуют о том, что мирозиназа жуков также играет роль в эндогенном метаболизме секвестрированных глюкозинолатов. Точно так же летучие продукты гидролиза, полученные из секвестрированных глюкозинолатов, также были обнаружены в свободном пространстве полосатой блошки, Phyllotreta striolata , что привело к первоначальному открытию системы защиты глюкозинолат-мирозиназы у блох Phyllotreta (Beran, 2011). ; Beran et al., 2014). Изучить роль мирозиназы жука в метаболизме и защите глюкозинолатов у P.armoraciae , в настоящее время мы проводим эксперименты с использованием жуков с подавленной активностью мирозиназы.

Заключение

Защитные растительные β-глюкозидазы представляют собой главную мишень адаптации травоядных к растениям, оснащенным двухкомпонентной химической защитой. Наше исследование демонстрирует, что специализированное травоядное животное P. armoraciae переносит гидролиз фракции проглоченных глюкозинолатов и способно быстро абсорбировать глюкозинолаты через кишечник. Более того, мы приводим доказательства того, что P.armoraciae может инактивировать мирозиназы растений в кишечнике. Способность переносить активность мирозиназы растений может быть важной предпосылкой для разработки механизмов, обеспечивающих секвестрацию глюкозинолатов.

Заявление о доступности данных

Исходные данные этого исследования доступны в репозитории данных открытого доступа Общества Макса Планка (Эдмонд) по адресу doi: 10.17617 / 3.5b.

Авторские взносы

TS, JK и FB разработали эксперименты и написали рукопись.TS, JK, YH и FB проводили эксперименты. TS, JK, MR, NW и FB проанализировали данные. SG-J выполнила биоинформатический анализ. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Этот проект поддержан Обществом Макса Планка и Международной школой исследований Макса Планка.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим команду теплиц Института химической экологии Макса Планка, занимающуюся выращиванием растений, Сюзанну Доннерхак, Александра Шиллинга, Фабиана Зейтца и Леопольда Вольспергера за помощь в выращивании и экспериментах, Грита Кунерта за помощь со статистическим анализом, Даниэля Вейта и Команде семинара по технической поддержке, Кэролайн Мюллер и Хельге Панкоке (Университет Билефельда) за помощь в измерении pH в кишечнике, Саре Вольф (Agroscope, Швейцария) за предоставление оборудования для анализа бюджета энергии и Феликсу Фейстелю за обсуждения.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2021.645030/full#supplementary-material

Сноски

Список литературы

Абдалсами, М. К., Джампа, М., Нихаус, К., и Мюллер, К. (2014). Быстрое включение глюкозинолатов как стратегия травоядных животных для предотвращения активации мирозиназами. Insect Biochem. Мол. Биол. 52, 115–123. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2014.07.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал, А.А., Курашиге, Н.С. (2003). Роль изотиоцианатов в устойчивости растений к специализированным травоядным Pieris rapae . J. Chem. Ecol. 29, 1403–1415.

Google Scholar

Ан, С.-Дж., Бецин, Ф., Гиконьо, М.В., Янг, З.-Л., Кёлльнер, Т.Г., и Беран, Ф. (2019). Идентификация и эволюция глюкозинолатсульфатаз у специализированных блох. Sci. Реп. 9: 15725.

Google Scholar

Андерссон, Д., Чакрабарти, Р., Беджай, С., Чжан, Дж., Раск, Л., и Мейер, Дж. (2009). Мирозиназы из корня и листьев Arabidopsis thaliana обладают разными каталитическими свойствами. Фитохимия 70, 1345–1354. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2009.07.036

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Барт К. и Джандер Г. (2006). Мирозиназы арабидопсиса TGG1 и TGG2 обладают избыточной функцией в расщеплении глюкозинолатов и защите от насекомых. Плант Дж. 46, 549–562. DOI: 10.1111 / j.1365-313x.2006.02716.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Беран, Ф. (2011). Предпочтения-хозяева и агрегационное поведение полосатой блошки, Phyllotreta Striolata Ph.D. Тезис. Берлин: Университет Гумбольдта.

