Как развести басму для окрашивания: Как разводить басму :: JustLady.ru

Большинство женщин охотно используют порошок хны в сочетании с другими средствами биотатуажа, а также для украшения тела узорами мехенди.

Особенности использования хны для окрашивания

При увеличении концентрации хны цвет ресниц будет насыщенно-темным, при жидком разведении пудры вы получите более светлый оттенок.

Со временем волосы привыкают к натуральным красящим компонентам и их цвет может измениться.Эффект от окрашивания ресниц хной обычно сохраняется в течение 3-4 недель. Самодельное окрашивание ресниц начинается с выбора средств. Оригинальный порошок индийской хны часто бывает дорогим. Но не стоит экономить на покупке – от этого зависит результат.

Что понадобится для домашнего окрашивания:

– порошок хны;
– посуда для смешивания;
– кисточка;
– перчатки;
– сок лимона;
– сливки любые жирные;
– ватные диски;
– щетка;

– салфетки или полотенце.

Осторожно! При контакте хны с металлом она может окрасить волоски в зеленый цвет и повредить их структуру!

Можно ли покрасить дома

Хна для бровей красить ресницы нужно с осторожностью. Для безопасности процесса покраски в домашних условиях проведите тест на аллергию и убедитесь в отсутствии побочных эффектов для организма. Для этого нанести смесь порошка хны и лимонного сока на кожу локтя и через 20 минут смыть.Если реакции в виде покраснения или высыпания нет, можно переходить к окрашиванию.

Пошаговая инструкция окрашивания ресниц басмой и хной

Как часто можно проводить окрашивание?

Чтобы красивые волосы радовали дольше, перед сном нанесите на них масло – касторовое, кокосовое или оливковое. Не смывает краску, но отлично увлажняет кожу и активизирует рост ресниц.

Противопоказания и меры предосторожности

Фото и отзывы доказывают, что хна – отличный краситель. Это натуральное средство оттеняет волосы, укрепляет и лечит их. Зная, как правильно красить брови и ресницы хной в домашних условиях, можно не только привести себя в порядок, но и сэкономить на посещении визажиста.

Телоциты рыб и их связь с клетками стерженьков у рубиново-красно-плавниковой акулы (радужной акулы) Epalzeorhynchos frenatum (Teleostei: Cyprinidae)

Sci Rep.2020; 10: 18907.

Ханан Х. Абд-Эльхафиз

¹ Кафедра анатомии, эмбриологии и гистологии, факультет ветеринарной медицины, Асьютский университет , Асьют, 71526 Египет

Валид Абдо

² Кафедра патологии, Факультет ветеринарной медицины, Университет Кафрелшейх, Кафр-эль-Шейх, 33516 Египет

Басма Мохамед Камаль

³ Кафедра анатомии и эмбриологии, Факультет Ветеринарная медицина, Университет Садат-Сити, Садат-Сити, 32897 Египет

Соха А.Солиман

⁴ Кафедра гистологии, Факультет ветеринарной медицины, Университет Саут-Вэлли, Кена, 83523 Египет

¹ Кафедра анатомии, эмбриологии и гистологии, Факультет ветеринарной медицины, Ассютский университет, Асьют, 71526 Египет

² Кафедра патологии, факультет ветеринарной медицины, Университет Кафрельшейха, Кафр-эль-Шейх, 33516 Египет

³ Кафедра анатомии и эмбриологии, факультет ветеринарной медицины, Университет города Садат, город Садат, 32897 Египет

⁴ Кафедра гистологии, факультет ветеринарной медицины, Университет Саут-Вэлли, Кена, 83523 Египет

Поступило 29.03.2020 г .; Принято 19 октября 2020 г.

Abstract

Телоциты составляют основные составляющие поддерживающего интерстициального каркаса в различных органах.Они образуют трехмерную сеть между различными типами стромальных и нестромальных клеток, что делает их особенно жизненно важными. Ранее мы исследовали происхождение своеобразных стержневых клеток, особенно на их дифференциальных стадиях у водных видов. Настоящее исследование направлено на выявление связи телоцитов с разными стадиями родлеток. Образцы рыб, органов обоняния и жабр были обработаны для получения полутонких срезов, просвечивающей электронной микроскопии и иммуногистохимии. В исследовании было очевидно, что телоциты образуют трехмерную интерстициальную сеть, захватывая стволовые клетки и дифференцируя стержневые клетки, чтобы установить прямой контакт со стволовыми клетками.Дифференцированные стволовые клетки и клетки-предшественники палочек, практически на гранулярной и переходной стадиях, также образуют модификации соединений ультраструктуры, с помощью которых формируются наноструктуры для установления контакта клеток с телоцитами. Телоциты, в свою очередь, также связаны с клетками-предшественниками макрофагов. Телоциты (TC) экспрессировали CD34, CD117, VEGF и MMP-9. В заключение, телоциты установили прямой контакт со стволовыми и стержневыми клетками на различных дифференциальных стадиях. Телоциты могут жизненно влиять на дифференцировку стволовых клеток и клеток-предшественников, регулировать функцию стержневых клеток и экспрессировать MPP-9, который может регулировать функции иммунных клеток, в частности, способность к перемещению и миграции.

Тематические термины: Клеточная биология, иммунология, стволовые клетки

Введение

Телоциты считаются жизненно важным компонентом стромального каркаса различных органов. Их морфологические критерии позволяют общаться с разными типами стромальных и нестромальных клеток. Они состоят из клеточных тел, из которых возникают несколько продолжений клеток, которые называются телоподами, которые позже образуют трехмерную сетевую структуру лабиринта, которая широко распространяется между клеточными и неклеточными элементами.Телоподы имеют чередующиеся тонкие сегменты, называемые подомерами, и интервальные расширения, называемые подомами, которые широко встречаются в митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме и кавеолах ¹ .

Телоциты выполняют основную функцию воздействия на другие клетки посредством установления клеточного контакта или паракринной передачи сигналов. Этот клеточный контакт включает как гомоклеточные, так и гетероклеточные формы контакта. Было обнаружено, что между телоцитами и другими клетками заметны различные формы этих гетероклеточных контактов, такие как мельчайшие контакты, точечные контакты, плоские контакты наноконтактов и паракринные контакты ² .Описаны различные формы клеточного контакта, такие как прямое соприкосновение клеточной мембраны соседних телоцитов, адгезия (минимумы прилипающих точек, адгезивы отростков и адгезивы рук) и щелевое соединение. Последняя форма щелевого соединения имеет значение при передаче сигнала между ячейками ^{2 , 3} . Телоциты переносят микровезикулы и макромолекулы, такие как белки или РНК, и микроРНК к клеткам-реципиентам. Более того, они секретируют различные типы внеклеточных везикул, включая экзосомы, эктосомы и мультивезикулярные везикулы ^{1 , 4 , 5} .

Одна из самых важных ролей телоцитов, помимо обеспечения структурной основы, заключается в организации функциональной поддержки тканей и органов. Телоциты естественным образом вызывают сокращение мышц под действием нервных импульсов ^{6 – 9} . Было обнаружено, что телоциты обладают рецепторами как возбуждающих, так и тормозных нейротрансмиттеров ¹⁰ . Также было обнаружено, что телоциты считаются механорецепторами и могут фактически способствовать фибрилляции предсердий ¹¹ .Широкое функциональное значение телоцитов было классифицировано с точки зрения того, какие гены они экспрессируют. В ряде исследований было обнаружено, что телоциты и их функции в значительной степени способствуют передаче клеточных сигналов ^{12 , 13} ; гомеостаз тканей, ремоделирование ¹³ ; и ремонт ¹⁴ ; расширение и перемещение ячеек ¹² ; ангиогенез ¹³ ; эмбриогенез ¹⁵ ; морфогенез ¹⁶ ; защита от окислителей и предотвращение старения клеток ¹⁷ ; и подавление воспаления и онкогенеза ¹⁸ .

Клетки Родлета – особые клетки, отмеченные как у свежей, так и у морской рыбы ¹⁹ . Они широко распространены по всему телу рыбы. Они особенно обнаруживаются в органах дыхания; пищеварительная, генитальная, покровная, иммунная, сердечно-сосудистая и скелетная системы; глаз; и брюшной полости ^{20 – 22} . Считается, что стержневые клетки обладают многими функциями, такими как транспортировка ионов, осморегуляция ²³ и сенсорная функция ²⁴ .Интересно, что исследования также согласились с тем, что стержневые клетки играют ключевую роль в иммунной защите рыб, и поэтому их можно рассматривать как тип гранулоцитов ^{25 – 27} . Также следует отметить, что эти клетки обладают секреторной функцией ^{21 , 28} с голокринным режимом секреции ²¹ .

Несколько исследований подтверждают гипотезу о том, что телоциты играют важную роль, особенно в регенерации тканей и органов.Потенциал телоцитов в обновлении тканей был связан с их ролью в скелетных мышцах, коже, сердце, легких, печени, матке, мочевыводящей системе, мозговых оболочках и сосудистом сплетении, а также в глазах ¹⁴ . В предыдущем исследовании было установлено происхождение стержневых клеток и описана их последовательная дифференцировка у рубиновой акулы. Предшественники клеток Родле находятся в обонятельной строме. Для них характерно обширное везикулярное содержимое на везикулярной стадии. Позже они трансформируются в гранулированные стержневые клетки, которые, как было обнаружено, состоят из незрелых гранул стерженьков.В переходных стержневых ячейках образуются маленькие стержневые гранулы с центральной стержневой сердцевиной. Зрелые стержневые клетки тогда состоят из типичных удлиненных стержневых гранул ²¹ .