Google Scholar

Беран, Ф., Кельнер, Т. Г., Гершензон, Дж., И Толль, Д. (2019). Химическая конвергенция между растениями и насекомыми: биосинтетическое происхождение и функции общих вторичных метаболитов. Новый Фитол . 223, 52–67. DOI: 10.1111 / nph.15718

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Beran, F., Pauchet, Y., Kunert, G., Reichelt, M., Wielsch, N., Vogel, H., et al. (2014). Phyllotreta striolata блошиные жуки используют защитные соединения растений-хозяев для создания собственной системы глюкозинолат-мирозиназа. Proc. Natl. Акад. Sci. США 111, 7349–7354. DOI: 10.1073 / pnas.1321781111

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Беран, Ф., Sporer, T., Paetz, C., Ahn, S.-J., Betzin, F., Kunert, G., et al. (2018). Одного пути недостаточно: стеблевая блошка-капуста Psylliodes chrysocephala использует несколько стратегий для преодоления глюкозинолат-мирозиназной защиты в своих растениях-хозяевах. Фронт. Plant Sci. 9: 1754. DOI: 10.3389 / fpls.2018.01754

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бхат Р. и Вьяс Д. (2019). Мирозиназа: понимание структурных, каталитических, регуляторных и экологических взаимодействий. Crit. Rev. Biotechnol. 39, 508–523. DOI: 10.1080 / 07388551.2019.1576024

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Блажевич, И., Монтау, С., Бурчул, Ф., Олсен, К. Э., Буров, М., Роллин, П. и др. (2020). Структурное разнообразие глюкозинолатов, идентификация, химический синтез и метаболизм в растениях. Фитохимия 169: 112100. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2019.112100

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Циска, E., Horbowicz, M., Rogowska, M., Kosson, R., Drabińska, N., and Honke, J. (2017). Оценка сезонных колебаний содержания глюкозинолатов в листьях и корнях четырех староместных сортов хрена европейского ( Armoraica rusticana ). Pol. J. Food Nutr. Sci. 67, 301–308. DOI: 10.1515 / pjfns-2016-0029

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дисчер, С., Бурс, А., Тользин-Банаш, К., Хайнеман, С. Х., Пастилс, Дж. М., и Боланд, В. (2009). Универсальная транспортная сеть для связывания и выделения растительных гликозидов листоедами обеспечивает эволюционную гибкую стратегию защиты. Chembiochem 10, 2223–2229. DOI: 10.1002 / cbic.2006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Foray, V., Pelisson, P.-F., Bel-Venner, M.-C., Desouhant, E., Venner, S., Menu, F., et al. (2012). Справочник по раскрытию полного энергетического баланса насекомых: пересмотр метода ван Генделя (1985). Physiol. Энтомол. 37, 295–302. DOI: 10.1111 / j.1365-3032.2012.00831.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фридрихс, Дж., Швайгер, Р., Гейслер, С., Микс, А., Виттсток, У. и Мюллер, К. (2020). Новый метаболизм глюкозинолатов у личинок листоеда Phaedon cochleariae . Insect Biochem. Мол. Биол. 124: 103431. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2020.103431

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йешке В., Гершензон Дж. И Вассао Д. Г. (2015). «Метаболизм глюкозинолатов и продуктов их гидролиза у насекомых-травоядных» в . Последние достижения в области фитохимии: образование, структура и активность фитохимических веществ. , изд.Р. Джеттер (Cham: Springer International Publishing), 163–194. DOI: 10.1007 / 978-3-319-20397-3_7

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йешке В., Гершензон Дж. И Вассао Д. Г. (2016a). «Глава 8 - Детоксикация глюкозинолатов и продуктов их гидролиза насекомыми», в журнале «Успехи ботанических исследований », , изд. С. Коприва (Кембридж, Массачусетс: Academic Press), 199–245. DOI: 10.1016 / bs.abr.2016.06.003

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йешке, В., Гершензон, Дж., И Вассао, Д. Г. (2016b). Механизм действия изотиоцианатов, полученных из глюкозинолатов: детоксикация снижает уровни глутатиона и цистеина, что влияет на метаболизм белка у Spodoptera littoralis . Insect Biochem. Мол. Биол. 71, 37–48. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2016.02.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йешке В., Кирни Э. Э., Шрамм К., Кунерт Г., Шехов А., Гершензон Дж. И др. (2017).Как глюкозинолаты влияют на личинок чешуекрылых широкого профиля: рост, развитие и метаболизм глюкозинолатов. Фронт. Plant Sci. 8: 1995. DOI: 10.3389 / fpls.2017.01995

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Казана, Э., Поуп, Т. В., Тибблс, Л., Бриджес, М., Пикетт, Дж. А., Бонс, А. М. и др. (2007). Капустная тля: ходячая бомба с горчичным маслом. Proc. R. Soc. Лондон сер. B Biol. Sci. 274, 2271–2277. DOI: 10.1098 / rspb.2007.0237

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Г.-З., Виссерс, Дж. П. К., Сильва, Дж. К., Голик, Д., Горенштейн, М. В., и Героманос, С. Дж. (2009). Поиск в базе данных и учет мультиплексированных спектров ионов-предшественников и продуктов на основе независимого от данных анализа простых и сложных смесей пептидов. Протеомика 9, 1696–1719. DOI: 10.1002 / pmic.200800564

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, X., и Кушад, М. М. (2004). Корреляция содержания глюкозинолатов с активностью мирозиназы в хрене ( Armoracia rusticana ). J. Agric. Food Chem. 52, 6950–6955. DOI: 10.1021 / jf0401827

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Малка О., Шехов А., Райхельт М., Гершензон Дж., Вассао Д. Г. и Морин С. (2016). Десульфатация глюкозинолата насекомым, питающимся флоэмами Bemisia tabci . J. Chem. Ecol. 42, 230–235. DOI: 10.1007 / s10886-016-0675-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Марцинковская, М., и Джелен, Х. Х. (2020). Инактивация тиоглюкозидазы из семян Sinapis alba (белая горчица) солями металлов. Молекулы 25:13.

Google Scholar

Морант, А. В., Йоргенсен, К., Йоргенсен, К., Пакетт, С. М., Санчес-Перес, Р., Мёллер, Б. Л. и др. (2008). β-глюкозидазы как детонаторы химической защиты растений. Фитохимия 69, 1795–1813. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2008.03.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

О’Лири, Н.A., Wright, M. W., Brister, J. R., Ciufo, S., Haddad, D., Mcveigh, R., et al. (2016). База данных эталонных последовательностей (RefSeq) в NCBI: текущий статус, таксономическое расширение и функциональная аннотация. Nucleic Acids Res. 44, D733 – D745.

Google Scholar

Опиц, С. Э. У., и Мюллер, К. (2009). Химия растений и изоляция насекомых. Химиоэкология 19, 117–154. DOI: 10.1007 / s00049-009-0018-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Панкоке, Х., и Доблер, С. (2015). Низкие скорости гидролиза иридоидных гликозидов у двух листоедов Longitarsus с разной специализацией питания придают устойчивость к растениям-хозяевам, содержащим иридоидные гликозиды. Physiol. Энтомол. 40, 18–29. DOI: 10.1111 / phen.12085

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пентцольд С., Загробельный М., Роелсгаард П. С., Мёллер Б. Л. и Бак С. (2014a). Множественные стратегии насекомых-травоядных по преодолению защиты растений от цианогенных глюкозидов. PLoS One 9: e. DOI: 10.1371 / journal.pone.00

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пентцольд, С., Загробельный, М., Рук, Ф., и Бак, С. (2014b). Как насекомые преодолевают двухкомпонентную химическую защиту растений: β-глюкозидазы растений как основная мишень для адаптации травоядных. Biol. Ред. 89, 531–551. DOI: 10.1111 / brv.12066