Настоящее исследование направлено на изучение связи телоцитов со стволовыми клетками, макрофагами и предшественниками стерженьков у рубиновой акулы. Рубиновая акула относится к семейству Cyprinidae , видов рыб, для которых характерна локализация стержневых клеток ^{29 , 30} .Мы использовали различные стандартные гистологические и иммуногистохимические окрашивания и полутонкие срезы для световой микроскопии, сканирующей электронной микроскопии (SEM) и ультратонкие срезы для просвечивающей электронной микроскопии (TEM) для идентификации телоцитов, стволовых клеток, родлеток и клеток-предшественников макрофагов.

Материалы и методы

Этическое одобрение

Комитет по этике Университета Ассиута и ветеринарные органы провинции Ассиут, Египет, одобрили метод работы.«Все методы были выполнены в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами».

Коллекция образцов

Рыба была приобретена в магазине декоративных украшений в городе Асьют, Египет. Всю рыбу анестезировали бензокаином (4 мг / л). Стандартная длина тела рыбы составляла от 10 до 12 см. Образцы были взяты у практически здоровых рыб; рубиново-красно-плавниковая акула, (радужная акула), Epalzeorhynchos frenatum (Teleostei: Cyprinidae). Для исследования под световым микроскопом использовали четыре образца.Отдельно три образца использовали для заливки в нормальный парафин и иммуногистохимического исследования, а один образец перед заливкой в ​​парафин осмифицировали с использованием четырехокиси осмия. Еще два образца были использованы для исследования на сканирующем электронном микроскопе, а еще два были обработаны для получения полутонких срезов.

Фиксация и обработка образцов

Исследование под световым микроскопом

Всю рыбу погружают в смесь 20 мл 2,5% глутарового альдегида и 80 мл 0,1 М Na-фосфатного буфера (pH 7.2–7.4). Образцы обрабатывали в соответствии с Абдельхафизом и Солиманом ³¹ следующим образом: промытые образцы сразу после иссечения фиксировали в жидкости Буэна в течение 2 часов. Для избавления от фиксатора перед последующей обработкой фиксированные образцы тщательно промывали 70% этанолом (3 × 24 ч). Затем образцы очищали метилбензоатом и заливали парафином на 8 часов. Последовательные поперечные и продольные срезы разрезали на 5 мкм с использованием микротома Richert-Leica RM2125, Германия.Для общего гистологического исследования репрезентативные срезы парафина окрашивали гематоксилином и эозином сатином ³² .

Гистохимическое исследование

Следующие гистохимические окрашивания были использованы для определения аффинности окрашивания телоцитов: трихром в соответствии с Crossomon ³³ и тройной трихромный краситель Мэллори ³⁴ , комбинированный альциановый синий pH 2,5 периодическая кислота Шиффа ( AB pH 2,5 / PAS) ³⁵ , сафранин O ³⁶ .Другими использованными гистохимическими красителями были контрастные красители Wiegert ³⁷ и Van Gieson ³⁸ , метод нитрата серебра Гримелиуса ³⁶ и железо Heidenhain Hx ³⁹ . Протоколы всех окрашиваний приведены в ³⁶ . Полученные окрашенные слайды исследовали с помощью микроскопа Leitz Dialux 20, снабженного цифровой камерой Canon (Power shot A95).

Парафин тетроксида осмия Процедура для жира

Собранные жабры помещали в четырехокись осмия после фиксации в 10% нейтральном буферном формалине (NBF) для демонстрации жира методом, позволяющим залить парафином ткани ⁴⁰ .

Осмикацию образцов проводили с использованием следующих реагентов: 1% раствор четырехокиси осмия; четырехокись осмия и дистиллированная вода и 0,5% раствор периодической кислоты; и периодная кислота и дистиллированная вода. Процедуру начинают с обрезки фиксированной в формалине ткани до толщины 2 мм, затем тщательно промывают ткань в течение не менее 30 минут. Затем ткань хорошо промывают в дистиллированной воде и выдерживают в небольшом количестве раствора четырехокиси осмия не менее 1-2 часов. Слайды снова дважды промывают дистиллированной водой в течение 15 мин.Предметные стекла дифференцируют, помещая их в 0,5% раствор периодной кислоты на 30 минут с последующей промывкой в ​​водопроводной воде в течение 30 минут. Затем осмифицированные образцы обрабатывают для изготовления парафиновых блоков. Обычная обработка образцов тканей начиналась с обезвоживания в спиртах, очистки, а затем встраивания, как обычно. Срезы толщиной от четырех до пяти микрон, приготовленные из парафиновых блоков, затем собирали на предметные стекла, сушили и депарафинизировали и гидратировали, как обычно. Срезы контрастировали с использованием окрашивания гематоксилином, обезвоживали, очищали и помещали на предметные стекла.

Суданский черный B на парафиновом участке

Суданский черный B (2–3 г) растворяли в 100 мл 70% -ного теплого спирта. Пятно выдерживают при 60 ° C на 3–4 часа, затем оставляют охлаждаться и фильтруют. На депарафинизированные срезы в течение ночи наносили краситель судановой черной краской; затем срезы промывали DW, закрепляя глицериновым желе. Раствор готовили из 15 г желатина, растворенного в 100 мл 0,2 М фосфатного буфера (pH 7) при умеренном нагревании; затем к смеси добавляют 100 мл глицерина.

Акридиновый оранжевый (флуоресцентное пятно)

Процедуру выполняли в соответствии с процедурами, используемыми Hoff et al. модифицировано в ^{42 – 47} .

Акридиновый апельсин – катионный краситель, окрашивающий белковые мембранные везикулы, включая секреторные везикулы, мембранные кислотные компартменты, а лизосомы имеют кислую природу. Соединение проявляет метахроматическую реакцию, которая связана с выделением зеленой и красной флуоресценции.Акридиновый оранжевый вступает в реакцию с везикулами, связанными с мембраной, в результате чего они приобретают оранжевый или красный цвет. Акридиновый оранжевый используется для идентификации секреторных пузырьков и лизосом ^{48 – 50} .

Иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание матриксной металлопротеиназы-9 (MPP-9)

Мы использовали мышиные антикроличьи антитела против матриксной металлопротеиназы-9 (MPP-9). Иммуногистохимическое окрашивание проводили на парафиновых срезах целого среза рыбы после выбора срезов, содержащих жабры, обонятельную розетку, с использованием предметных стекол Super Frost plus.Локализация антигена была достигнута с использованием мышиных антикроличьих антител против матриксной металлопротеиназы-9 (MPP-9) в сочетании с методом авидин-биотинового комплекса (ABC) ⁵¹ с использованием реагента системы обнаружения Ultra Vision (Anti-Polyvalent, HRP / DAB готов к использованию, Thermo Fisher Scientific TP-015HD) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, процедуры были выполнены следующим образом: ^{21 , 52} : парафиновые срезы толщиной 5 мкм депарафинизировали ксилолом, регидратировали спиртом возрастающих сортов и промывали PBS pH 7.4 (3 раза по 5 мин). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы помещали в блоки перекиси водорода при комнатной температуре. После этого срезы промывали проточной водопроводной водой в течение дополнительных 10 мин. Для улучшения извлечения антигена слайды обрабатывали 10 мМ натрийцитратным буфером (pH 6,0) (таблица) при 95–98 ° C на водяной бане в течение 20 мин; затем предметные стекла охлаждали в течение 20 минут при комнатной температуре и затем промывали PBS (pH 7,4, 3 раза по 5 минут).Блокирование неспецифического фонового окрашивания проводили с использованием блока ultra V в течение 5 мин при комнатной температуре. Применение блока Ultra V не превышало 10 минут, чтобы избежать артефакта окрашивания. Первичное антитело (таблица) наносили на срезы в течение ночи при 4 ° C. Мышиные антитела против кролика, первичные антитела, используемые против матриксной металлопротеиназы-9 (MPP-9; RB-9423-PO, Thermo Fisher Scientific, Великобритания; Lab Vision Corporation; в разведении 1:25 в PBS), наносили на срез в течение ночи при 4 ° С; затем срезы промывали PBS (pH 7.4, 3 раза по 5 мин). Биотинилированное вторичное антитело (козье анти-поливалентное, против мышиного IgG + анти-кроличий IgG; Thermo Fisher Scientific, Великобритания; Lab Vision Corporation; таблица) наносили на срезы на 10 мин при комнатной температуре. Затем срезы промывали PBS (pH 7,4, 3 раза по 5 мин) и затем инкубировали с комплексом стрептавидин-пероксидаза (Thermo Fisher Scientific, Великобритания; Lab Vision Corporation, США) в течение 10 минут при комнатной температуре. Визуализацию связанных антител проводили, используя 1 каплю DAB плюс хромоген на 2 мл DAB плюс субстрат.Смесь наносили и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 мин. Инкубационные процессы проводили во влажной камере. Гематоксилин Харриса использовали в качестве контрастных красителей в течение 30 с. Срезы обезвоживали с использованием этанола и изопропанола I и II, очищали в ксилоле и покрывали DPX. Иммуногистохимическое окрашивание исследовали с помощью микроскопа Leitz Dialux 20, снабженного цифровой камерой canon (Power shot A95).