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Петченко Г., Аграваль А.А. (2016). Как травоядные животные взаимодействуют с защитой растений: естественный отбор, специализация и секвестрация. Curr. Opin. Insect Sci. 14, 17–24. DOI: 10.1016 / j.cois.2015.12.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Прието, Г., Алориа, К., Осинальде, Н., Фуллаондо, А., Арисменди, Дж. М., и Маттиесен, Р. (2012). PAnalyzer: программный инструмент для вывода белков в протеомике дробовика. BMC Bioinformatics 13: 288. DOI: 10.1186 / 1471-2105-13-288

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Роберт К.А.М., Чжан, X., Мачадо, Р.А.Р., Ширмер, С., Лори, М., Матео, П. и др. (2017). Секвестрация и активация токсинов растений защищают западного кукурузного корневого червя от врагов на нескольких трофических уровнях. eLife 6: e29307.

Google Scholar

Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., Frize, E., Kaynig, V., Longair, M., Pietzsch, T., et al. (2012). Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений. Нац. Методы 9, 676–682. DOI: 10,1038 / метр.2019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шрамм К., Вассао Д. Г., Райхельт М., Гершензон Дж. И Виттсток У. (2012). Метаболизм изотиоцианатов, полученных из глюкозинолатов, в конъюгаты глутатиона у травоядных чешуекрылых широкого профиля. Insect Biochem. Мол. Биол. 42, 174–182. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2011.12.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шевченко А., Томас Х., Хавлис Дж., Олсен Дж.В., и Манн, М. (2006). Расщепление в геле для масс-спектрометрической характеристики белков и протеомов. Нац. Protoc. 1, 2856–2860. DOI: 10.1038 / nprot.2006.468

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шикита, М., Фэи, Дж. У., Голден, Т. Р., Хольцкло, В. Д., и Талалай, П. (1999). Необычный случай «неконкурентной активации» аскорбиновой кислотой: очистка и кинетические свойства мирозиназы из проростков Raphanus sativus . Biochem. J. 341, 725–732. DOI: 10.1042 / 0264-6021: 3410725

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сименс, Д. Х., и Митчелл-Олдс, Т. (1996). Глюкозинолаты и травоядные животные (Coleoptera: Chrysomelidae, Lepidoptera: Plutellidae): последствия концентрации и индуцированной резистентности. Environ. Энтомол. 25, 1344–1353. DOI: 10.1093 / ee / 25.6.1344

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сёндерби, И. Э., Хансен, Б.Г., Бьярнхольт, Н., Тиккони, К., Халкиер, Б. А., и Клебенштейн, Д. Дж. (2007). Подход системной биологии идентифицирует подсемейство гена R2R3 MYB с различными и перекрывающимися функциями в регуляции алифатических глюкозинолатов. PLoS One 2: e1322. DOI: 10.1371 / journal.pone.0001322

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Спорер Т., Кёрниг Дж. И Беран Ф. (2020). Онтогенетические различия в химической защите блохек влияют на риск их нападения хищников. Функц. Ecol. 34, 1370–1379. DOI: 10.1111 / 1365-2435.13548

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сунь Р., Цзян X., Райхельт М., Гершензон Дж., Пандит С. С. и Вассао Д. Г. (2019). Тритрофический метаболизм химической защиты растений и его влияние на продуктивность травоядных и хищников. eLife 8: e51029.

Google Scholar

Терра В. Р. и Феррейра К. (1994). Пищеварительные ферменты насекомых: свойства, компартментализация и функции. Сравн. Biochem. Physiol. Часть B Комп. Biochem. 109, 1–62. DOI: 10.1016 / 0305-0491 (94) -4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван Гим, М., Харви, Дж. А., и Голс, Р. (2014). Развитие универсального хищника, Podisus maculiventris , на добыче, изолирующей и не поглощающей глюкозинолаты. Naturwissenschaften 101, 707–714. DOI: 10.1007 / s00114-014-1207-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Vassão, D.G., Wielsch, N., Gomes, A. M. D. M. M., Gebauer-Jung, S., Hupfer, Y., Svatoš, A., et al. (2018). Защитные β-глюкозидазы растений сопротивляются перевариванию и поддерживают активность в кишечнике чешуекрылых травоядных. Фронт. Plant Sci. 9: 1389. DOI: 10.3389 / fpls.2018.01389

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Виттсток, У., Агербирк, Н., Штаубер, Э. Дж., Олсен, К. Э., Хипплер, М., Митчелл-Олдс, Т. и др. (2004). Успешная атака травоядных животных за счет метаболического нарушения химической защиты растений. Proc. Natl. Акад. Sci. США 101, 4859–4864. DOI: 10.1073 / pnas.0308007101

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Виттсток, У., Курцбах, Э., Херфурт, А.-М., и Штаубер, Э. Дж. (2016). «Глава 6 - Распад глюкозинолатов», в Advances in Botanical Research , ed. С. Коприва (Кембридж, Массачусетс: Academic Press), 125–169. DOI: 10.1016 / bs.abr.2016.06.006

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян, З.-Л., Кунерт, Г., Спорер, Т., Кёрниг, Дж., И Беран, Ф. (2020). Изобилие и состав глюкозинолатов в Brassicaceae влияет на секвестрацию у специальных блох. J. Chem. Ecol. 46, 186–197. DOI: 10.1007 / s10886-020-01144-y

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янг, З.-Л., Нур-Элдин, Х. Х., Хеннигер, С., Райхельт, М., Кроколл, К., Зейтц, Ф. и др. (2021 г.). Транспортеры сахара позволяют жукам-листоедам накапливать защитные соединения растений. bioRxiv [Препринт] doi: 10.1101 / 2021.03.03.433712

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжоу, К., Токухиса, Дж. Г., Беван, Д. Р., Эсен, А. (2012). Свойства β-тиоглюкозидгидролаз (TGG1 и TGG2) из ​​листьев Arabidopsis thaliana . Plant Sci. 191–192, 82–92. DOI: 10.1016 / j.plantsci.2012.02.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

американских поваров Откройте для себя горчичное масло

ЛОРЕНС ЭДЕЛЬМАН - не тот повар, который часто заглядывает в Азию в поисках кулинарного вдохновения.

«Я не из тех парней, которые ищут экзотику», - сказал Эдельман, открыв этим летом в Вест-Виллидж свой новый американский ресторан «Левый берег». Но, делая свою горчицу, он нашел заманчивый ингредиент с Востока - горчичное масло. Г-н Эдельман теперь подает это острое янтарное масло с слегка маринованными семенами горчицы на фризе и салате из корнишона с жирным террином из свиной головы.

«В нем есть какой-то лязг», - сказал он. «Это одна из тех вещей, которые, как только вы попробуете, вдруг все не хватит горчичного масла.”

Шелковистое тепло горчичного масла и очищающие пазухи пары будут звонком в колокол для жителей Южной Азии, особенно в Бенгалии на востоке Индии и Бангладеш, где оно приправляет рыбный карри и овощные пюре бхарт. Он также используется в качестве массажного масла, единственное применение, для которого оно официально разрешено в Соединенных Штатах.

Но все больше американских поваров, ищущих новые вкусы, открывают для себя горчичное масло. В то время как бенгальцы в основном используют его для обжаривания, уменьшая его интенсивность, американские повара обычно заканчивают блюда тонкой струйкой острого сырого масла, как это делает Жан-Жорж Вонгерихтен с бланшированной зеленью горчицы в своей новой книге «Домашняя кухня с Жан-Жоржем: Моя Любимые простые рецепты »(Кларксон Поттер).