Таблица 1

Компоненты фиксатора.

Таблица 2

Идентичность, источники и рабочее разведение антител, используемых в иммуногисто-исследованиях

Иммуногистохимические процедуры для VEGF, CD34 и CD117

Использовался двухэтапный метод иммуногистохимического окрашивания с использованием системы DAKO EN Vision TM +, пероксидазы HRP ⁵³ .

Процедура окрашивания проводилась согласно Abdo et al. ⁵⁴ . Вкратце, срезы, залитые парафином толщиной 5 мкм, депарафинизировали, регидратировали и промывали в PBS pH 7,4 (3 раза по 5 мин). Эндогенную пероксидазу подавляли добавлением капель 3% перекиси водорода в метаноле при комнатной температуре в течение 20 минут с последующей интенсивной промывкой под проточной водопроводной водой в течение дополнительных 10 минут. Для извлечения антигена предметные стекла помещали в 10-миллиметровый натрий-цитратный буфер (pH 6,0) (таблица) и нагревали до 95–98 ° C на водяной бане в течение 20 минут с последующим охлаждением в течение 20 минут при комнатной температуре.Затем срезы промывали PBS (pH 7,4, 3 раза по 5 мин). Срезы покрывали каплями блокирующей сыворотки (DAKO), чтобы покрыть срезы в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы заблокировать неспецифическое фоновое окрашивание (примечание: применение блокирования не должно превышать 10 минут, иначе может произойти уменьшение желаемого пятна). Затем срезы инкубировали с первичным антителом (таблица, идентичность, источники и рабочее разведение антител, используемых в иммуногистохимических исследованиях). После инкубации предметные стекла промывали PBS (pH 7.4, 3 раза по 5 мин) с последующей инкубацией в течение 30 мин при комнатной температуре со вторичным антителом при комнатной температуре. После этого предметные стекла промывали в PBS (pH 7,4, 3 раза по 5 мин) с последующей инкубацией в течение 5–10 минут при комнатной температуре с 3,3′-диаминобензидином (DAB) + субстрат-хромоген, в результате чего образовывался осадок коричневого цвета. на сайте антигена. Срезы контрастировали гематоксилином Харриса в течение 30 с. Срезы обезвоживали с использованием 90% этанола и 100% спирта II, очищали в ксилоле и покрывали DPX.Иммуногистохимическое окрашивание исследовали с помощью микроскопа Leitz Dialux20, поставляемого с цифровой камерой Canon (PowerShot A95).

Отрицательный контроль выполняли с использованием той же процедуры без использования первичных антител.

Электронно-микроскопическое исследование

Две части обонятельного органа и жабр были осторожно иссечены и зафиксированы в фиксаторе Карновского ⁵⁵ (10 мл параформальдегида 25%, 10 мл глутаральдегида 50%, 50 мл фосфатного буфера и 30 мл DW, Таблица) для сканирующей электронной микроскопии и просвечивающей электронной микроскопии.

Приготовление образцов заливки смолой для полутонких и ультратонких срезов

Для получения полутонких срезов использовали небольшие образцы из жабр. Небольшие кусочки длиной 2,0–3,0 мм фиксировали в фиксаторе Карновского ⁵⁵ при 4 ° С в течение ночи. Они обрабатывались согласно описанию ^{21 , 56} . Образцы промывали 4 раза по 15 мин в 0,1 М натрий-фосфатном буфере (pH 7,2). Затем образцы подвергали последующей фиксации с использованием 1% осмиевой кислоты в растворе 0.1 М Na-фосфатный буфер при 4 ° C в течение 2 ч, затем промывали 3 раза по 20 мин 0,1 М фосфатным буфером (pH 7,2). Дегидратация с помощью градуированного этанола до оксида пропилена была следующей: образцы дегидратировали в этаноле с возрастающей степенью очистки 50% в течение 30 минут, 70% в течение ночи, 90% в течение 30 минут, 100% I в течение 30 минут и 100% II в течение 60 минут. Заливку в смолу проводили с использованием оксида пропилена (Merck, Дармштадт, Германия) в течение 30 мин, эпона: оксида пропилена (1: 1) (около 30 мин), затем в эпоне (3 ч). Epon получали путем смешивания 5 мл Epon812 (Polysciences, Eppelheim, Германия) с 5 мл аралдита и 12 мл DDSA.Образцы заливали в эпон и инкубировали при 60 ° C. После этого образцы полимеризовали с использованием смеси epon и ускорителя (DMP30) (1,5%). Блоки инкубировали в течение 3 дней следующим образом: 60 ° C в первый день, 70 ° C во второй день и 75 ° C в третий день. Полутонкие срезы (1 мкм) вырезали на ультрамикротоме Ultracut E (Reichert-Leica, Германия) и окрашивали толуидиновым синим ⁵⁷ .

Ультратонкие срезы получали из полутонких срезов жабр с помощью ультрамикротома Reichert.Срезы (70 нм) окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца ⁵⁸ и исследовали с помощью просвечивающего электронного микроскопа JEOL100CX II в отделении электронной микроскопии Университета Ассиута.

Подготовка образцов для исследования с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM)

Образцы SEM были приготовлены в соответствии с ²¹ . Обонятельные розетки и жабры вырезали из головы, промывали 0,1 М Na-фосфатным буфером, а затем фиксировали фиксатором Карновского в течение 4 часов при 4 ° C.Образцы промывали до и после фиксации в 1% растворе осмиевой кислоты, разбавленной 0,1 М Na-фосфатным буфером, в течение 2 ч при комнатной температуре. Образцы обезвоживали 50%, 70% и 90% спиртом в течение 30 минут при каждой концентрации и 100% в течение 2 дней, а затем обрабатывали изоамилацетатом в течение 2 дней. Сушка образца была завершена с использованием метода сушки критической точки с использованием поляронного аппарата. Для золотого покрытия образцов использовалась установка ионного распыления JEOL-1100 e. Затем образцы исследовали с помощью сканирующего электронного микроскопа JEOL (JSM_5400 LV) при KV10.

Цифровая окраска изображений с помощью сканирующего электронного микроскопа

Мы раскрасили в цифровом виде изображения, полученные с помощью просвечивающего электронного микроскопа, с помощью программы Photo Filter 6.3.2 для распознавания различных типов клеток и структур. Методы использовали ^{21 , 31 , 59 – 70} .

Цветовая сегментация CMEIAS: (для дополнительных изображений)

Негативные изображения, выполненные с использованием CMEIAS Color Segmentation – это бесплатная улучшенная вычислительная технология, используемая для обработки цветных изображений путем сегментирования интересующего объекта переднего плана от фона ⁷¹ .Это было сделано с помощью следующих шагов: откройте изображение с помощью CMEIAS Color Segmentation, затем выберите «Обработать» из пунктов меню и затем выберите «Негативное изображение» ^{63 , 65 , 72} .

Результаты

В текущем исследовании изучалась локализация телоцитов у красноплавниковой акулы и их связь со стволовыми клетками и стержневыми клетками на разных стадиях развития.

Результаты световой микроскопии

Общее и гистохимическое окрашивание

Телоциты идентифицировали по их телодам с помощью светового микроскопа.Они были расположены в дермальной ткани (Рис. A), слизистой оболочке кишечника (Рис. B), головной области (Рис. C) и подслизистой оболочке жаберной дуги (Рис. D). Телоциты образовали трехмерную сеть, которая включает в себя многочисленные стержневые клетки (рис. A, C, D). Наблюдается сродство телоцитов к различным методам гистохимического окрашивания: телоциты окрашены в синий цвет тройным трихромом Мэллори (рис. A – C), зеленым – трихромом Кроссомона (рис. D), коричневым – осмиевой кислотой (рис. A – C), голубоватым – черный – гематоксилином железа (рис. D – F), оранжевый – окрашиванием по Ван Гизону (рис.G, H), красновато-оранжевый – сафранин O (Рис. I), коричневый – нитрат серебра Гримелиуса (Рис. A – C), красный – методом Ван Гизона Вигерта (Рис. D, E), коричневый – Суданский черный (Рис. . F, G), а синий – AB pH 2,5 / PAS (рис. H, I).

Визуализация телоцитов в коже, кишечнике, голове и жаберной дуге красноперой акулы с помощью H&E. Парафиновые срезы кожи ( A ), кишечника ( B ), головы между головной костью ( C ) и жаберной дуги ( D ), окрашенные H&E.( A ) Телоциты (стрелки), расположенные в дерме (d). Телоподы (наконечники стрел) образуют трехмерную сеть в дерме. (Е, эпидермис). Ячейки Родлета (двойные стрелки). ( B ) Телоциты (стрелки), расположенные в собственной пластинке (LP). Телоподы (стрелки) образовывали трехмерную сеть. (EP, кишечный эпителий) Клетки Родле (двойные стрелки). ( C ) Телоциты (стрелки) образовали трехмерную сеть между головными костями (b). Обратите внимание на телоподы (стрелка). Ячейки Родлета (двойные стрелки). ( D ) Телоциты (стрелки), расположенные в подслизистой основе жаберной дуги.Телоподы (стрелки) образовали трехмерную сеть. Обратите внимание на ячейки-родлеты (двойные стрелки). Увеличение: ( A , C ) × 400; ( B , D ) × 1000.