Горчичное масло - ключевой ингредиент в «уни панини», культовом сэндвиче в тапас-баре «Челси» Алекса Райжа, El Quinto Pino. Играя на японской паре морского ежа и васаби, г-жа Райж смешивает его с маслом, которое намазывает на фицелле и вершины с морским ежом. «В нем есть эти большие пары, но это не та высокая температура, которая сохраняется», - сказала она. «Я думаю, потому что это масло, оно иначе воздействует на язык».

Кен Оринджер сказал, что обнаружил горчичное масло, когда индийский автор кулинарной книги Мадхур Джаффри посетил своим шеф-поваром свой ресторан Clio в Бостоне.Теперь он маринует халапеньо в горчичном масле для солений в индийском стиле и пашот из рыбы в горчичном масле, прежде чем поджарить ее с испанским перцем. «Нет ни одного ингредиента, который мог бы сравниться с ним», - сказал г-н Оринджер. «Это приносит столько аромата».

Немногие американские повара использовали горчичное масло так же широко, как Майкл Ходжкинс, бывший шеф-повар Hung Ry, магазина ручной лапши на Манхэттене. В свое время г-н Ходжкинс использовал горчичное масло в качестве приправы во всем, от простой заправки для салата для бритых яблок и местной зелени до жареного блюда из кальмаров с фенхелем и семенами кориандра, лаймом и медом.

«У него нет такой густой жирной текстуры, которая покрывает ваш рот», - сказал он. «Вы попробуете его, и оно исчезнет».

Корейцы используют горчичное масло в горячих маслах для приправ, а некоторые китайские кухни используют его в холодных заправках. Но самое классическое бенгальское употребление - шорше бата, мощная паста из семян горчицы и масла, которая часто используется для демонстрации деликатесов шадовидной перелетной рыбы илиш. Мохаммед Рахман подает его в Neerob, своем бангладешском ресторане в Бронксе. Хотя многие бенгальцы теперь готовят на других маслах, Mr.Рахман сказал, что традиционные блюда без масла не останутся прежними. «Еще до появления британцев никто не использовал растительное или кукурузное масло», - сказал он. «Когда вы едите это, вам кажется, что вы что-то едите».

До недавнего времени хорошее горчичное масло было так сложно найти в Соединенных Штатах, что приезжающие сюда бенгальцы засовывали банку в свои чемоданы. Однако по мере распространения южноазиатской диаспоры горчичное масло, импортируемое из Индии, Бангладеш и Пакистана, стало легко найти в специализированных магазинах по цене около 5 долларов за литр.

Хотя их обычно можно найти на полках с растительным маслом, а не с массажным маслом, бутылки с чистым горчичным маслом, продаваемые в США, должны иметь предупреждение: «Только для наружного использования». С середины 1990-х годов Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов запретило импорт или продажу чистого горчичного масла в качестве продукта питания. Некоторые горчичные масла содержат от 20 до 40 процентов эруковой кислоты, которая, как показали исследования, может вызвать проблемы с сердцем у лабораторных крыс. Но пресс-секретарь F.D.A. сказал, что до тех пор, пока на бутылках есть предупреждение, агентство не регулирует потребление масла и не может диктовать, как оно будет продаваться в магазинах.Представитель департамента здравоохранения Нью-Йорка заявила, что, если инспекторы ресторана увидят горчичное масло с надписью «только для наружного применения», они могут выбросить его и выдать магазину обвинение в наличии неутвержденной еды, хотя она сказала, что у нее нет никаких записей. любой такой цитируемой публикации.

Несмотря на правила, уровни эруковой кислоты в горчичном масле не обязательно опасны, - сказал Уолтер Уиллет, председатель отдела питания Гарвардской школы общественного здравоохранения. «На самом деле мы не совсем уверены», - сказал г-н.Уиллет написал по электронной почте. «Потенциальные опасности основаны на исследованиях на животных, и, насколько мне известно, у нас нет реальных доказательств причинения вреда людям».

Исследование, опубликованное в Американском журнале клинического питания в 2004 году, показало, что у индейцев, которые ели горчичное масло, было меньше случаев сердечных заболеваний, возможно, из-за его альфа-линоленовой кислоты, жирной кислоты омега-3, которая содержится в растениях. Раманан Лакшминараян, научный сотрудник Принстонского института окружающей среды, сказал, что какие-либо преимущества, как и любые риски, еще предстоит окончательно доказать.Но г-н Лакшминараян сказал, что его не беспокоит безопасность моросящего горчичного масла.

«Я не могу себе представить, что при таком количестве использования он вообще может что-то делать», - сказал он. «Так же, как для серьезной пользы для здоровья потребуется много, но, вероятно, потребуется много для любого вреда».

Светал Патель, вице-президент Raja Foods, импортера масла, сказал, что многие домашние повара из Южной Азии, вероятно, игнорируют предупреждение. «Они используют его со дня своего рождения», - сказал он.Под брендом Swad его компания продает версию, смешанную с растительным маслом, которая не нуждается в предупреждении.

Для некоторых поваров предупреждение является знаком подлинности. Том Валенти, шеф-повар и владелец ресторана Ouest на Манхэттене, обнаружил горчичное масло в международном продуктовом магазине Kalustyan’s. Он игнорировал смешанные масла без предупреждения. «Я решил выбрать тот, который сказал« только для внешнего использования », полагая, что это будет тот, у которого больше всего лошадиных сил», - вспоминает он. Он сказал, что теперь использует смешанное масло в своем лососевом гравлаксе на блинчике из нута, сбрызнутом икрой, пропитанной горчичным маслом.По словам г-на Валенти, покупателям это блюдо нравится. «У меня было несколько слов« Ву, это пряно »со слегка слезящимися глазами», - сказал он. «Но под этими слезящимися глазами всегда есть улыбка».

Как горчичное масло может обратить вспять выпадение волос

Кажется, каждый день мы все слышим о каком-то новом волшебном продукте для волос или масле, которое обещает сильные и блестящие волосы. Но есть большая вероятность, что это едкое масло могло ускользнуть от вас. Горчичное масло, которое иногда называют сарсон ка тел, занимает особое место на каждой индийской кухне, но оно также приносит серьезную пользу для здоровья.И да, это также включает в себя рост и кондиционирование волос. Читайте дальше, чтобы узнать больше о горчичном масле для волос, а также о других преимуществах для кожи.

Что такое горчичное масло?

Горчичное масло - это на самом деле два различных вида масла, которые производятся из семян горчицы. Жирное растительное масло получается при прессовании семян, а эфирное масло - в результате измельчения семян, смешивания их с водой и последующего извлечения эфирного масла.

Это масло является очень популярным растительным маслом во многих частях мира, особенно в Индии, Бангладеш и Пакистане.Оно обладает сильным вкусом, острым ароматом и высокой температурой дыма, что делает его отличным маслом для приготовления овощей и жарки с перемешиванием. К сожалению, масло запрещено использовать в качестве растительного масла в США, Канаде и Европе, но те из нас, кто живет в этих странах, по-прежнему могут воспользоваться его преимуществами для кожи и волос.

Преимущества горчичного масла для кожи

Как упоминалось выше, масло семян горчицы находит множество применений как на кухне, так и на косметической полке. Вот лишь некоторые из преимуществ горчичного масла для кожи:

Масло семян горчицы может помочь уменьшить воспаление и боль.

Это масло оказывает согревающее действие при втирании в кожу и используется в качестве домашнего средства от боли в мышцах. Исследования фактически показали, что масло семян горчицы имеет свойства, аналогичные капсаицину, растительному соединению, известному своими противовоспалительными и болеутоляющими свойствами. Однако вы можете избегать длительного воздействия, поскольку на чувствительной коже были зарегистрированы ожоги.

Это масло лечит трещины на пятках и укрепляет слабые ногти.