Визуализация телоцитов красноперой акулы с помощью окрашивания трихромом. Парафиновые срезы кожи ( A ) и жаберной дуги ( B – D ), окрашенные тройным трихромом Мэллори ( A – C ) и трихромом Кроссомона ( D ). ( A ) Телоциты (стрелки), расположенные в дерме (d).Обратите внимание на эпидермис (EP) и стержневые клетки (стрелка). ( B ) Телоциты, окрашенные в синий цвет тройным трихромом Мэллори. Телоциты (стрелки) расположены в подслизистой оболочке жаберной дуги. Телоподы (стрелки), образующие трехмерную сеть. Обратите внимание на ячейки Родлета (двойные стрелки). ( C ) Телоциты (стрелки) в непосредственной близости от стержневых клеток (двойные стрелки). Обратите внимание на телоподы (стрелка). ( D ) Телоциты (стрелки), окрашенные в зеленый цвет трихромом Кроссомона, образовали трехмерную сеть в жаберной дуге.Обратите внимание на телоподы (стрелки) и клетки-стержни (двойные стрелки). Увеличение: ( А ) × 400; ( B – D ) × 1000.

Визуализация телоцитов у красноперой акулы с использованием осмиевой кислоты, гематоксилина железа, метода Вейгерта-Ван-Гизона и сафранина О. Парафиновые срезы жаберной дуги ( A – F , H , I ), кожи ( G ), окрашенной осмиевой кислотой ( A – C ), гематоксилином железа ( D – F ), методом Вейгерта Ван Гизона ( G , H ), и сафранин О ( I ).( A – C ) Телоциты, окрашенные в коричневый цвет осмиевой кислотой. Телоциты (стрелки) расположены в подслизистой оболочке жаберной дуги. Телоподы (стрелки) образовывали трехмерную сеть. Обратите внимание на ячейки-родлеты (двойные стрелки). ( D – F ) телоциты (стрелки), расположенные в подслизистой основе жаберной дуги. Телоподы образовали трехмерную сеть. Обратите внимание на ячейки-родлеты (двойные стрелки). Телоциты окрашены гематоксилином железа в голубовато-черный цвет. ( G , H ) Телоциты, окрашенные в красный цвет по методу Weigert Van Gieson.Телоциты (стрелки), расположенные в дерме (г). Телоподы (наконечники стрел) образуют трехмерную сеть в дерме. Обратите внимание на эпидермис (EP). Ячейки Родлета (двойные стрелки). ( I ) Телоциты окрашены в красновато-оранжевый цвет при окраске сафранином О. Телоциты (стрелки) расположены в подслизистой оболочке жаберной дуги. Обратите внимание на ячейки-родлеты (двойные стрелки). Увеличение: ( A , D ) × 400; ( B , C ) и ( E – I ) × 1000.

Визуализация телоцитов красноперой акулы с использованием метода нитрата серебра Гримелиуса, метода Ван Гисона Вигерта, суданский черный B, AB PH 2.5 / ПАС. Парафиновые срезы кожи ( A – G ), подслизистой основы обонятельной розетки ( H , I ), окрашенные методом нитрата серебра Гримелиуса, ( A – C ), Ван Гисона Вигерта метод ( D , E ), Судан черный. B ( F , G) и AB pH 2,5 / PAS. ( H , I ). ( A – C ) Телоциты, окрашенные в коричневый цвет нитратом серебра Гримелиуса, телоциты (стрелки), расположенные в дерме.Телоподы (наконечники стрел) образуют трехмерную сеть в дерме. Обратите внимание на эпидермис (EP), стержневые клетки (двойные стрелки). и эпителий (EP). ( D , E ) телоциты, окрашенные по Ван Гизону в красновато-оранжевый цвет и (стрелки), расположенные в дерме. Телоподы (наконечник стрелки) образовывали трехмерную сеть в дерме. Обратите внимание на эпидермис (EP). Ячейки Родлета (двойные стрелки). ( F , G ) Телоциты, окрашенные в коричневый цвет суданом черным B. ( H , I ) Телоциты (стрелки), расположенные в подслизистой оболочке обонятельной розетки.и окрашены в синий цвет альциановым синим, pH 2,5 / PAS. Телоподы (стрелки) образовывали трехмерную сеть. Обратите внимание на ячейки-родлеты (двойные стрелки). Эпителий (ЭП). Увеличение: ( A ) × 200; ( H ) × 400; ( B – G ) и ( I ) × 1000.

Полутонкая техника

Полутонкие срезы показали наличие телоцитов в органе обоняния (рис. A, B), дерме кожи (рис. C) и жабрах (рис. D). Собственная пластинка органа обоняния была богата телоцитами (рис.А, Б). Телоциты выявили характерные клеточные тела и телоподы (рис. C, D). Они сформировали сеть, которая включает в себя различные стадии дифференциальных ячеек-стерженьков, включая гранулярные стержневые ячейки и переходные стержневые ячейки (рис. A, B).

Телоциты в органе обоняния и жабрах. ( A , B ) Полутонкие срезы в собственной пластинке обонятельного органа, окрашенные толуидиновым синим, показывают телоциты (стрелки) в собственной пластинке, связанные с переходными стержневыми клетками (r, двойные стрелки).Обратите внимание, телоподы (наконечники стрел). ( C , D ) Телоциты (стрелки) и телоподы (наконечники стрелок) сформировали трехмерную сеть. Обратите внимание на стержневые ячейки (двойные стрелки), гранулированные стержневые ячейки (g) и переходные стержневые ячейки (t). Увеличение: ( A – D ) × 1000.

Иммуногистохимическое исследование и окрашивание акридиновым оранжевым (флуоресцентное окрашивание)

Телоциты в собственной пластинке обонятельного органа (рис. A, B) и подслизистой основе жаберной дуги (рис.C, D) проявляли положительную иммунореактивность по отношению к металлопротеиназе MMP-9. Негативные изображения реактивности металлопротеиназ ММП-9 представлены на дополнительном рисунке ¹ . И телоциты (TCs), и клетки-палочки сильно окрашивались антителами против CD34 (рис. A, C). Негативные изображения для иммуноокрашивания CD34 представлены на дополнительном рисунке ² . Используя акридиновый апельсин (АО), TC сформировали трехмерную сеть, окружающую стержневые клетки (рис. B, D). Параллельные рисунки для иммуноокрашивания CD34 и АО были использованы для демонстрации аналогичной точки зрения.

Иммуногистохимическое окрашивание жаберной дуги акулы с использованием ММП-9. Иммуноокрашенные парафиновые срезы для ММП-9. Телоциты (стрелки) экспрессируют ММР-9 в собственной пластинке органа обоняния ( A , B ) и подслизистой оболочке жаберной дуги ( C , D ). Обратите внимание на ячейки стержней (стрелки). Увеличение: ( A , C ) × 400; ( B , D ) × 1000.

Распознавание ТК с использованием CD34 и акридинового апельсина.( A , C ) TC (одиночная стрелка) были соединены с стержневыми ячейками (двойные стрелки). ( B , D ) TC сформировали трехмерную сеть (одиночная стрелка) вокруг ячеек-стержней (двойные стрелки). Увеличение: ( A , C ) × 1000; ( B , D ) × 400.

Иммуноокрашенные CD117 ТК в подслизистой основе жаберной дуги (рис. A – D). Негативные изображения для иммунореактивности CD117 представлены на дополнительном рисунке ³ .Телоциты как в собственной пластинке (рис. A, B), так и в мышцах жаберной дуги (рис. C, D) показали иммуноокрашивание VEGF. Негативные изображения для VEGF представлены на дополнительном рисунке ⁴ . Данные об отрицательном контроле всех маркеров представлены на дополнительных рисунках ⁵ и ⁶ .

Иммуногистохимическое окрашивание жаберной дуги акулы с использованием CD117. Иммуноокрашенные парафиновые срезы на CD117. Телоциты (стрелки) в подслизистой основе жаберной дуги экспрессируют CD117.Обратите внимание на ячейки стержней (стрелки). Увеличение: ( A , C ) × 400; ( B , D ) × 1000.

Иммуногистохимическое окрашивание жаберной дуги акулы с использованием VEGF. ( A , B ) Телоциты (стрелки) экспрессируют VEGF в собственной пластинке. ( C , D ) Телоциты (стрелки) экспрессируют VEGF в подслизистой оболочке жаберной дуги, распределенной между скелетными мышцами. Обратите внимание на ячейки стержней (стрелки). Увеличение: ( А ) × 400; ( B – D ) × 1000.

Электронно-микроскопическое исследование

Просвечивающая электронная микроскопия

По данным ПЭМ, телоциты сформировали трехмерную интерстициальную сеть, охватывающую различные типы клеток, включая стволовые и дифференцирующиеся клетки (рис. A, A – C). Стволовые клетки обладают высоким соотношением ядер / цитоплазмы и наличием митохондрий, а телоциты устанавливают прямой контакт со стволовыми клетками. Дифференцирующие стволовые клетки выявили меньшее ядерное / цитоплазматическое соотношение и удлиненные митохондрии (рис.Б – Г). Кроме того, дифференцирующиеся стволовые клетки и стержневые клетки образуют интересную модификацию ультраструктуры соединений для установления контакта клеток с телоцитами. Установившийся контакт с соседними телоцитами формировался за счет пальцевидного отростка (рис. A – C, E). Более того, телоциты устанавливают прямой контакт с цитоплазматической проекцией гранулярных стержневых клеток. Интересно, что подомы также установили прямой контакт с зернистыми клетками стерженьков (рис. D, E). Телоциты установили оба гомоклеточных контакта (рис.A) и гетероклеточный контакт (рис. B) с переходными стержневыми клетками и клетками-предшественниками макрофагов. Также был замечен пальцеобразный цитоплазматический выступ, внедренный в цитоплазму телоцитов (рис. A).

Связь телоцитов со стволовыми клетками. Цветные ультратонкие срезы в жаберных дугах, показывающие стволовые клетки, различные стадии дифференцировки родлеток. ( A – C ) Дифференцирующиеся стволовые клетки (окрашены в зеленый цвет) имеют меньшее ядерное / цитоплазматическое соотношение и имеют удлиненные митохондрии (m).Обратите внимание, что телоцит установил контакт с пальцеобразным отростком стволовой клетки. (круг). Обратите внимание на наноструктуры (стрелка в C ). Обратите внимание на кровеносные сосуды (bv) и телоподы (Tps). ( D ) Телопод (синий цвет) установил прямой контакт аппозиции (кружок) со стволовыми клетками (зеленый цвет), которые были идентифицированы по высокому ядерному / цитоплазматическому соотношению и имели митохондрии (m). Увеличение: ( A ) × 3600; ( B ) × 10 000; ( C ) × 29000; ( D ) × 19000.

Связь телоцитов с гранулярной стадией стержневых клеток. ( A – D ) телоциты (синий цвет), образующие трехмерную интерстициальную сеть, захватывают дифференцирующиеся стержневые клетки. Обратите внимание на зернистые стержневые клетки (розовый цвет). Подом установил контакт с зернистым стержнем клетки. Телоциты устанавливают прямой контакт (кружок) с цитоплазматической проекцией гранулярных стержневых клеток. Кровеносный сосуд (коричневого цвета). Моноцитарные клетки (бирюзового цвета). ( E ) Пальцевидный цитоплазматический выступ, внедренный в цитоплазму телоцита (кружок).Обратите внимание на митохондрии (m) и подом. Увеличение: ( А ) × 1900; ( B ) × 3600; ( C ) × 4800; ( D ) х 4800; ( E ) × 19000.

Связь телоцитов с переходной стадией стержневой клетки. ( A , B ) телоциты устанавливают гомоклеточный контакт (стрелки) и гетероклеточный контакт (кружок) с переходной стержневой клеткой (фиолетовый цвет, двойная стрелка) и предшественником макрофагов (бирюзовый цвет). Обратите внимание на подом.Увеличение: ( A ) × 4800; ( B ) × 19000.

Исследование с помощью сканирующей электронной микроскопии

Образцы органа обоняния исследовали с помощью SEM (рис. A). Мы идентифицировали типичные телоциты с подомами и подомерами. Телоциты формируют трехмерную сеть вокруг разных стадий стержневых клеток, особенно на гранулярных и переходных стадиях стержневых клеток (Рис. B – F). ТК образуют трехмерную сеть, которая устанавливает контакт с клетками стерженьков в собственной пластинке (рис. G – J) и в подслизистой оболочке (рис.К, Л). TCs имеют расширенные телоподы, чтобы сформировать фенестрированную мембрану в органе обоняния, которая контактирует с палочковидными клетками (Fig. A – D). TCs формируют трехмерную сеть в собственной пластинке, где телоподы расширяются, чтобы сформировать фенестрированную мембрану (Fig. E – L).

Отсканированные образцы органа обоняния. ( A ) общий вид обонятельного органа. Обонятельные пластинки (OL) и собственная пластинка (L). ( B – F ) телоциты (синего цвета) установили контакт с зернистыми стержневыми клетками (бирюзовый цвет) и переходной стадией стерженьков (розового цвета).Обратите внимание, что телоподы образовали трехмерную сеть вокруг стержневых клеток, желтого круга (подомы), подомеров (наконечники стрелок, секреция телоцитов (коричневый цвет). ( G – J ) TC (T) сформировали трехмерную сеть в собственной пластинке оболочки. установили контакт с стержневыми клетками (R). Обратите внимание на подомы (желтый кружок). ( K , L ) TC (T) в подслизистой оболочке жаберной дуги. Они установили контакт с стержневыми клетками (R). Обратите внимание на подомы ( желтый кружок) .Коллагеновые волокна (C). Увеличение на изображениях.

Отсканированные образцы органа обоняния. ( A – D ) Орган обоняния, выстланный эпителием (ep), поддерживаемый соединительной тканью (CT). TCs (T) имели расширенные телоподы с образованием фенестрированной мембраны (F). Обратите внимание на базальную пластинку (bl), подомы (желтый кружок). Ячейки Родле (R). ( E – L ) TC (T) сформировали трехмерную сеть в собственной пластинке. Телоподы расширились, образуя фенестрированную мембрану (F). подомы (желтый кружок), стержневые клетки (R), зернистые стержневые клетки (gr).Увеличение на изображениях.

Связь ОК со стволовыми клетками, стержневыми клетками и макрофагами проиллюстрирована на рис.

Иллюстрация, показывающая взаимосвязь TC и стволовых клеток, стадий развития стержневых клеток и макрофагов. TC (синий), стволовые клетки (фиолетовый), стержневые клетки (бирюзовый) и макрофаги (зеленый).

Обсуждение

В текущем исследовании изучалась корреляция телоцитов с клетками-предшественниками родлеток и другими стадиями дифференциальных родлеток. Мы использовали гистохимическое окрашивание, полутонкие и ультратонкие срезы и SEM для идентификации телоцитов и стержневых клеток.

Сродство телоцитов к различным гистохимическим окрашивателям изучали с использованием тройного трихрома Мэллори, трихрома Кроссомона, осмиевой кислоты, гематоксилина железа, окрашивания по Ван Гизону, сафранина О, серебра, метода Ван Гизона Вигерта, суданского черного и AB / PAS. Телоциты проявляли сильное сродство к осмиевой кислоте и судановому черному B, что может указывать на окрашивание фосфолипидов плазматической мембраны. Предыдущие исследования изучали и обсуждали сродство телоцитов к трихрому Кроссомона, AB / PAS, гематоксилину железа, Ван Гизону, Сафранину О, серебру, Ван Гизону Вигерта ³¹ .Авторами было задокументировано сильное сродство телоцитов к PAS, а не к альциановому синему ³¹ , в отличие от наблюдений текущего исследования. Кажется, что природа углеводных включений различается в зависимости от вида или метаболической активности клеток ⁷³ .

Идентификация ТХ в жаберной дуге акулы подтверждена IHC. CD34-положительные TC располагались в собственной пластинке, подслизистой оболочке и между мышцами жаберной дуги.Они сформировали трехмерную сеть и установили контакт с клетками-стержнями. CD34 является общим маркером TC у млекопитающих ^{63 , 74 – 77} . Недавно CD34-положительные TC были идентифицированы у рыб ⁷⁸ . Однако CD34 является обычным трансмембранным фосфогликопротеином в гемопоэтических стволовых клетках. Более того, он обнаруживается в различных типах клеток-предшественников, включая эпителиальные клетки-предшественники, мышечные сателлитные клетки, кератоциты роговицы, предшественники интерстициальных клеток и предшественники эндотелия сосудов ⁷⁹ .

Точно так же CD117 используется для идентификации ТК у млекопитающих ^{31 , 79} . Белок CD117 представляет собой трансмембранный рецептор фактора роста тирозинкиназы. Ген c-kit кодирует белок CD117. Активация CD117 регулирует широкий спектр биологических процессов, включая апоптоз, дифференцировку клеток, пролиферацию, хемотаксис и клеточную адгезию ⁸⁰ .

ОК в основном располагались вокруг кровеносных сосудов и в основном экспрессировали VEGF.Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) является членом семейства факторов роста тромбоцитов. VEGF играет решающую роль в ангиогенезе ⁸¹ , целостности сосудов ⁸² и проницаемости сосудов ⁸³ . VEGF регулирует адгезию эндотелиального кадгерина (VE-кадгерина) между эндотелиальными клетками. VE-кадгерин играет важную роль в регуляции проницаемости сосудов и трафика лейкоцитов. ^{84 , 85} .Клетки Родле могут играть потенциальную роль в иммунной защите рыб. Эти клетки циркулируют в крови и достигают различных органов ²¹ . Следовательно, мы предположили, что VEGF может регулироваться трансэндотелиальной миграцией стержневых клеток.

Телоциты рыб морфологически соответствовали телоцитам других млекопитающих, видов птиц и земноводных ^{31 , 86} . В текущем исследовании телоциты имели телоподы и подомы. Телоподы образуют гомоклеточные и гетероклеточные контакты.Гетероклеточный контакт был обнаружен со стволовыми клетками, родлетками и клетками-предшественниками макрофагов.

Другая гипотеза была предложена для телоцитов. Экспрессия телоцитов на маркеры, специфичные для стволовых клеток, предполагает, что телоциты являются подклассом недифференцированных мезенхимальных клеток ⁸⁶ . Однако, по оценкам, специфичность паттернов экспрессии генов телоцитов сравнивается со специфичностью мезенхимальных клеток и фибробластов ¹⁶ .Также была выдвинута гипотеза, что альтернативная функция телоцитов заключается в том, что они могут играть важную роль в дифференцировке стволовых клеток. Это предположение основано на закрытой ассоциации между телоцитами и нишами стволовых клеток и клетками-предшественниками в различных органах, включая сердце ⁸⁷ , легкое ⁹⁵ , скелетные мышцы ⁸⁸ , кожу ⁸⁶ , печень ⁸⁹ , сосуды ⁹⁰ .мозговые оболочки и сосудистое сплетение ⁹¹ . Описаны различные способы клеточного взаимодействия между телоцитами и стволовыми клетками. Телоциты обеспечивают сигнальную систему для установления адекватного микросреды ¹⁴ .

В текущем исследовании телоциты представляют собой трехмерную интерстициальную сеть в органе обоняния и жаберной дуге и связаны с различными клетками, стволовыми клетками, родлетами и макрофагами. Они продемонстрировали модификацию соединений ультраструктуры для формирования узлов связи через наноструктуры .

Телоциты установили различные формы клеточного контакта во время дифференцировки стволовых, стержневых клеток и макрофагов. Стволовые клетки имеют высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение и наличие митохондрий. Во время процесса дифференцировки ядерно-цитоплазматическое соотношение уменьшается, а митохондрии удлиняются, что делает возможным больше действий, необходимых для клеточной дифференцировки ^{92 , 93} .

Связь телоцитов с недифференцированными и дифференцированными стволовыми клетками может рассматриваться как свидетельство роли телоцитов в управлении дифференцировкой стволовых клеток.Мы предположили, что телоциты могут обеспечивать адекватные условия для достаточной дифференцировки клеток. Мы также предполагали роль телоцитов в регуляции иммунитета рыб через стержневые клетки. Доказательства связи телоцитов и стволовых клеток показывают многообещающий потенциал в регенерации тканей. Телоциты в скелетных мышцах играют несколько ролей во время восстановления. Они экспрессируют маркер пролиферации Ki67, маркер плюрипотентности Oct4 и маркер пролиферации сосудов VEGF. Таким образом, телоциты могут усиливать пролиферацию клеток и ангиогенез ⁸⁸ .Телоциты участвуют в размножении клеток и подавляют апоптотическую гибель клеток и образование фиброзной ткани ¹⁷ . Телоциты могут участвовать в регенерации печени через взаимодействие с гепатоцитами и стволовыми клетками. Они могут стимулировать образование гепатоцитов и активировать стволовые клетки-предшественники печени после частичной гепатэктомии ⁸⁹ . Более того, телоциты участвуют в гомеостазе тканей на основе функционального нарушения телоцитов в легких, желудке и сердце пациентов с системным склерозом ⁹⁴ .Легочные телоциты обеспечивают особый тип прямой межклеточной коммуникации с предполагаемыми стволовыми клетками. Телоподы образуют мостиковые наноструктуры, соединяющиеся со стволовыми клетками ⁹⁵ . Телоциты могут создавать подходящие условия для дифференцировки предполагаемых стволовых клеток и клеток-предшественников. Они направляют предшественников кардиомиоцитов в ниши эпикардиальных стволовых клеток для дифференцировки ⁹⁶ .

Клетки Родле играют иммунологическую роль против патогенов ⁹⁷ .Они вносят свой вклад в опосредованный клетками неспецифический иммунный ответ посредством голокринной секреции для защиты от патогенов ⁹⁷ . TC образуют прямой контакт с различными типами иммунных клеток, включая лимфоциты, плазматические клетки, эозинофилы, базофилы, макрофаги и тучные клетки ^{5 , 31} у млекопитающих; дендритные клетки; и лимфоциты у рыб ⁷⁸ . TCs-иммунные клетки образуют юкстакриновые участки передачи сигналов от клетки к клетке или химические синапсы.Они также регулируют иммунный ответ через паракринную передачу сигналов. ТК матки играют важную роль в стимуляции перитонеальных макрофагов, которые активируются и получают многочисленные псевдоподии и цитоплазматические секреторные гранулы после совместного культивирования с ОК и высвобождают более высокие уровни цитокинов, таких как TNF-α, IL1-R1 и IL-10. , но не TGF-β1, IL-1β, IL-23α и IL-18. Эти данные выявили возможную роль ТК в механизме иммунорегуляторного и иммунного надзора в ткани ⁸⁰ .Исследование предполагает, что TCs могут играть потенциальную роль в регуляции функции стержневых клеток.

Телоциты проявляли активность металлопротеиназы, включая ММР-9. Металлопротеиназа важна для разрушения матрикса. Деградация ECM необходима для миграции клеток, так что компоненты ECM действуют как физические барьеры, препятствующие движению и инвазии клеток. Клетки Родле и макрофаги считаются удивительными клетками. Похоже, что телоциты экспрессируют MMP-9, чтобы облегчить движение и миграцию иммунных клеток.Более того, металлопротеиназы MMPP-2 и MMP-9 обнаруживаются в телоцитах гонад Diplectrum formosum и Synbranchus marmoratus ⁹⁷ . MMP-2 и MMP-9 участвуют в ремоделировании тканей рыб ⁹⁸ .

В заключение, телоциты играют потенциальную роль в регенерации, которая влияет на стволовые клетки / клетки-предшественники и регуляцию активности палочковых клеток.

Дополнительная информация

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить профессора Хитхэма Мохаммеда, доктора философии, CertAqV, научного сотрудника Департамента биологических наук; Университет Висконсин-Милуоки, США, и служба редактирования EKB для тщательного редактирования на английском языке, что значительно улучшило рукопись.Авторы выражают благодарность техническим сотрудникам отделения электронной микроскопии Университета Ассиута за помощь в обработке образцов сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии в течение 2019 и 2020 годов.

Вклад авторов

Работа была равномерно распределена между авторами; H.H.A., S.A.S., B.M.K., W.A., в том числе разработали исследование, анализ и интерпретацию данных, расположили изображения и написали статью. С.С. нарисовал рис. Все авторы прочитали и одобрили окончательную версию рукописи.

Финансирование

На это исследование не поступало никаких средств.

Доступность данных

Все данные, полученные или проанализированные в ходе этого исследования, включены в эту опубликованную статью и ее файлы с дополнительной информацией.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Сноски

Примечание издателя

Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​принадлежащих организациям.

История изменений

31.05.2021

Было опубликовано исправление к этому документу: 10.1038 / s41598-021-89891-0

Дополнительная информация

доступна по адресу 10.1038 / s41598-020 -75677-3.

Список литературы

28.Э. Абдалла, К., У., М., Эа, Т. и Абд-Эльхафиз, Х. Идентификация стержневых клеток у водных птиц по типу египетского гуся ( Alopochen egyptiacus ): кишечные стержневые клетки. Cytol. Histol. Int. J. 3 (1) (2019).

34. Мэллори, Ф. Б. Метод окрашивания мукоидов и некоторых других веществ в тканях. Пятно. Technol. 10 (1), 11 (1936).

39. Heidenhain, N. M. Noch einmal über dieDarstellung der Zentralkörper durch Eisenhämatoxylin nebst einigen allgemeinen Bemerkungen über die Hämatoxylin Farben. ZWiss Mikrosk 13 , 180 (1896).

57. Бэнкрофт, Дж. Д. и Гэмбл, М. Теория и практика гистологических методов, , 6-е издание (Черчилль Ливингстон, Лондон, 2008).

59.Солиман С. и Эмейш В. Морфологические изменения интраэпителиальных и стромальных телоцитов в ответ на проблемы с засолением. bioRxiv . (1), 115881 (2017).

65. Фатма Эль-Захраа, А. М. и Абд-Эльхафез, Э. А. Гистологические, гистохимические и ультраструктурные характеристики маточных сосудов на ранних сроках беременности. J. Histol. Histopathol. Res. 2 (2), 41–47 (2018).

91.Попеску, Л.М., Николескуи, М.И. Резидентные стволовые клетки и регенеративная терапия, Раздел: Телоциты и стволовые клетки Клетки. (редакторы душ Сантуш Голденберг, Р.С. и де Карвалью, А.К.) 205–231 (Academic Press, Oxford, 2013)

(PDF) Влияние двухшнековой конфигурации на качество диспергирования цветной маточной смеси с высокой концентрацией

Влияние двухшнековой конфигурации на качество дисперсии высокой концентрации

Цветной -Masterbatch

http: // www.iaeme.com/IJMET/index.asp 276 [email protected]

[16] Tobias Villmow, Bernd Kretzschmar, Petra Potschke Влияние конфигурации шнека, времени пребывания

и удельной механической энергии при двухшнековой экструзии

композиты поликапролактон / многослойные углеродные нанотрубки. Composites Science и

Technology S0266-3538 (10) 00290-3 2010

[17] Тэ Ён Хван, Хи Юнг Ким, Ёнджун Ан и Джэ Ук Ли Влияние условий обработки сдвоенной шнековой экструзией

на свойства полипропилена / многослойные

нанокомпозиты из углеродных нанотрубок Korea-Australia Rheology Journal Vol.22, No. 2, June

2010 pp. 141-148

[18] Доменек, Т., Певрель-Дисдье, Э. и Вергнес, Б. «Влияние условий двухшнековой обработки

на структуру и свойства. нанокомпозитов полипропилен – органоглина »,

International Polymer Processing, Vol. 27, No. 5, pp.517–526. (2012)

[19] Доменек, Т., Певрель-Дисдье, Э. и Вергнес, Б. «Важность удельной механической энергии

во время двухшнековой экструзии полипропилена на основе органоглины

нанокомпозитов», Наука и технологии в области композитов , Vol.75, стр.7–14. (2013)

[20] Павляк, А., Моравец, Дж., Пиорковска, Э. и Галески, А. «Полипропиленовые нанокомпозиты

– получение и свойства», Явления твердого тела, Vol. 94, стр.335–338. (2003)

[21] Mattausch, H., Laske, S., uretek, I., Kreith, J., Maier, G. и Holzer, C. ‘Исследование

влияния условий обработки на термический , реологические и механические

Поведение полипропиленовых нанокомпозитов », Polymer Engineering & Science, Vol.53,

№ 5, с. 1001–1010. (2013)

[22] Тарапов, Дж. А., Бернал, К. Р., Альварес, В. А. «Механические свойства

нанокомпозитов полипропилен / глина: влияние содержания глины, совместимости полимера / глины,

и условий обработки», Journal of Applied Polymer Science, Vol. 111, No. 2, pp. 768–

778 (2009)

[23] Сантос, К.С., Либерман, С.А., Овьедо, М.А.С. и Маулер, Р. «Оптимизация механических свойств

нанокомпозитов на основе полипропилена путем добавления комбинации органоглин

», Composites Part A: Applied Science and Manufacturing,

Vol.40, No. 8, pp.1199–1209 (2009)

[24] Бикалес Н. М .: “Компаундирование” Энси. Polym. Sci. Technol. 4 118.

[25] КОЛЛИНС С. Х .: Пласт. Комп. 5 (4) (1982) 29.

[26] Krzysztof Formela, Magdalena Cysewska, Józef Haponiuk1 Влияние конфигурации шнека

и скорости шнека двухшнекового экструдера, вращающегося в одном направлении, на свойства

продуктов, полученных термомеханической регенерацией шлифованной резины шины DOI:

dx.doi.org/10.14314/polimery.2014.170 2014

[27] Delva, L., Van De Keere, T., Alves, R., Ragaert, K., Gaspar-Cunha, A., Cardon, L. и

Degrieck, J. «Экструзия и определение характеристик полипропилена с наноглиной», Advances

in Production Engineering & Management, Vol. 8, No. 2, pp.88–95. (2013)

[28] Тейшейра, К., Фариа, Р., Ковас, Дж. И Гаспар-Кунья, А. (2007) «Моделирование потока и теплопередачи

в двухшнековых экструдерах, вращающихся в одном направлении», 10-я конференция Esaform по формированию материалов

, AIP Publishing.2007

[29] Лоренс Делва и Ким Рагерт. Влияние двухшнековой конфигурации на механические

и морфологические свойства композитов полипропилен – глина Int. J. Materials and

Product Technology, Vol. 52, № 1/2, 2016 г.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Выжившая после ожога татуирует свое лицо, чтобы скрыть шрамы

Женщина, получившая ожоги третьей степени почти на половине лица, произвела революцию в способах маскировки шрамов, ожогов и родинок, сделав их татуировку.

Басма Хамид, 31 год, была сильно обожжена горячим маслом во время ужасного несчастного случая на приготовлении пищи, когда она была малышкой, живущей в Ираке, после чего у нее остались обесцвеченные шрамы на лице и всего одна бровь.

Она переехала в Торонто, где в течение следующих 15 лет ей делали пересадку волос, снимки кожи и лазерные процедуры, которые не помогали. Поэтому, когда врачи сказали ей, что они больше ничего не могут сделать, она начала экспериментировать, нанеся татуировку пигменту на собственное лицо.

Сейчас Басма – сертифицированный специалист по имплантации микропигментов. В клиниках ее процедуры используются для маскировки шрамов, а также для лечения других людей, переживших трагедию.

ПРОКРУТКА ВИДЕО

Басма Хамид, 31 год, сгорела в результате ужасного несчастного случая на приготовлении пищи, когда она была малышкой в ​​Ираке (слева). Сейчас она является сертифицированным специалистом по имплантации микропигментов и руководит собственной клиникой.

Басма изображена до и после татуировки на собственном лице, чтобы скрыть серьезные ожоги, которые она получила, когда ей было два года.

Клиника Басма Хамид покрыла тысячи ожогов. , шрамы, витилиго и даже реконструкция сосков для тех, кто перенес мастэктомию из-за рака груди.

Процедура похожа на татуировку, за исключением двух основных отличий: она использует запатентованную смесь минералов вместо чернил и переходит на средний слой кожи (дерму), который более мелкий, чем жировой слой (гиподерма), через который проникают иглы для татуировки. .

Басма получила ожоги третьей степени на 40 процентах лица, когда ее брат случайно пролил на нее горячее масло во время приготовления пищи

При повреждении кожи в результате пореза, ожога или прокола на ней образуется рубцовая ткань, которая может быть или не быть заметно.

Рубцовая ткань толще нормальной кожи и по мере заживления обычно становится белой из-за разрушенных меланоцитов, из-за которых организм не может производить меланин.

Процесс Basma повторно окрашивает кожу в естественный цвет, чтобы он слился с остальным телом, как минимум за шесть процедур.

«Представьте, что черные стены пытаются покрасить в белый цвет – вам понадобится пара слоев, чтобы изменить цвет», – сказал Басма.

Она работала с химиками, чтобы разработать формулу минерала, прежде чем открыть свою первую клинику десять лет назад в Торонто.

С тех пор Басма открыла еще одну клинику в Лос-Анджелесе и жертвовала не менее 15 процедур в год тем, у кого заниженная самооценка из-за их отметин, включая жертв домашнего насилия и тех, кто родился с большими родинками на лице.

Басма сказала Daily Mail Online, что это произошло из-за ее личной трагедии, в результате которой на половине ее лица остался большой красный шрам, что сделало ее жертвой издевательств.

Пациентка с винным пятном (слева) прошла курс лечения Басмы и, по-видимому, не имеет отметки

Басма использовала свой процесс для повторного пигментации кожи в естественный цвет, чтобы покрыть шрам на лбу одного клиента

В возрасте Во-вторых, Басма получила ожоги третьей степени в результате трагического несчастного случая с приготовлением пищи, когда ее тогдашний семилетний брат споткнулся о ее лицо, пролив горячее масло на ее лицо в их доме в Багдаде, Ирак.

КАК ДЕЙСТВУЕТ ИМПЛАНТАЦИЯ МИКРОПИГМЕНТА

Этот процесс перекрашивает кожу в естественный цвет, чтобы он слился с остальной частью тела, которая была повреждена в результате пореза или ожога, в результате чего образуется обесцвеченная рубцовая ткань.

Процедура аналогична татуировке, за исключением двух основных отличий:

• В технике Басмы вместо чернил используется запатентованная смесь минералов

• Она использует серию процедур и переходит на средний слой (дерму) кожи. вместо глубокого жирового слоя (гиподермы) татуировка достигает

Для получения полного результата требуется минимум шесть сеансов, в зависимости от размера области.

Басма Хамид говорит: «Представьте, что черные стены пытаются покрасить в белый цвет – вам понадобится пара слоев, чтобы изменить цвет».

Врачи смогли спасти ее зрение, но в течение следующих 15 лет она перенесла операции, пытаясь восстановить свое лицо.

Переехав в Торонто, она начала обучение у мастера перманентного макияжа, где научилась правильно татуировать макияж.

Когда ей пришла в голову идея сделать татуировку поверх собственных шрамов, врачи сказали ей, что ткань шрама не удержит чернила.Ее наставник в постоянной косметической студии тоже сомневался и отказался примерить ее.

«Все боялись сделать хуже – мне было нечего терять», – сказала она.

Она начала практиковаться на собственном лице, разбавляя чернила водой и проверяя небольшую область. Басма наблюдала за этой областью каждый день, и как только она увидела, что пигмент сохранился в ее кожной ткани, она сказала, что знала, что это сработает.

Басма продолжала практиковаться на себе в течение двух лет, пока не усовершенствовала процедуру.

Она сказала: «Перманентный макияж не новость, но вместо использования черного и коричневого я подумала:« Почему бы не использовать пигмент цвета кожи »».

Басма поделилась своей процедурой с клиентами, которые ухватились за эту возможность.

Она прошла двухлетнюю программу сертификации по эстетической медицине, чтобы больше узнать о коже и о том, как она заживает.

Тогда 21-летняя девушка открыла собственную клинику и теперь обучает свою команду тому, как правильно проводить лечение.

Одна женщина, 52-летняя Аннетт Уайт, в течение последних трех лет получала пожертвование Басмы, чтобы замаскировать большое родимое пятно от портвейна, закрывающее ее лицо.

После девяти процедур физические изменения были очевидны, но больше всего изменилась самооценка Аннет.

Аннетт Уайт, 52 года, пожертвовала эту процедуру и сказала, что теперь у нее есть смелость встретиться лицом к лицу с миром после того, как лечение покрыло ее винное пятно, которое покрыло почти половину ее лица

Клиентка, перенесшая операцию из-за рака груди, перенесла большой шрам на животе и прошла не менее шести процедур, чтобы скрыть их.

Аннет сказала: «Без ее помощи я бы все еще заперся в своем доме, но с ее помощью у меня теперь есть смелость смотреть в лицо миру.Теперь у меня есть то, чего никогда раньше не было – надежда ».

За десять лет работы клиники тату-салоны узнали о процедуре и рекламировали аналогичные процедуры.

Но Басма предупреждает, что у большинства художников-татуировщиков недостаточно опыта, и они могут создавать проблемы на коже, в том числе еще больше рубцевать.

Это связано с тем, что мастера-татуировщики используют более агрессивные техники, вызывающие просачивание цвета на кожу, что может выглядеть как синяк.

Она рекомендует всем своим клиентам и всем, кто интересуется, проверить реакцию кожи с помощью пластыря, прежде чем идти полностью.

В зависимости от размера зоны, пакеты Basma из шести сеансов стоят от 2 000 до 4 000 долларов США, но могут потребоваться дополнительные сеансы.

Окрашивание бровей хной – Как окрасить брови хной – Все для моды

Брови, пожалуй, самый важный элемент лица. Независимо от того, как меняется мода, их роль остается неизменной. Вот почему женщины так много внимания уделяют бровям. Натуральная косметика может сделать их ярче, не повредив.Один из красок природного происхождения – хна. В последние годы популярностью пользуется метод окрашивания бровей хной.

Как покрасить брови хной – Как окрасить брови хной

Применение хны практически не вызывает побочных эффектов, кроме индивидуальной непереносимости растительного компонента, что бывает редко. В основном компонент считается безопасным и не раздражающим кожу. Хна не способствует выпадению бровей.Получите пользу от сайта. В состав входят натуральные антиоксиданты, которые улучшают микроциркуляцию крови, укрепляют волосы, делают их блестящими и густыми, ускоряют рост бровей, создают защитный слой.

Подготовка к покраске бровей в домашних условиях. Перед тем, как начать процедуру окрашивания бровей, нужно сделать тест на аллергию. Для этого на небольшой участок кожи возле бровей нанесите смесь с хной. Время теста около 40 минут. Если аллергической реакции не обнаружено, можно приступать к процессу.

Процесс окрашивания бровей хной проходит быстро, нужно подготовить все необходимое:

1. Пачка хны. Для бровей лучше всего использовать индийские ножи, это позволяет добиться разнообразной гаммы оттенков.

2. Контейнер для приготовления раствора и ложка для смешивания. Рекомендуется использовать тару из пластика, стекла или полиэтилена (краска легко вступает в реакцию с металлом и керамикой).

3. Можно взять пластиковую ложку для одноразового использования.

4.Кисть для нанесения краски. Лучше брать кисть с твердым коротким ворсом.

5. Ватные палочки или вата. Помогают с исправлением и удалением случайных.

6. лимонная кислота или сок. Чтобы результат был более стойким, нужно создать кислую среду.

7. Крем для обработки поверхности вокруг бровей, чтобы краска не попала на нежелательные участки.

8.Перчатки, фартук. Чтобы защитить руки от окрашивания, желательно использовать одноразовые полиэтиленовые перчатки.Фартук спасет одежду.

Перед тем, как приступить к окрашиванию бровей, уже должна быть определена форма. Наденьте перчатки и фартук. Нанесите жирный слой крема вокруг бровей, чтобы границы оставались правильными. В миску насыпьте пряжу и в равных количествах добавьте лимонный сок. Тщательно перемешать до получения густой массы, напоминающей кислую сметану. Накройте полученную смесь полиэтиленовым пакетом или колпачком и дайте постоять 2 часа. Тогда используйте. Для получения черного цвета бровей возьмите 1 часть хны и 2 части басмы; соотношение 1: 1 даст темно-коричневый цвет;

Бронзовый оттенок бровей получается при разбавлении одной части басмы на одну часть хны.Контур брови прорисовывается белым карандашом. Нанесите на кисть немного смеси и аккуратно нанесите по линии контура. Сначала по концам, затем по линии роста волос и до конца середины. Цвет, выходящий за контур бровей, сразу удаляется ватой. Когда краска будет нанесена, накройте веки небольшими кусочками фольги или целлофана, чтобы дольше сохранялась температура смеси. Это длится от 40 минут до 1,5 часов. Чем больше время выдержки, тем лучше и насыщеннее окраска.Промойте хну ватным тампоном, смоченным в холодной воде, а затем смойте холодной водой. Важно помнить, что нельзя использовать мыло. На брови нанесите питательный крем или витамин А. Если окрашивание неравномерное, процедуру следует повторить, но только в тех местах, которые должны быть более темными.

красителей: Supra для волос

«Супра» для волос – это осветляющая пудра, которую начали использовать для осветления волос еще в 20 веке.В настоящее время препарат считается устаревшим и небезопасным средством для осветления прядей, поэтому специалисты рекомендуют использовать кремообразные краски для волос. Однако иногда для достижения необходимого осветляющего эффекта требуется применение блондактиватора «Супра». Эта пудра обычно используется в таких процедурах:

– мелирование, то есть обесцвечивание отдельных прядей;

– удаление или удаление следов краски на волосах;

– изменение цвета волос перед покраской.

Процедура осветления волос помогает добиться нового, более светлого тона, вплоть до полного обесцвечивания. «Супра» – краска для волос, Это подходящее средство для тех, кто хочет получить (в результате нанесения продукта несколько раз) красивый цвет «блонд». Также это средство поможет исправить неудачный результат окрашивания в темные тона, то есть аккуратно осветлить темные волосы.

Блондирование волос или полное обесцвечивание – это глубочайшее осветление, в результате которого полностью исчезает пигмент волос, становится бесцветным.Поэтому «Супру» для волос можно использовать как средство от обесцвечивания и для предварительной подготовки волос к последующему окрашиванию.

Использование Supra.

Когда волосы осветляются, их структура становится более пористой, ломкой и сухой. Поэтому, чтобы волосы после окрашивания выглядели здоровыми и красивыми, необходимо соблюдать несколько простых правил.

Во-первых: перед осветлением средством «Супра» волосы не нужно мыть, так как смывается защитный жировой слой, а это вредно не только для самих волос, но и для их корней, а также для кожа головы.

Во-вторых, важно правильно оценить необходимое количество порошка «Супра» и перекиси водорода, в которой он разводится.

В-третьих: не переусердствуйте с краской на волосах дольше положенного времени, иначе это может привести к непредсказуемым последствиям, вплоть до выпадения волос. А при осветлении корней химический препарат «Супра» следует наносить осторожно, стараясь не попасть на уже обесцвеченные участки волос. Отличный способ защитить волосы от многократного воздействия краски – предварительно смазать их по всей длине, отклоняясь от корней, любым растительным маслом, которое окажет дополнительный лечебный эффект.В результате этой несложной процедуры волосы будут выглядеть ухоженными и блестящими.

Четвертое: после окончания окрашивания волосы следует дважды вымыть шампунем, а затем нанести на них бальзам или кондиционер.

Никогда не следует проводить такие эксперименты, как увеличение времени воздействия или разбавление более сильного состава, чем рекомендовано для определенного типа волос. Соблюдая эти простые правила, вы сбережете свои волосы. И даже после такого агрессивного воздействия, как осветление, они останутся красивыми и ухоженными.

Окрашивание волос препаратом «Супра» в домашних условиях.

«Супра» для волос применяется в сочетании с перекисью водорода или кислородом, которую можно приобрести в любом профессиональном магазине. Кислород – это специальная жидкость для окисления лекарств, которая продается в больших бутылях или в бутылках. На упаковке обычно указывается процент его концентрации: 6%, 9%, 12%. Чем выше процент, тем агрессивнее краска будет воздействовать на волосы.

Перед покраской необходимо защитить руки и одежду, надев перчатки и фартук.«Супра» для волос и активаторы (оксигены) смешиваются непосредственно перед окрашиванием, а полученный раствор следует наносить быстро и обильно – это поможет избежать неравномерного оттенка в результате процедуры.

В любом случае лучшим вариантом при желании обесцветить волосы будет обращение к профессиональному парикмахеру, если не за услугой окрашивания, то хотя бы за советом.