Благодаря своим питательным свойствам масло семян горчицы может быть прекрасным средством успокоить сухие ноги зимой.Просто помассируйте пораженные участки на ногах, а затем наденьте хлопковые носки перед сном. Вы также можете использовать масло для смазки ногтевого ложа для быстрого и легкого впитывания. Опять же, обязательно сделайте выборочный тест, чтобы убедиться, что ваша кожа не слишком чувствительна.

Может даже блокировать рост микробов.

Многие исследования показали, что эфирное масло горчицы обладает противомикробными свойствами и может помочь предотвратить рост вредных бактерий. Одно исследование в пробирке показало, что эфирное масло белой горчицы снижает рост различных штаммов бактерий - Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Bacillus cereus, и это лишь некоторые из них.Другое исследование сравнивало антибактериальные эффекты многих различных эфирных масел против патогенных бактерий, и эфирное масло горчицы было наиболее эффективным. Это также может сыграть большую роль в устранении перхоти и зудящих чешуек, но мы рассмотрим это ниже.

Преимущества горчичного масла для волос

Теперь, когда мы рассмотрели лишь несколько важных преимуществ масла горчичных семян для кожи, давайте поговорим о том, как это масло может преобразить ваши волосы и успокоить кожу головы:

  • Горчичное масло - великолепный кондиционер. Альфа-жирные кислоты в этом масле усердно работают, чтобы сохранить волосы увлажненными, здоровыми и кондиционированными. А если вы не знали: здоровые волосы растут быстрее.
  • Может использоваться для устранения перхоти. Мы уже рассмотрели противогрибковые свойства масла семян горчицы, и оказалось, что оно может творить чудеса с вашей кожей головы.
  • Масло семян горчицы - это супервитамин для ваших волос. Витамины, антиоксиданты и минералы (железо, кальций, магний, витамины A, D, E и K) жизненно важны для роста волос.А если этого оказалось недостаточно, в нем также есть цинк, бета-каротин и селен, которые способствуют еще большему росту волос.
  • Это масло улучшает кровообращение. У тусклых безжизненных волос нет шансов против горчичного масла. Просто добавьте немного средства на кожу головы и помассируйте несколько минут, чтобы улучшить кровообращение.

Подходит ли это масло для определенных типов волос?

Применительно к этому конкретному маслу важно помнить, что горчичное масло можно использовать для всех типов волос, но не для всех типов кожи.Он содержит эруковую кислоту и аллилтиоцианат, которые могут раздражать чувствительную кожу. Обязательно проведите патч-тест, чтобы убедиться, что ваша кожа может с этим справиться. Вы также можете смешать масло с нежным маслом-носителем (касторовым, оливковым и т. Д.), Чтобы минимизировать риск раздражения.

Лучшие способы нанесения горчичного масла на волосы

Проще говоря: нет никаких подтверждений того, как лучше всего использовать это масло. Но вы можете поэкспериментировать со следующими методами:

  • Quick Oiling: Возьмите примерно чайную ложку и помассируйте кожу головы за несколько минут до мытья шампунем.
  • Deep Conditioning Treatment: Возьмите примерно чайную ложку масла, нанесите ее на кожу головы, а затем наденьте шапочку для душа на волосы. Посидите около 30 минут, чтобы тепло из-под шапочки для душа помогло процессу кондиционирования. Вы можете комбинировать его с нежным маслом, например кокосовым, чтобы минимизировать риск раздражения.

Вы можете использовать любой из этих методов еженедельно или ежемесячно.

Выпадение небольшого количества волос является нормальным явлением, особенно при смене сезонов и смене гормонов.Однако, если вы боретесь с выпадением волос выше среднего, и ваш врач исключил проблемы со здоровьем, вы можете взглянуть на свои средства по уходу за волосами. Может ли шампунь вызвать выпадение волос?

Тебе понравилась эта статья? Зарегистрируйтесь (это бесплатно!), И мы будем присылать вам такие отличные статьи каждую неделю. Подпишитесь бесплатно здесь.
.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *