Воспаление фолликула: Фолликулит что это? Лечение фолликулита волосистой части головы

Содержание

Вскрытие фурункула – удаление и дренирование фурункула в СПб

Имеются противопоказания. Необходима консультация специалиста.

Фурункул – гнойное воспаление волосяного фолликула. Развивается из-за попадания стафилококковой инфекции в сальные железы при микротравмах, несоблюдении правил гигиены, повышенной потливости, аллергии, снижении иммунитета. По характеру высыпаний бывают единичными и рецидивирующими, по форме одиночными и множественными (фурункулез).

Стадии развития фурункула и симптомы

По мере созревания фурункул последовательно проходит 3 стадии развития. Для каждой из них характерна специфическая клиническая картина.

Первая – стадия инфильтрата. После попадания стафилококка в волосяной фолликул на небольшом ограниченном участке постепенно развивается воспаление. Пораженная область краснеет, уплотняется и отекает.

На второй стадии – нагноения и некроза – очаг воспаления увеличивается до нескольких сантиметров в диаметре. Появляется болезненность пораженных тканей, усиливающаяся при пальпации.

Через 3-4 дня развивается гнойно-некротическая стадия. В центре инфильтрата формируется небольшая возвышающаяся пустула конусовидной формы. Внутри нарыва образуется некротический стержень из гноя и отмерших клеток. Процесс нередко сопровождается интоксикационной лихорадкой, общей слабостью и сильной болью.

Спустя некоторое время пустула лопается, из нее вытекает гной и отходит некротический стержень. Отечность спадает, болевой синдром утихает. Состояние больного улучшается.

Последняя стадия – заживление. После очищения раны на месте инфильтрата остается глубокая полость. Постепенно она заполняется грануляционной тканью. Кожные покровы восстанавливаются. На месте обширных фурункулов формируются рубцы.

Чем опасны фурункулы

При неправильном лечении фурункулов, самолечении, попытках выдавить гнойник или при его травмировании (например, при бритье) нередко развиваются осложнения. К ним относят:

  • флегмоны и абсцессы мягких тканей – обширные гнойные поражения;
  • тромбозы – закупорки – лимфатических и венозных путей;
  • септические флебиты, лимфангиты и лимфадениты – воспаление кровеносных и лимфатических сосудов, лимфатических узлов.

Попадание возбудителя во внутренние органы и кровеносную систему иногда заканчивается угрожающим жизни состоянием – сепсисом. При самолечении фурункулов на лице инфекция может попасть в головной мозг и вызвать менингит.

Правильное лечение большинства фурункулов – хирургическая операция

Самолечение с помощью ихтиола, мази Вишневского, компрессов, может спровоцировать неконтролируемое распространение и генерализацию гнойного процесса, поэтому тактику лечения фурункула определяет только врач. Если гнойник правильно не вскрыть и не дренировать, антибиотики, противовоспалительные и прочие препараты не могут эффективно действовать на пораженные гноем ткани.

Вскрытие и дренирование фурункула

Если гнойный процесс выходит за пределы волосяного фолликула, требуется обязательное хирургическое вмешательство. Его выполняют в классической технике либо с помощью лазера. Лазерное удаление фурункула сопровождается дополнительным обеззараживанием пораженных тканей чирья. Наиболее оптимальную технику вмешательства в каждом конкретном клиническом случае определяет врач.

 Также хирург определяет время для вскрытия таким образом, чтобы полностью сформировался стержень – в противном случае возможен рецидив заболевания. Процедуру выполняют под местной анестезией. После вскрытия гной и некроз удаляют. По показаниям выводят дренаж. Ткани обрабатывают антисептиком. На рану накладывают мазь с антибиотиком и стерильную повязку.

Реабилитационный период

Через 1-2 часа пациента выписывают из клиники. Если выведен дренаж, через 1-2 дня его нужно удалить у хирурга. В течение 2-3 дней после процедуры рекомендуется ограничить физические нагрузки. В течение 2 недель необходимо ездить на осмотры и перевязки с указанной хирургом частотой, а также обеспечить сбалансированный рацион и полноценный отдых. Ткани полностью заживают в течение 10-14 дней.

 Чтобы проконсультироваться, уточнить цены и удалить фурункул в СПб, позвоните в «СМ-Клиника».

Хирургическое удаление фурункула: цена, отзывы

Фурункул — это гнойное или гнойно-некротическое воспаление волосяного фолликула, сальной железы и окружающих тканей. Он может возникнуть на любом участке тела, где есть волосы. Провоцируется воспаление так называемой условно-патогенной флорой, чаще всего золотистым стафилококком. Однако для развития серьезного воспаления необходима «благоприятная» почва или сочетание нескольких факторов. Удаление фурункула осуществляется с учетом причин развития заболевания, поэтому важно разобраться в истоках недуга.

Причины появления фурункула

Воспаление, развивающееся в результате активного размножения бактериальной флоры, может развиться по нескольким причинам:

  • общее или местное снижение иммунных сил;
  • наличие входных ворот для инфекции — травмы, повреждения кожи;
  • переохлаждение;
  • стресс;
  • сахарный диабет и системные заболевания;
  • нарушения правил гигиены и пр.

Во многих случаях наблюдается сочетание неблагоприятных факторов. Кроме того, важно помнить о том, что травмы могут неочевидными, к примеру, появляться в результате зуда при расчесывании участков кожи.

Симптомы и особенности диагностики

На начальных стадиях возникает небольшое уплотнение розового или красноватого цвета. При прикосновении наблюдается болезненность. Воспалительный процесс нарастает достаточно быстро, уже через несколько часов или 1−2 суток инфильтрат увеличивается в размерах, кожа становится ярко-красной, боль усиливается. Во многих случаях образование горячее на ощупь, нередко поднимается и общая температура тела. В центре очага воспаления можно увидеть черную точку — это отмершее основание волоса или так называемый гнойно-некротический стержень.

Перед хирургическим удалением фурункула обычно достаточно визуального осмотра врачом-хирургом. Но иногда могут потребоваться дополнительные методы исследования, например, УЗИ мягких тканей. Это необходимо для дифференциальной диагностики и исключения других заболеваний.

Развитие заболевания и осложнения

В редких случаях фурункул проходит самостоятельно. Благоприятный ход развития состоит в постепенном размягчении тканей, отторжении стержня. Таким образом, образование дренируется самостоятельно, содержимое выводится наружу. Но крайне важно знать, что самопроизвольное вскрытие еще не говорит о полном выздоровлении: гной из фурункула выделяется не всегда в полном объеме, малого отверстия зачастую недостаточно для полноценного выведения содержимого. Пытаться помочь себе и выдавливать гной наружу не стоит ни в коем случае, поскольку есть вероятность его направления вглубь тканей. Это может повлечь распространение инфекции на подкожную клетчатку и развитие флегмоны.

При неполучении своевременной помощи врача воспалительный процесс усиливается, распространяется вглубь тканей. Под кожей скапливается гнойное содержимое, заболевание развивается в абсцедирующий фурункул. Это сопровождается такими симптомами, как увеличение размеров образования, сильная пульсирующая боль, подъем температуры тела, признаки общей интоксикации.
Если в процесс вовлекаются соседние волосяные фолликулы, формируется карбункул: в центре образования возникает некроз участка кожи, общее состояние существенно ухудшается.

Фурункул в области лица может повлечь быстрое распространение инфекции, в том числе на мозговые оболочки. К другим тяжелым осложнениям относят лимфангит и лимфаденит. Течение болезни может быть осложнено тромбофлебитом и сепсисом.

Необходимо как можно скорее обратиться к хирургу, чтобы не допустить развития осложнений. Особенно важно это сделать людям, страдающим хроническими заболеваниями.

Консервативное лечение

Если вы обратитесь к хирургу в первые 1−3 суток после появления симптомов, могут быть использованы консервативные методы. К ним относят медикаментозную антибактериальную терапию, антисептические повязки, применение препаратов для стимуляции работы иммунной системы. Иногда целесообразно выполнение инъекций в месте очага воспаления. Для этого используются анестетики и антибиотики, которые помогают удалить гнойно-некротический стержень воспалительного образования. Безоперационные методы эффективны только при начальной стадии воспаления и не дают стопроцентной гарантии выздоровления. Они особенно актуальны для пациентов, имеющих противопоказания к хирургическому вмешательству.

Хирургическое лечение

Удаление фурункула хирургическим путем выполняется при неэффективности консервативных методов лечения, а также формировании абсцесса. Операция проводится в амбулаторных условиях.

Вмешательство проводится в несколько последовательных этапов:
  • обработка поверхности кожи антисептическим раствором;
  • выполнение местной анестезии. Обычно для этого используется шприц с тонкой иглой, чтобы инъекция была максимально комфортной и безболезненной;
  • вскрытие фурункула. Выполнение небольшого разреза позволяет получить доступ к полости гнойного образования;
  • санация. С помощью специальных инструментов выполняется удаление гнойного содержимого, омертвевших участков ткани, затем проводится промывание полости с помощью антисептических растворов;
  • дренирование. В полость образования устанавливается дренаж. Это может быть специальная полоска резины (для малой раны) или марлевая турунда с пропиткой лекарственными препаратами на водорастворимой основе (при большом очаге воспаления). Дренаж необходим для предупреждения быстрого зарастания кожных покровов, важно, чтобы рана продолжала очищаться и был обеспечен отток экссудата;
  • наложение многослойной асептической повязки.

После выполнения вмешательства врач расскажет о том, как часто необходимо являться на перевязки и какие препараты применять в домашних условиях. Обычно назначается курс антибактериальной терапии, могут потребоваться иммуномодулирующие лекарственные средства.

Восстановительный период

Хирургическое лечение фурункула не предполагает госпитализации. Обычно пациенты не испытывают сильных болей, но лучше заранее посоветоваться с хирургом на предмет применения обезболивающих средств. Первая перевязка обычно выполняется на следующие сутки после операции. Во многих случаях достаточно трех визитов к врачу, а после удаления дренажа допускается самостоятельный уход за послеоперационной раной. Полное заживление проходит за 7−14 дней в зависимости от распространенности воспалительного процесса и общего состояния здоровья и защитных сил.

Преимущества обращения в клинику «Семейный доктор»

Удалить фурункул в Москве по доступной цене вы можете в клинике «Семейный доктор». Высококвалифицированные хирурги проводят операции любой сложности. Наши пациенты могут рассчитывать на высокое качество услуг, а также получают возможность комплексного подхода. Современное оснащение позволяет нам предлагать современные методы физиотерапевтического лечения для ускорения послеоперационного восстановления. 

Для записи на удобное для Вас время, позвоните по телефону единого контакт-центра в Москве +7 (495) 775 75 66, заполните форму онлайн-записи или обратитесь в регистратуру клиники.

Стоимость

врач-хирург, онколог, маммолог

врач-хирург, онколог

врач-онколог, хирург, колопроктолог, врач ультразвуковой диагностики

врач-хирург, онколог, врач ультразвуковой диагностики

врач-хирург, онколог, к.м.н.

врач ультразвуковой диагностики, хирург

врач-хирург, онколог, флеболог

врач-хирург, к.м.н.

Фурункул носа – симптомы, диагностика и причины

Рейтинг статьи

5.00 (Проголосовало: 2)

Фурункул носа – это гнойное воспаление волосяного фолликула и сальной железы наружной или внутренней поверхности крыла носа, кончика носа, кожной части перегородки носа. Если воспаляются несколько волосяных мешочков и сальных желез с обширным некрозом кожи и подкожной клетчатки. То это называется карбункулом.

Распространенность

Наиболее часто данной патологии подвержены лица в возрасте от 15 до 45 лет. Мужчины в 1,5 — 1,7 раз чаще болеют, чем женщины.

Причины развития фурункула носа

Чаще всего фурункулез вызывают стафилококки, реже стрептококки. Данные представители бактерий относятся к нормальной микрофлоре кожи и слизистых оболочек. И лишь при наличии сопутствующих факторов происходит инфицирование:

  1. Снижение иммунитета. Способствовать возникновению фурункула носа может общее переохлаждение, хроническое переутомление, авитаминоз, сахарный диабет, наличие ВИЧ-инфекции, онкологических заболеваний, пройденные курсы химиотерапии, прием системных кортикостероидов.
  2. Сопутствующие гнойные патологии. Воспаление околоносовых пазух, небных миндалин, наличие кариозных зубов. Гнойничковые заболевания кожных покровов (пиодермии) или преддверия носа (сикоз, фолликулит).
  3. Травматические повреждения. Порезы, царапины, ссадины, любые другие нарушения целостности тканей являются входными воротами для инфекции. Сюда же относятся ринопластика, установка имплантатов.
  4. Нарушение санитарно-гигиенических норм. Это редкое проведение гигиенический процедур в быту, что приводит к засаленности кожи и персистенции патогенных микроорганизмов. На производстве это- вдыхание загрязненного воздуха, постоянный контакт с горюче-смазанными материалами.

Симптомы фурункула носа

Развитие заболевание происходит в две стадии — инфильтрации и абсцедирования. Превая стадия длится 24-48 часов и сопровождается образованием небольшого конусовидного уплотнения, чувством распирания, покраснением, отечностью, болезненностью. Болевой синдром усиливается при жевании, разговоре, улыбке. Возникает интоксикационный синдром: слабость, недомогание, головная боль, повышение температуры тела до 39,0*.

На 3-7 сутки от начала заболевания наступает вторая стадия — абсцедирования. В центральной части образования происходит размягчение. На верхушке формируется желто-белая покрышка — стержень фурункула, который быстро прорывается, выделяется гнойное содержимое. Одновременно исчезают болевые ощущения, нормализуется температура тела, полость фурункула опорожняется, заполняется грануляционными тканями и заживает. Оставляя после себя белесоватый рубец.

Осложнения фурункула носа

Так как развитие осложнений обусловлено контактным и гематогенным распространением инфекции, то при несвоевременном обращении к ЛОР врачу, могут возникнут такие осложнения как:

  • флегмона орбиты, томбофлебит пещеристого синуса
  • менингит, энцефалит, абсцесс головного мозга
  • сепсис
  • гайморит, фронтит
  • абсцесс носовой перегородки

Диагностика фурункула носа

Для диагностики необходимо обратиться к оториноларингологу (ЛОР врачу), который осмотрев, опросив Вас, взяв необходимые лабораторные анализы, поставит диагноз и определит стадию. В зависимости от Вашего конкретного случая подберет необходимое, качественное лечение, которое заключается в следующем:

  1. Антибактериальная терапия. Вначале используются антибиотики широкого спектра действия — аминопенициллины, макролиды, цефалоспорины, фторхинолоны. После получения результатов микробиологического исследования, назначаются препараты, к которым наиболее чувствительна высеянная микрофлора.
  2. Хирургическое лечение. После инфильтрационной анестезии вскрывают фурункул носа, эвакуируют экссудат, обрабатывают антисептиками, устанавливают дренаж. Накладывают повязку.
  3. Физиотерпия. В нашей клинике широкий выбор физиопроцедур, которые помогут быстрее выздороветь, облегчить общее состояние и самочувствие, уменьшить местную боль и избежать осложнений. Это красный, инфракрасный, фиолетовый лазер, магнитотерапия, УЗОЛ-терапия. Улучшение наблюдается после первой процедуры!

Необходимое комплексное эффективное лечение конкретно в Вашем случае подберет ЛОР врач в ЛОР клинике номер 1 плюс.

Звоните прямо сейчас! Клинка работает круглосуточно!

Страница не найдена |

Страница не найдена |

404. Страница не найдена

Архив за месяц

ПнВтСрЧтПтСбВс

21222324252627

28293031   

       

       

       

     12

       

     12

       

      1

3031     

     12

       

15161718192021

       

25262728293031

       

    123

45678910

       

     12

17181920212223

31      

2728293031  

       

      1

       

   1234

567891011

       

     12

       

891011121314

       

11121314151617

       

28293031   

       

   1234

       

     12

       

  12345

6789101112

       

567891011

12131415161718

19202122232425

       

3456789

17181920212223

24252627282930

       

  12345

13141516171819

20212223242526

2728293031  

       

15161718192021

22232425262728

2930     

       

Архивы

Апр

Май

Июн

Июл

Авг

Сен

Окт

Ноя

Дек

Метки

Настройки
для слабовидящих

Пустулезный дерматит у собак: Диагностика и лечение

Пустулезный дерматит – часто встречающийся симптом различных дерматологических заболеваний. Пустула – основной элемент сыпи – мелкий приподнятый над поверхность кожи прыщик с краснотой по периферии и гнойным центром. Этот прыщик может быть связан с волосяным фолликулом или нет (фолликулярная и нефолликулярная пустула).

Пустула хрупкая и легко разрушается при механическом воздействии, оставляя после себя эпидермальный воротничок или корочку.

Основная задача ветеринарного врача – понять, с чем связана сыпь в каждом конкретном случае, так как от этого будет зависеть подход к лечению.

Причины пустулезного дерматита

Самой распространенной причиной возникновения пустулезного дерматита у собак является поверхностная пиодерма.

Поверхностная пиодерма – бактериальное воспаление кожи, наиболее часто ассоциированное с аллергией (блошиный аллергический дерматит / пищевая аллергия / атопический дерматит). Также поверхностная пиодерма может возникать на фоне эндокринных нарушений, снижения иммунитета (иммуносупрессии), анатомических особенностей (воспаление складок кожи морды, хвоста), чрезмерного купания или плохих условий содержания. Признаками поверхностной пиодермы являются зуд, эритема (краснота кожи), папулы (мелкие прыщики без содержимого), пустулы, эпидермальные воротнички и множественные очаги алопеции (выпадение волос).

Однако, стоит помнить, что пустулы могут быть компонентом более редких и сложных заболеваний кожи, диагностировать которые в большинстве случаев может только ветеринарный врач-дерматолог, например:

  • ювенильного целлюлита собак
  • листовидной пузырчатки
  • субкорнеального пустулезного дерматита

Ювенильный целлюлит собак – иммуноопосредованное (связанное с нарушением в работе иммунной системы) воспаление кожи и увеличение лимфатических узлов у молодых собак. Наиболее подвержены собаки в возрасте 3-16 месяцев. К частым породам относятся такса, лабрадор-ретривер, голден ретривер, сеттер. При данном заболевании появляется пустулезная (гнойничковая) сыпь на коже морды, особенно вокруг глаз, на ушных раковинах, на подбородке и губах. Часто у больных собак увеличиваются лимфатические узлы в области углов нижней челюсти, повышается температура тела. Также собаки становятся вялыми, отказываются от корма.

Листовидная пузырчатка – аутоиммунное (когда иммунитет атакует собственные клетки организма) стерильное (без участия микроорганизмов) заболевание, при котором воспаление развивается на белки собственного организма, воспринимаемые как что-то чужеродное. Предрасположенными к данному заболеванию породами считаются чау-чау, акита, бордер колли, шарпей, доберман пинчер, английский спрингер спаниель. Возрастной и половой предрасположенности не отмечено. При листовидной пузырчатке вокруг глаз, на спинке носа и на внутренней поверхности ушных раковин появляются хрупкие пустулы (гнойнички), которые быстро лопаясь оставляют корочки. Без должного лечения сыпь постепенно распространяется по всему телу, вторичная бактериальная инфекция вызывает зуд и воспаление кожи. Общее состояние больной собаки не ухудшается, однако могут быть периоды повышения температуры и вялости, аппетит обычно сохранен.

Субкорнеальный пустулезный дерматит – крайне редкое стерильное (без участия микроорганизмов) воспаление кожи собак с невыясненной причиной. Наиболее предрасположены к субкорнеальному пустулезному дерматиту миниатюрные шнауцеры и таксы. Чаще всего поражаются кожа головы и туловища. Редко в процесс может вовлекаться кожа подушечек лап. На коже развивается симметричная пустулезная (гнойные прыщики) сыпь, не ассоциированная с волосяными фолликулами.

Кроме перечисленных заболеваний образованием гнойничков и алопеций (выпадением волос) могут сопровождаться такие заболевания, как демодекоз и дерматофития (лишай).

При демодекозе происходит активное размножение клещей, в норме живущих в волосяных фолликулах. Это приводит к воспалению фолликула с образованием пустул и комедонов, а порой и к его разрыву.

При дерматофитии (лишае) изначально повреждается и обламывается у основания сам волос, но на фоне вторичного воспаления также может появляться гнойничковая сыпь.

Диагностика и лечение пустулезного дерматита

Для понимания причины сыпи ветеринарный врач на приеме должен собрать подробный анамнез (историю болезни), обращая внимание на породу собаки, возраст, давность начала заболевания и особенности его протекания.

При осмотре доктор обратит внимание на то, какие участки тела поражены сыпью, какого рода эта сыпь, есть ли признаки общего угнетения у собаки.

Необходимыми дополнительными исследованиями, которые возможно понадобится выполнить во время осмотра, являются мазок-отпечаток с кожи, соскоб и посев.

  • Мазок-отпечаток с кожи даст информацию врачу о наличии бактериального воспаления, что характерно для пиодермы.
  • С помощью соскоба будет исключен или подтвержден демодекоз. При данном заболевании клещи обычно легко обнаруживаются в материале.
  • Выполнение посева необходимо для диагностики дерматофитии (лишая).

При подозрении на более редкие причины пустулезного дерматита (листовидная пузырчатка субкорнеальный пустулезный дерматит и т.д.) доктору может потребоваться биопсия кожи.

Основываясь на результатах исследований, осмотра и анамнеза, доктор сможет принять решение о том, какое лечение лучше всего подходит именно этому пациенту.

Так, при постановке диагноза «демодекоз» будут назначены антипаразитарные препараты. Обязательным условием снятия данного диагноза являются два отрицательных соскоба с интервалом в месяц. С появлением на ветеринарном рынке таблетированных препаратов против демодекоза, лечение данного заболевания значительно упростилось. К таким препаратам относятся таблетки Симпарика, например.

Для лечения дерматофитии (лишая) собаке назначаются противогрибковые таблетки, для обработки места её обитания специальные дезинфектанты. Один раз в месяц во время данного лечения выполняются повторные посевы. При двух подряд отрицательных посевах данный диагноз может быть снят. Обычно, прогноз при данном заболевании благоприятный, хотя лечение и занимает порой много времени.

При пиодерме лечение будет включать в себя частые противоблошиные обработки, купание в антибактериальных шампунях и/или прием антибиотиков (зависит от тяжести проявления сыпи). Кроме того, учитывая, что пиодерма часто является симптомом аллергии и протекает с зудом, могут быть назначены противозудные препараты. Одним из них является Апоквел. Всё чаще врачи отдают предпочтение данному препарату при контроле аллергии, так как уже примерно через 4 часа после приема Апоквела снижаются зуд и воспаление кожи. Апоквел совместим с противомикробными препаратами. Также он хорошо переносится собаками и разрешен для длительного приема, что важно при контроле такого вида аллергии как атопический дерматит.

Если пустулезный дерматит ассоциирован с такими редкими заболеваниями как листовидная пузырчатка, ювенильный целлюлит или субкорнеальный пустулезный дерматит, то лечение будет основано на применении иммуносупрессантов. Вид препарата и схема его приема подбираются индивидуально каждой собаке. Во время лечения врач должен регулярно контролировать общее состояние животного. Прогноз при данных заболеваниях всегда осторожный, так как возможно пожизненное лечение.

Берегите себя и своих животных!

Риски при проведении ЭКО | ЦРМ

Перед вступлением в протокол ЭКО супругам или партнерам необходимо ознакомиться с рисками, которые возможны на разных этапах искусственного оплодотворения.
 

Этап пункции фолликулов

Пункцию проводят для получения у женщины половых клеток из фолликулов простимулированных яичников. Для этого делается прокол специальной иглой. Манипуляцию ведут под УЗ-контролем. Пациентке при этом обеспечивается внутренний наркоз, а вся манипуляция ведется в операционной палате. На нее уходит около 15-20 минут.

С пункцией связаны следующие риски:
 

  • негативная реакция организма женщины на применение препаратов, обеспечивающих наркоз;

  • травматичность операции.
     

Так как при операции игла проходит сквозь влагалище, возможны повреждения других органов (например, в брюшной полости), кровотечения. Также неудачная пункция может спровоцировать хроническое воспаление органов репродуктивной системы.

Перечисленные риски требуют скорейшего оперативного вмешательства на месте проведения пункции. Однако такие случаи осложнений редки ввиду того, что эти риски сводятся к минимуму на этапе тщательного обследования и подготовки женщины.
 

Этап сбора семенной жидкости

Сбор эякулята мужчины совершается в тот же день, что супруга (партнерша) проходит пункцию. После этой процедуры происходить специальная обработка полученного материала в эмбриологической лаборатории. Здесь же позже осуществляют и само оплодотворение ооцита.

Чаще всего мужчины не испытывают затруднений при сборе семенной жидкости. Но из-за повышенного нервного напряжения, стресса могут возникнуть сложности. Тогда для получения половых клеток проводят тестикулярную биопсию (т.е. забор спермы из яичек, осуществляющийся под наркозом).

Полученную сперму можно криоконсервировать, чтобы использовать ее в дальнейшем в протоколах ЭКО.
 

Этапы оплодотворения и культивирования

Фолликулярную жидкость после пункции отправляют в эмбриологическую лабораторию. Ее обрабатывают, а затем проводят поиск ооцитов. Найденные клетки проходят оценку, а затем производится оплодотворение.

Одна из причин, по которой на этом этапе может быть прервана программа оплодотворения in vitro — отсутствие клеток в фолликулярной жидкости. Это называется синдромом пустого фолликула. На данный момент его причины остаются неисследованными. К ним предположительно относят возраст женщины, проводившаяся ранее операция на яичниках, проблемы с гормональным фоном. Как правило, пациентке предлагают в этом случае еще одну попытку ЭКО, так как яйцеклетки в ней все же могут быть обнаружены.

В ряде случаев яйцеклетки могут остаться неоплодотворенными. Тогда паре могут рекомендовать ИКСИ (искусственное оплодотворение с применением специального оборудования и микроинструментов). Еще один вариант завершение цикла и применение ИКСИ + ЭКО уже при следующей попытке.
 

Если же яйцеклетки оплодотворились, эмбрионы далее развиваются в специально созданных условиях. Возможна ситуация, когда половина/большая часть эмбрионов развивается, но имеет низкое качество. Чаще всего аномалии строения эмбрионов это следствие генетического отклонения сперматозоидов или ооцитов. Эмбрионы, для которых характерно медленное развитие, переносятся в полость матки на 2-3 сутки после пункции. Если же процессы идут с нормальной скоростью, а эмбрионы имеют хорошее качество, их переносят на 5 сутки или после 5 суток (что соответствует стадии бластоцисты).

Лечение тонзиллита в Лор клинике

Лечение тонзиллита является одним из направлений нашей клиники. Мы проводим как консервативное лечение: инструментальное промывание лакун миндалин, УЗ-орошение с помощью Кавитара, фотохромотерапию. Хирургическое лечение по показаниям: тонзилэктомию.

Тонзиллит (ангина) – это воспаление небных миндалин. Клиническая картина заболевания проявляется в зависимости от этиологии. Передается воздушно-капельным путем. Инкубационный период длится от нескольких часов до 4-х дней.

Острая форма патогенеза начинается с недомогания, тянущих ощущений в мышцах, лихорадки, стремительного возрастания температуры тела до 39-40 градусов и болей в горле. Симптоматика усугубляется тяжелой интоксикацией, увеличением лимфатических узлов, гиперемией слизистой, отеком горла и миндалин (гланд), затем появляются гнойные очаги. Наиболее легкое течение заболевания – катаральная форма. Происходит поверхностное воспаление слизистой оболочки и миндалин.

По степени тяжести ангину дифференцируют на:

  • фолликулярную, которая отличается воспалением лимфоидных фолликул миндалин. Фолликулы, расположенные вблизи тонкого эпителия слизистой оболочки, явно обозначены. Точечные очаги («звездное небо») могут сливаться, обнажая свое лейкоцитарное содержимое. Прорываясь они образуют налет в пределах миндалин.
  • лакунарную форму, характеризующуюся поражением лакун (глубокие щели) миндалин и скоплением в них гнойного экссудата. Последний постепенно выходит через устья на поверхность миндалин и проявляется в виде беловато-желтого налета.
  • флегмонозную, в этом случае фолликулы, сливаясь, образуют гнойник внутри миндалины, который может опорожниться в полость рта. Если абсцесс глубоко внутри, то клиническая картина усугубляется.

Некротическая ангина (Симановского-Плаута-Венсана) — это наиболее тяжелое проявление заболевания, характеризуется некрозом (гниением), который поражает толщу миндалины и образует при этом кратерообразную язву. Процесс может распространяться на небные дужки, мягкое небо, язычок.

Возбудителями тонзиллита могут быть стафилококки, стрептококки, пневмококки, аденовирусы, вирусы герпеса, вирус Коксаки, дрожжеподобные грибы, микоплазмы, хламидии.

Диагностика проводится по клиническим и фарингоскопическим признакам.

При осуществлении необходимого лечения продолжительность острого периода составляет от 10 до 14 дней. Если схема терапии составлена неверно или лечение совсем отсутствует, то заболевание переходит в хроническую форму.

Хронический тонзиллит характеризуется измене местными признаками (покраснение, припухлость, уплотнение, местами образуется рубцовая ткань), также общими – субфебрильная температура, лимфаденит и т. д. Это говорит о наличии очага инфекции, который периодически вспыхивает обострениями. Такое течение заболевания чревато тяжелыми осложнениями и поражениями важных органов (сердце, почки, суставы).

Внешний вид, причины, симптомы и лечение

Обзор

Что такое фолликулит?

Фолликулит — это распространенное заболевание кожи, которое часто вызывается инфицированным или воспаленным волосяным фолликулом. Это может быть похоже на прыщи и вызывать дискомфорт или зуд. Фолликулит часто оказывает психосоциальное воздействие из-за своего внешнего вида. Существует множество различных типов фолликулита, каждый из которых уникален в зависимости от причины, инфекционного микроорганизма и его воздействия на кожу. Фолликулит может возникнуть в результате повседневных действий, таких как бритье, купание в джакузи, чрезмерное потоотделение во время физических упражнений или работы на свежем воздухе.

У вас может быть фолликулит на любом участке тела, где есть волосы. Общие места включают ваши:

  • Лицо.
  • Оружие.
  • Верхняя часть спины.
  • Голень.

Почти везде у вас волосы. Некоторые волосы настолько тонкие, что вы можете их не заметить, в то время как другие очень заметны. У ваших волос есть более важная цель, чем внешний вид — они действуют как изолятор, согревая вас. Это часть системы защиты вашего организма.Место, где отдельный волос входит в вашу кожу, называется фолликулом. Фолликул удерживает тонкие волосы на месте и является домом для сальных желез.

К сожалению, фолликулы могут собирать бактерии и другие материалы из внешнего мира, которые могут вызвать воспаление или инфекцию. Когда что-то воспаляется, оно опухает. Опухший волосяной фолликул выпячивается и образует бугорок на коже. Если у вас есть инфицированный волосяной фолликул, вы можете испытать:

  • Покраснение.
  • Раздражение.
  • Зуд.
  • Бугорки на коже.

Какие бывают виды фолликулита?

На самом деле существует множество различных типов фолликулита. Думайте о фолликулите как об общем термине — это семья, в которой живет каждый из этих конкретных типов кожных заболеваний. Каждый тип фолликулита может иметь свой внешний вид, симптомы и причину. Часто то, что вызывает это состояние, является одним из важнейших факторов, отличающих каждый тип фолликулита.Местоположение также может играть роль — то, где вы испытываете это состояние на своем теле, может меняться в зависимости от того, какой у вас тип фолликулита.

Типы фолликулита включают:

  • Staphylococcus aureus фолликулит: Заражение волосяного фолликула бактериями Staphylococcus aureus является одной из наиболее частых причин фолликулита. На коже можно увидеть небольшие красные или белые прыщики, наполненные гноем. Пораженный участок часто становится лучше (рассасывается) в течение нескольких дней, и о нем можно заботиться дома.Однако в тяжелых и стойких случаях фолликулит должен лечить ваш лечащий врач.
  • Pseudomonas aeruginosa («горячая ванна») фолликулит: Pseudomonas aeruginosa – это бактерия, которая размножается в нагретой движущейся воде (горячие ванны, водовороты, водные горки). Он может инфицировать волосяной фолликул и вызывать сыпь, очень похожую на ту, что вызывается стафилококковыми видами. Иногда сыпь зудит. Фолликулит в джакузи возникает через один-два дня после контакта с источником воды и обычно проходит сам по себе в течение нескольких дней.В редких случаях некоторым людям может потребоваться лечение.
  • Malassezia фолликулит : Malassezia представляют собой семейство дрожжевых грибков, которые обычно можно обнаружить на коже. Иногда, когда Malassezia попадает в волосяные фолликулы, это может вызвать зуд, похожий на высыпание прыщей. Обычно это происходит на верхней части груди и спине. Эта форма фолликулита ухудшается (обостряется) от пота. Часто полезно использовать шампунь против перхоти каждый день для мытья пораженных участков кожи.
  • Псевдофолликулит бороды : Также называемый «бугорками бритвы», псевдофолликулит бороды обычно возникает в области бороды. После стрижки волосков бороды бритвой острые края могут вернуться в кожу, вызывая раздражение. Псевдофолликулит бороды чаще встречается у людей с вьющимися волосами, особенно у чернокожих мужчин. Может помочь отказ от бритья или использования триммеров. Если проблема сохраняется, вам следует обратиться к дерматологу, так как это может привести к образованию рубцов.
  • Сикоз бороды : Сикоз бороды — тяжелая, потенциально рубцовая форма фолликулита, связанного с бритьем. Инфицируется весь волосяной фолликул, в результате чего образуются большие красные пустулы. Следует избегать бритья, и вам следует обратиться к дерматологу для обсуждения вариантов лечения.
  • Грамотрицательный фолликулит : Грамотрицательный фолликулит может возникнуть после длительного применения антибиотиков для лечения акне. Со временем резистентные бактерии растут и размножаются.Это может привести к ухудшению состояния прыщей. Это состояние требует лечения у дерматолога или другого поставщика медицинских услуг.
  • Фурункулы (фурункулы): Фурункулы или фурункулы возникают при глубоком заражении волосяного фолликула. Фурункул часто бывает красным, нежным и болезненным. Это придет в голову через несколько дней и может оставить после себя шрам. В некоторых случаях для устранения поражения необходимы пероральные препараты или процедуры.
  • Карбункулы: Карбункул образуется при появлении нескольких фурункулов в одном месте.Карбункулы обычно крупнее и представляют собой комбинацию нескольких инфицированных волосяных фолликулов. Как и в случае с фурункулами, в некоторых случаях для устранения поражения необходимы пероральные препараты или процедуры.
  • Эозинофильный фолликулит : Это состояние обычно наблюдается у пациентов с ослабленным иммунитетом (иммунная система функционирует не полностью). Есть также форма, которая наблюдается у младенцев. Эозинофильный фолликулит не заразен. Для него характерны зудящие пустулы, чаще всего на плечах, плечах, шее и лбу.Они часто проходят сами по себе, но могут возвращаться (повторяться).

Насколько распространен фолликулит?

Фолликулит — очень распространенное кожное заболевание, с которым многие люди сталкиваются на протяжении всей своей жизни. Это может случиться с мужчинами, женщинами, детьми и младенцами. Определенные типы фолликулита чаще встречаются у определенных групп людей. Псевдофолликулит бороды и сикоз бороды, например, являются двумя типами фолликулита, тесно связанными с бритьем. Эти состояния гораздо чаще встречаются у мужчин, которые часто стригут бороду.

Симптомы и причины

Каковы симптомы фолликулита?

В большинстве случаев основным симптомом фолликулита являются красные шишки, похожие на прыщи на коже. Они также могут выглядеть как белые шишки или заполнены гноем (пустулы). Фолликулит может вызывать зуд и дискомфорт. Многие люди испытывают потребность чесаться, когда у них фолликулит. Лучше постараться не чесать пятна, потому что вы не хотите открывать их (это может привести к более серьезному заражению волосяного фолликула).

Что вызывает фолликулит?

Как правило, фолликулит возникает, когда волосяной фолликул воспаляется (опухает) и инфицируется. Это приводит к тому, что фолликул набухает под кожей, создавая неприятные бугорки на поверхности кожи. Для многих конкретных типов фолликулита причина не всегда известна. Однако есть определенные факторы, которые могут увеличить риск развития фолликулита. Несколько рисков могут включать:

  • Если вы часто бреетесь.
  • Если вы применяли пероральные антибиотики в течение длительного периода времени.
  • Если у вас избыточный вес или ожирение.
  • Если у вас в анамнезе диабет.
  • Если вы занимаетесь делами, которые заставляют вас сильно потеть и после этого не полностью очищаются.
  • Если вы проводите время в джакузи или сауне, которые не убраны должным образом.

Диагностика и тесты

Как диагностируется фолликулит?

Фолликулит обычно диагностируется во время физического осмотра у вашего лечащего врача. Это можно сделать во время приема, и в большинстве случаев вам не нужно обращаться к специалисту по уходу за кожей.Ваш лечащий врач обычно может диагностировать фолликулит и составить план лечения. В некоторых тяжелых или стойких случаях рекомендуется консультация дерматолога.

Ваш лечащий врач изучит вашу историю болезни и спросит о ваших привычках. Некоторые вопросы могут включать:

  • Вы в последнее время потеете больше, чем обычно, или занимаетесь ли вы чем-то, что заставляет вас сильно потеть?
  • Вы были в джакузи или сауне?
  • Вы бреетесь каждый день?
  • Принимаете ли вы в настоящее время какие-либо лекарства, в том числе средства от прыщей?

Ответы на эти вопросы часто подтверждают диагноз фолликулита и помогают вашему лечащему врачу определить его тип.

В некоторых более тяжелых случаях ваш лечащий врач может направить вас к дерматологу для дополнительных анализов, чтобы убедиться, что ваш фолликулит не является другим заболеванием. Один тест, который может быть сделан, является биопсией. Это тест, при котором небольшой образец вашей кожи берется, а затем отправляется в лабораторию, где его исследуют.

Управление и лечение

Как лечится фолликулит?

Варианты лечения фолликулита зависят от типа фолликулита и его тяжести.Некоторым типам может потребоваться более агрессивный уход, в то время как другие могут исчезнуть практически без лечения. Если у вас легкий фолликулит, иногда его можно лечить дома. Есть несколько способов ухода за раздраженной кожей, в том числе:

  • Использование антибактериальных моющих средств для очистки кожи. Это ограничит количество бактерий на вашей коже.
  • Прикладывание теплых полотенец к раздраженной коже для снятия дискомфорта.
  • Использование кремов против зуда.

При менее тяжелых формах фолликулита, таких как Pseudomonas фолликулит (сыпь от горячей ванны), ваши симптомы обычно исчезают в течение нескольких дней без лечения.Если они этого не сделают, обратитесь к своему поставщику медицинских услуг. Если у вас более тяжелый случай фолликулита, для лечения этого состояния могут потребоваться пероральные антибиотики. Более глубокие инфекции, такие как фурункулы и карбункулы, могут быть удалены вашим лечащим врачом. Это удалит скопление гноя и позволит области зажить. Поскольку Pseudofolliculitis barbae и Sycosis barbae сильно поражают область бороды, вы можете справиться с этими состояниями, изменив свои привычки бритья. Эти изменения могут включать:

  • Смягчение волос горячей водой перед бритьем.
  • Бритье по направлению роста волос, а не против них.
  • Использование геля или крема для бритья.
  • Бритье через день, а не ежедневно.
  • Использование электробритвы или средства для удаления волос вместо лезвия традиционной бритвы.
  • Старайтесь не тянуть кожу во время бритья.

Профилактика

Можно ли предотвратить фолликулит?

Во многих случаях вы можете предотвратить фолликулит или справиться с ним, изменив свой образ жизни.Инфекции фолликулита обычно связаны с бактериями и дрожжами, проникающими в ваши волосяные фолликулы. Изменив некоторые части вашего обычного ухода за собой, вы можете ограничить количество инфекционного материала в ваших волосяных фолликулах.

Вот несколько советов по профилактике фолликулита:

  • Поддержание чистоты кожи.
  • Ограничение бритья.
  • Проверка уровня химических дезинфицирующих средств в гидромассажных ваннах и бассейнах с подогревом перед их использованием. Чем теплее бассейн или джакузи, тем быстрее выветриваются химические вещества, что делает их менее эффективными против бактерий.
  • Стирание и снятие купальника при выходе из джакузи или бассейна.
  • Носите дышащую одежду, чтобы пот не попадал между одеждой и кожей.

Перспективы/прогноз

Вернется ли фолликулит?

Фолликулит может вернуться снова после лечения, если вы не измените свои правила гигиены и привычки ухода за собой. Поддержание чистоты кожи – важная составляющая ее здоровья. Также полезно знать, что вызывает ваш фолликулит, чтобы вы могли избежать этого в будущем.Например, если вы знаете, что заболеваете фолликулитом после купания в горячей ванне, то, возможно, вы захотите убедиться, что химические вещества находятся в полной силе, прежде чем принимать ванну.

Если вы знаете, что вызвало ваш фолликулит в прошлом, и измените свои привычки, чтобы устранить эти причины, вероятность того, что это повторится снова и снова, невелика.

Жить с

Когда следует обратиться к врачу по поводу фолликулита?

Несмотря на то, что во многих случаях фолликулит можно вылечить дома, и он проходит через короткий промежуток времени, не стесняйтесь звонить своему лечащему врачу, если вы обеспокоены.В большинстве случаев беглый осмотр у врача покажет, нужно ли вам лечить фолликулит или он пройдет сам по себе. Тяжелые случаи фолликулита требуют лечения и могут потребовать перорального приема лекарств или небольшой процедуры. Если вы испытываете что-либо из перечисленного ниже, немедленно позвоните своему поставщику медицинских услуг:

.
  • Фолликулит, который распространяется из исходной области на другие участки кожи.
  • Твердые или болезненные пятна.
  • Любые неровности, которые сливают жидкость.
  • Лихорадка, озноб, усталость или любые другие системные симптомы.

Записка из клиники Кливленда

Фолликулит — очень распространенное заболевание, с которым многие люди сталкиваются на протяжении всей жизни. Если вы заметили небольшие красные прыщики на руках, ногах, лице или спине и начали испытывать неприятные симптомы (боль, выделение жидкости, лихорадка), обратитесь к своему лечащему врачу. Фолликулит часто лечится дома и не требует визита к врачу, но если у вас есть какие-либо опасения, лучше позвонить своему врачу.

Оценка воспаления и истощения фолликулов при старении яичников у мышей

  • Broekmans, F.J., Soules, M.R. & Fauser, B.C. Старение яичников: механизмы и клинические последствия. Эндокр. 30 , 465–493 (2009).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Финдли, Дж. К., Хатт, К. Дж., Хикки, М. и Андерсон, Р. А. Как определяется количество примордиальных фолликулов в овариальном резерве? биол. Воспр. 93 , 1–7 (2018).

    Google ученый

  • McGee, E.A. Начальное и циклическое привлечение фолликулов яичников. Эндокр. Ред. 21 , 200–214 (2004).

    Google ученый

  • Финдли, Дж. К., Хатт, К. Дж., Хикки, М. и Андерсон, Р. А. Что такое «овариальный резерв»? Фертил. Стерильно. 103 , 628–630 (2015).

    ПабМед Статья Google ученый

  • Balasch, J. & Gratacos, E. Задержка деторождения: влияние на фертильность и исход беременности. Курс. мнение Обс. Гинекол. 24 , 187–193 (2012).

    Артикул Google ученый

  • Franceschi, C. & Campisi, J. Хроническое воспаление (воспаление) и его потенциальный вклад в возрастные заболевания. Дж. Геронтол. сер. биол. науч. Мед. науч. 69 , S4–S9 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Ся, С. и др. Обновленная информация о воспалительном старении: механизмы, профилактика и лечение. Дж. Иммунол. Рез. 2016 (2016).

  • Голдберг Э. Л. и Диксит В. Д. Факторы возрастного воспаления и стратегии увеличения продолжительности жизни. Иммунол. 265 , 63–74 (2015).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Маджио М., Гуральник Дж. М., Лонго Д. Л. и Ферруччи Л. Интерлейкин-6 при старении и хронических заболеваниях: великолепный путь. Дж. Геронтол. Мед. науч. 61 , 575–584 (2006).

    Артикул Google ученый

  • Педерсен, М. и др. Циркулирующие уровни TNF-альфа и IL-6 относительно массы туловищного жира и мышечной массы у здоровых пожилых людей и у пациентов с диабетом 2 типа. Мех. Старение Дев. 124 , 495–502 (2003).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Бруунсгаард, Х., Андерсен-Ранберг, К., Хьельмборг, Дж. В. Б., Педерсен, Б. К. и Джун, Б. Повышенные уровни фактора некроза опухоли альфа и смертность у долгожителей. утра. Дж. Мед. 115 , 278–283 (2003).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Чезари, М. и др. Маркеры воспаления и физическая работоспособность у пожилых людей: исследование InCHIANTI. Дж. Геронтол. сер. А 59 , М242-248 (2004).

    Артикул Google ученый

  • Юм, Ю. Х. и др. Каноническая инфламмасома Nlrp3 связывает системное слабовыраженное воспаление с функциональным снижением старения. Сотовый метаб. 18 , 519–532 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Брайли, С. М. и др. Репродуктивный возрастной фиброз в строме яичника млекопитающих. Репродукция 152 , 245–260 (2016).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Чжан З., Schlamp, F., Huang, L., Clark, H. & Brayboy, L. Воспаление связано со смещением онтогенеза макрофагов и поляризацией в яичниках стареющих мышей. Репродукция 159 , 325–337 (2020).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Джаббур, Х. Н., Сейлз, К. Дж., Каталано, Р. Д. и Норман, Дж. Э. Пути воспаления в женском репродуктивном здоровье и заболеваниях. Репродукция 138 , 903–919 (2009).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Роби, К.Ф., Виид, Дж., Лайлс, Р. и Терранова, П.Ф. Иммунологические данные о факторе некроза опухоли яичников-α человека. Дж. Клин. Эндокринол. Метаб. 71 , 1096–1102 (1990).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Чен Х.Л., Марцинкевич Дж.Л., Санчо-Телло М., Хант Дж. С. и Терранова П. Ф. Экспрессия гена фактора некроза опухоли-альфа в ооцитах и ​​фолликулярных клетках мышей. биол. Воспр. 48 , 707–714 (1993).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Greenfeld, C. R. и др. Рецептор фактора некроза опухоли (ФНО) 2 типа является важным медиатором функции ФНО-альфа в яичниках мышей. биол. Воспр. 76 , 224–231 (2007).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ву, Р., Ван дер Хук, К. Х., Райан, Н. К., Норман, Р. Дж. и Робкер, Р. Л. Вклад макрофагов в функцию яичников. Гул. Воспр. Обновление 10 , 119–133 (2004 г.).

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Вайс Г., Голдсмит Л. Т., Тейлор Р. Н., Беллет Д.и Тейлор, Х. С. Воспаление при нарушениях репродуктивной функции. Репрод. науч. 16 , 216–229 (2009).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Герат, С. и др. Фолликулярные клетки яичников обладают врожденными иммунными способностями, которые модулируют их эндокринную функцию. Репродукция 134 , 683–693 (2007).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Хенес, М. и др. Изменения овариального резерва у женщин в пременопаузе с хроническими воспалительными ревматическими заболеваниями: влияние ревматоидного артрита, болезни Бехчета и спондилоартрита на уровень антимюллерова гормона. Ревматология 54 , 1709–1712 (2015).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фреур, Т. и др. Овариальный резерв у молодых женщин репродуктивного возраста с болезнью Крона. Воспаление. Кишечник Дис. 18 , 1515–1522 (2012).

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Шенатеш, Э. и др. Уровень антимюллерова гормона в сыворотке ниже у женщин репродуктивного возраста с болезнью Крона по сравнению со здоровыми женщинами контрольной группы. Колит Дж. Крона 7 , e29-34 (2013).

    Артикул Google ученый

  • де Соуза, Ф.H.C. и др. Снижение овариального резерва у пациенток с полимиозитом взрослых. клин. Ревматол. 34 , 1795–1799 (2015).

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Snider, A. P. & Wood, J. R. Ожирение вызывает воспаление яичников и снижает качество ооцитов. Репродукция 158 , 79–90 (2019).

    Артикул Google ученый

  • Ора, М.ICC, Ooistra, LIK & Travlos, G. Вагинальная цитология лабораторных крыс и мышей: обзор и критерии определения стадии эстрального цикла с использованием окрашенных вагинальных мазков. Токсикол. Патол. 43 , 776–793 (2015).

    Артикул КАС Google ученый

  • Майерс, М., Бритт, К.Л., Рефорд, Н.Г.М., Эблинг, Ф.Дж.П. и Керр, Дж.Б. Методы количественного определения числа фолликулов в яичнике мыши. Репродукция 127 , 569–580 (2004).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Лью, С. Х. и др. Потеря проапоптотического белка bh4, модифицирующего белок bcl-2, продлевает продолжительность фертильной жизни у самок мышей1. биол. Воспр. 90 , 1–9 (2014).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гейна, С.& Herrera-Rincon, C. Обновление стереологии для световой микроскопии. Рез. клеточной ткани. 360 , 5–12 (2015).

    ПабМед Статья Google ученый

  • Лью, С. Х., Нгуен, К. Н., Штрассер, А., Финдли, Дж. К. и Хатт, К. Дж. Резерв яичников истощается во время полового созревания в результате гормонального процесса, зависящего от проапоптотического белка BMF. Дис. клеточной смерти. 8 , e2971–e2978 (2017).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Berkholtz, C.B., Lai, B.E., Woodruff, T.K. & Shea, L.D. Распределение белков внеклеточного матрикса коллагена I типа, коллагена IV типа, фибронектина и ламинина в фолликулогенезе мышей. Гистохим. Клеточная биол. 126 , 583–592 (2006).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Реа И.М. и др. Возраст и возрастзависимые заболевания: роль триггеров воспаления и цитокинов. Фронт. Иммунол. 9 , 1–28 (2018).

    Артикул КАС Google ученый

  • Comi, M., Amodio, G. & Gregori, S. DC-10, продуцирующий интерлейкин-10, представляет собой уникальный инструмент для повышения толерантности с помощью антиген-специфических t-регуляторных клеток типа 1. Фронт. Иммунол. 9 , 1–8 (2018).

    Артикул КАС Google ученый

  • Габай, с.Интерлейкин-6 и хроническое воспаление. Артрит Рез. тер. 8 , 1–6 (2006).

    Артикул КАС Google ученый

  • Song, F., Ma, Y., Bai, X. & Chen, X. Изменения экспрессии инфламмасом в почках стареющих крыс. Дж. Геронтол. биол. науч. 71 , 747–756 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Рейли С.О., Кант Р., Чехомска М. и Лаар Дж. М. Ван. Интерлейкин-6: новая терапевтическая мишень при системной склеродермии? клин. Перевод Иммунол. 2 (2013).

  • Чжоу Ф., Ши Л. и Чжан С. Фиброз яичников: явление, вызывающее озабоченность. Подбородок. Мед. J. (англ.) 130 , 365–371 (2017).

    КАС Статья Google ученый

  • Вуд, Г. А., Фата, Дж. Э., Уотсон, К.Л. М. и Хоха Р. Циркулирующие гормоны и эстральная стадия предсказывают клеточное и стромальное ремоделирование в мышиной матке. Репродукция 133 , 1035–1044 (2007).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ури-Белапольский С. и др. Дефицит интерлейкина-1 увеличивает продолжительность жизни яичников у мышей. Проц. Натл. акад. науч. 111 , 12492–12497 (2014).

    КАС пабмед Статья ОБЪЯВЛЕНИЯ Google ученый

  • Латц, Э.& Duewell, P. Активация воспаления NLRP3 при воспалении. Семин. Иммунол. 40 , 61–73 (2018).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Цудзи-такаяма, К., Айзава, Ю., Окамото, И., Кодзима, Х. и Коиде, К. Интерлейкин-18 индуцирует выработку интерферона-гамма посредством активации NF-kB и NFAT в мышином Т-хелперном типе 1 кл. Сотовый. Иммунол. 50 , 41–50 (1999).

    Артикул Google ученый

  • Лю Т., Чжан Л., Джу Д. и Сун С. Передача сигналов NF-κB при воспалении. Сигнальный преобразователь. Цель. тер. 2 (2017).

  • Терранова П.Ф. Потенциальная роль фактора некроза опухоли-α в развитии фолликулов, овуляции и продолжительности жизни желтого тела. Дом. Аним. Эндокринол. 14 , 1–15 (1997).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Кайпиа, А., Chun, S., Eisenhauer, K. & Hsueh, AJW. Фактор некроза опухоли-а и его вторичный мессенджер, церамид, стимулируют апоптоз в культурах фолликулов яичников. Эндокринология 137 , 4864–4870 (1996).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Morrison, L.J. & Marcinkiewicz, J.L. Фактор некроза опухоли альфа усиливает апоптоз ооцитов/фолликулов в яичниках новорожденных крыс. биол. Воспр. 66 , 450–457 (2002).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Cui, L., Yang, G., Pan, J. & Zhang, C. Нокаут альфа-фактора некроза опухоли повышает фертильность мышей. Териогенология 75 , 867–876 (2011).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Столк, Л. и др. Мета-анализ идентифицирует 13 локусов, связанных с возрастом наступления менопаузы, и выделяет репарацию ДНК и иммунные пути. Нац. Жене. 44 , 260–268 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Тинген, К. М. и др. Популяция стромальных клеток, обогащенная макрофагами и тека-клетками, влияет на рост и выживание незрелых мышиных фолликулов in vitro. Репродукция 141 , 809–820 (2014).

    Артикул КАС Google ученый

  • Асано Ю.Связанное с возрастом накопление негемового трехвалентного и двухвалентного железа в строме яичника мыши визуализируется с помощью чувствительной гистохимии негемового железа. J. Histochem. Цитохим. 60 , 229–242 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ву, А. А. Ю. и Данн-Уолтерс, Д. Стареющая популяция В-клеток: состав и функция. Биогеронтология 11 , 125–137 (2010).

    ПабМед Статья Google ученый

  • Элли, С. Р. и Рэндалл, Т. Д. Резидентные В-клетки памяти. Вирусный иммунол. 33 , 282–293 (2020).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Allie, S. R. и др. Для создания резидентных В-клеток памяти в легких требуется локальный контакт с антигеном. Нац.Иммунол. 20 (2019).

  • Egbuniwe, I.U., Karagiannis, S.N., Nestle, F.O. & Lacy, K.E. Пересмотр роли B-клеток в иммунном надзоре кожи. Тренды Иммунол. 36 , 102–111 (2015).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ребольди, А., Цистер, Дж. Г., Франциско, К. С. и Франсиско, С. Пейеровые бляшки: организация ответов В-клеток на границе кишечника. Immunol Rev 271 , 230–245 (2017).

    Артикул КАС Google ученый

  • Linehan, E. & Fitzgerald, D.C. Старение и иммунная система: фокус на макрофагах. евро. Дж. Микробиол. Иммунол. 5 (2015).

  • Вебер, Г. Ф. и др. В-клетки активатора врожденного плеврального ответа защищают от пневмонии через ось GM-CSF-IgM. Дж. Экспл. Мед. 211 , 1243–1256 (2014).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Мадан, Р. и др. Недублирующие роли IL-10, происходящего из В-клеток, в иммунной контррегуляции. J Immunol 183 , 2312–2320 (2009).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Сауле, П., Trauet, J., Dutriez, V., Dessaint, J. & Labalette, M. Накопление Т-клеток памяти от детства до старости: центральные и эффекторные клетки памяти в CD4 + по сравнению с эффекторными клетками памяти и терминально дифференцированными клетками памяти в CD8 + купе. Мех. Старение Дев. 127 , 274–281 (2006).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Хондович Б.Д., Ким К.С., Рутербуш М.J. & Keitany, G.J. IL-2 необходим для образования вирусоспецифических клеток CD4+ Th2 Trms, а B-клетки необходимы для поддержания в легких. евро. Дж. Иммунол. 48 , 80–86 (2018).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Strutt, T. M. и др. IL-15 поддерживает образование резидентных защитных CD4 Т-клеток памяти легких. Нац. Опубл. гр. 11 , 668–680 (2017).

    Google ученый

  • Иидзима, Н. и др. Дендритные клетки и В-клетки максимизируют реакцию памяти Th2 слизистой оболочки на вирус простого герпеса. Дж. Экспл. Мед. 205 , 3041–3052 (2008).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Korn, T. & Muschaweckh, A. Стабильность и поддержание клеток Foxp3 + treg в нелимфоидной микросреде. Фронт. Иммунол. 10 , 1–8 (2019).

    Артикул КАС Google ученый

  • Донг Ю. и др. Роль регуляторных Т-клеток в аутоиммунном заболевании яичников, вызванном тимэктомией. утра. Дж. Репрод. Иммунол. 78 , 1–8 (2016).

    Google ученый

  • Очертания патологии – фолликулит

    Инфекционные расстройства

    фолликулит

    Тема Завершены: 1 сентября 2010 г.

    Незначительные изменения: 16 апреля 2021


    Авторское право: 2002-2022 гг., Патологии.com, Inc.

    Поиск в PubMed: Фолликулит [название]

    Просмотров страниц в 2021 году: 10 979

    Просмотров страниц в 2022 году на сегодняшний день: 2 307

    Процитируйте эту страницу: Do HK. Фолликулит. Сайт PathologyOutlines.com. https://www.pathologyoutlines.com/topic/skinnontumorfolliculitis.html. По состоянию на 14 марта 2022 г.

    Определение / общее

    • Первичное воспаление волосяного фолликула, инфекционное или неинфекционное

    Терминология

    • Перифолликулит: наличие воспалительных клеток в перифолликулярных тканях, которые могут поражать прилегающую ретикулярную дерму; первично лимфоцитарный (плоско-пилярный лишай, красный волосяной лишай) или гранулематозный (периоральный дерматит, розацеа)

    Места

    • Обычные места: лицо, скальп, бедра, подмышечная и паховая области

    Этиология

    • Вызванные инфекцией, трением и другими причинами травмы фолликулов, чрезмерной потливостью и окклюзией
    • Инфекционные случаи бывают либо поверхностными (грибки, бактерии, сифилис, вирусы), либо глубокими (обычно гранулематозными и вызванными либо грибками, либо бактериями)
    • Грибковые формы могут быть эндотриксными (споры находятся внутри стержня волоса) или эктотриксными (споры находятся на внешней поверхности стержня волоса)
    • Неинфекционные случаи: поверхностные/гнойные (вульгарные угри, розацеа, фолликулярный муциноз, индуцированный стероидами), глубокие/гранулематозные (вульгарные конглобатные и келоидные формы или перфорирующие угри) или спонгиозные (болезнь Фокса-Фордайса, атопический дерматит, зудящий фолликулит беременность)
    • Ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), по-видимому, имеют значение при фолликулите, вызывая аномальную дифференцировку эпидермиса, которая приводит к обструкции фолликулов и последующему воспалению (Br J Dermatol 2001;144:1169)

    Клинические признаки

    • Поверхностный фолликулит встречается чаще, но часто самокупируется
    • Пациенты с рецидивирующим или стойким поверхностным фолликулитом или с глубоким фолликулитом чаще обращаются за медицинской помощью
    • При рекальцитрантном фолликулите, который не дал результатов стандартной терапии, рассмотрите посев на чувствительность, окрашивание по Граму, препарат хлорида калия (КОН) для исключения грибкового фолликулита
    • Клиническая картина поверхностного фолликулита — острое появление мягко болезненных папул и пустул
    • Глубокий фолликулит обычно связан с большей болью и может сопровождаться гнойным отделяемым; может вызвать рубцевание и необратимое выпадение волос

    Лечение

    • При неосложненном поверхностном фолликулите используйте антибактериальное мыло, тщательное мытье рук
    • При рецидивирующих и глубоких поражениях эмпирически лечить местными антибиотиками
    • Антибиотики должны убивать Staphylococcus aureus , наиболее распространенный патоген; рекомендуется использовать диклоксациллин и цефалоспорины (eMedicine)
    • При MRSA используйте клиндамицин, бактрим, миноциклин или линезолид
    • Для носителей Staphylococcus aureus лечение пациента и членов его семьи мазью с мупироцином два раза в день 5 дней или рифампицином 600 мг/день 10 дней

    Клинические изображения


    Изображения, размещенные на других серверах:

    Фолликулит

    Микроскопическое (гистологическое) описание

    • Поверхностный фолликулит имеет умеренные воспалительные клетки в устье фолликула и верхних отделах фолликула
    • Инфильтрат первоначально состоит из нейтрофилов, позже становится более смешанным с лимфоцитами и макрофагами

    Микроскопические (гистологические) изображения


    Изображения, размещенные на других серверах:

    Микроизображение фолликулита

    Back to top

    Медиатор воспаления TAK1 регулирует морфогенез волосяного фолликула и индукцию анагена, показанные на кератиноцит-специфических мышах с дефицитом TAK1

    Abstract

    Трансформирующий фактор роста-β-активируемая киназа 1 (TAK1) является членом пути NF-κB и регулирует воспалительные реакции.Ранее мы показали, что TAK1 также регулирует рост, дифференцировку и апоптоз кератиноцитов. Однако неизвестно, играет ли TAK1 какую-либо роль в эпителиально-мезенхимальных взаимодействиях. Чтобы изучить эту возможность, мы изучили роль TAK1 в развитии и циклировании волосяных фолликулов мышей в качестве поучительной модельной системы. Сравнивая мышей с дефицитом кератиноцитов TAK1 ( Map3k7 fl/fl K5-Cre) с контрольными мышами, мы обнаружили, что количество зачатков волос (предшественников волосяных фолликулов) у Map3k7 fl/fl K5- Cre мышей было значительно снижено на Е15.5, и что последующий морфогенез волосяного фолликула был задержан. Затем мы проанализировали роль TAK1 в циклическом ремоделировании фолликулов, проанализировав ход цикла роста волос у мышей с тамоксифен-индуцируемым дефицитом TAK1, специфичным для кератиноцитов ( Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 ). После индуцирования депиляцией активного роста волос (анагена) TAK1 удаляли путем местного применения тамоксифена. Это привело к значительному замедлению развития анагена у мышей с дефицитом TAK1.Делеция TAK1 в волосяных фолликулах, которые уже находились в анагене, вызывала преждевременную регрессию волосяных фолликулов, вызванную апоптозом, наряду с повреждением волосяных фолликулов. Эти исследования предоставляют первые доказательства того, что медиатор воспаления TAK1 регулирует индукцию и морфогенез волосяных фолликулов и необходим для индукции и поддержания анагена.

    Образец цитирования: Саяма К., Каджия К., Сугавара К., Сато С., Хиракава С., Шираката Ю. и др. (2010)Воспалительный медиатор TAK1 регулирует морфогенез волосяного фолликула и индукцию анагена, показанные с помощью мышей с дефицитом TAK1, специфичных для кератиноцитов.ПЛОС ОДИН 5(6): е11275. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275

    Редактор: Vincent Laudet, Ecole Normale Supérieure de Lyon, France

    Получено: 19 марта 2010 г.; Принято: 30 мая 2010 г.; Опубликовано: 23 июня 2010 г.

    Авторские права: © 2010 Sayama et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

    Финансирование: Это исследование было частично поддержано грантами министерств образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии К.С. и KH, по исследовательским грантам в области здравоохранения и трудовых наук (исследования трудноизлечимых заболеваний) от Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии для KH, от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG 345 Pa/12-2) для RP и от Колледж де Франс на ПК Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

    Введение

    Путь NF-κB опосредует врожденные иммунные или провоспалительные реакции, такие как передача сигналов Toll-подобными рецепторами (TLR), рецептором IL-1 (IL-1R) и рецептором фактора некроза опухоли (TNFR) [ 1], [2]. Киназа 1, активируемая трансформирующим фактором роста-β (TAK1), является членом семейства киназ MAP3 [3] и важным участником пути NK-κB, участвующего в IL-1 и TNF-α-индуцированной активации NF-κB. и MAP-киназы [1].При связывании лиганда TNF-рецептор-ассоциированный фактор (TRAF) 6 или TRAF2 [4], [5], [6] активирует TAK1, который затем фосфорилирует киназы IkB (IKK), что приводит к активации NF-kB.

    Поскольку все чаще признается, что участники пути NF-κB играют важную роль в регуляции систем эпителиально-мезенхимального взаимодействия, начиная от развития зубов и заканчивая индукцией и морфогенезом волосяных фолликулов [7], [8], [9], [10], [11], нам было интересно узнать, играет ли TAK1 также роль в биологии волосяного фолликула, прототипа системы эпителиально-мезенхимального взаимодействия.Этот интерес был дополнительно подогрет нашим предыдущим открытием у мышей с дефицитом TAK1, специфичных для кератиноцитов ( Map3k7 fl/fl K5-Cre), что TAK1 регулирует рост, дифференцировку и апоптоз кератиноцитов [12]. Однако роль TAK1 в волосяных фолликулах ранее не изучалась.

    Индукция и морфогенез волосяного фолликула [13] контролируются сложными сигнальными сетями внутри кожного эпителия и между эпителием и специализированными индуктивными фибробластами в прилегающей к нему мезенхиме [7], [11].Среди этих сигнальных сетей путь NF-κB и передача сигналов Wnt/β-catenin обеспечивают центральный контроль [7], [8]; однако точная взаимосвязь между этими сигнальными сетями до конца не изучена. Связывание EdaA1 с его рецептором EdaR у эмбриона необходимо для развития эктодермальных придатков [14], а мутации в этих генах вызывают уменьшение или отсутствие эктодермальных придатков [15], [16], [17], [18], [ 19]. Впоследствии путь EdaA1/EdaR активирует нижестоящий путь NF-κB [20].Недавний отчет показал, что передача сигналов Wnt/β-catenin лежит как выше, так и ниже пути EdaR/NF-κB [8]. Передача сигналов Wnt/β-катенина в эпителиальных клетках необходима для активации пути Eda/EdaR/NF-κB на ранней стадии развития волосяного фолликула [8], а для экспрессии Eda и EdaR требуется передача сигналов Wnt/β-катенина. [8]. На более поздней стадии для поддержания передачи сигналов Wnt и повышенной экспрессии Wnt10a, Wnt10b и Dkk4 требуется путь Eda/EdaR/NF-κB [8].

    Постнатальный цикл роста волос у мышей начинается с индукции катагена около P17, за которым следует первый телоген.Недавно было показано, что путь EdaR участвует в цикле роста волос [9], [21], [22]. Экспрессия EdaA1 и EdaR увеличивается в фазе анаген-катаген [21]. Кроме того, EdaA1 удлиняет фазу анагена [22]. Таким образом, в дополнение к его хорошо известной роли в морфогенезе волосяных фолликулов, путь EdaR также участвует в контроле цикла роста волос.

    Поскольку TAK1 является участником пути NF-κB, мы предположили, что TAK1 участвует в морфогенезе волосяных фолликулов и контроле цикла роста волос.Чтобы изучить это, мы изучили развитие волосяных фолликулов у мышей с дефицитом TAK1, специфичных для кератиноцитов ( Map3k7 fl/fl K5-Cre), и последующее циклирование волосяных фолликулов у мышей с дефицитом TAK1, специфических для кератиноцитов, индуцируемых тамоксифеном ( Map3k7 ). fl/fl K14-Cre-ER T2 ), чтобы избежать нацеливания на гены в эмбриональном развитии, поскольку это может повредить волосяной фолликул, нарушив его способность к циклу в дальнейшем. Эти исследования предоставляют первые доказательства того, что TAK1 регулирует индукцию, морфогенез и циклирование волосяных фолликулов.

    Материалы и методы

    Заявление об этике

    Протокол получения мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre и мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 был одобрен Институциональным наблюдательным советом Высшей школы медицины Университета Эхиме ( № I-20-13 и № NE-27-16).

    Поколение мышей с дефицитом кератиноцитов TAK1 (

    Map3k7 fl/fl K5-Cre)

    TAK1 кодируется геном Map3k7 .Конструкция таргетинга была описана ранее [1]. Мы создали мышей с дефицитом кератиноцитов TAK1 ( Map3k7 fl/fl K5-Cre) путем скрещивания мышей Map3k7 fl/fl (фон C57Bl/6) с мышами K5-Cre (фон C57Bl/6). [23], как описано ранее [12].

    Создание тамоксифен-индуцируемых кератиноцит-специфических мышей с дефицитом TAK1 (

    Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 )

    Map3k7K fl/fl мышей скрещивали с мышами K14-Cre-ER T2 (фон C57Bl/6) [24], [25] для получения Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 мышей.Мы нанесли 100 мкл 4-гидрокситамоксифена (Sigma-Aldrich Co., Сент-Луис, Миссури) в этаноле в концентрации 1 мг/мл местно на кожу спины 8-недельной самки Map3k7 фл/фл K14-Cre-ER T2 мышей в течение 5 дней подряд [24].

    Восковая депиляция

    Цикл волосяного покрова был синхронизирован в коже спины 8-недельных самок мышей с помощью депиляции воском (SURGI-WAX™, Ardell International, Лос-Анджелес, Калифорния), как описано ранее [26].

    Гистологический анализ

    Стадии морфогенеза волосяного фолликула, цикла и дистрофического катагена были морфологически определены с использованием кожи спины мышей, и оценка была определена следующим образом.

    Стадию морфогенеза каждого волосяного фолликула в каждой группе мышей оценивали, как описано ранее [13]. В каждой группе мышей (две мыши на группу) оценивали не менее 40 волосяных фолликулов или все волосяные фолликулы у мышей. Оценка каждой стадии морфогенеза волос была определена следующим образом: стадия 1 = 1, стадия 2 = 2, стадия 3 = 3, стадия 4 = 4, стадия 5 = 5, стадия 6 = 6, стадия 7 = 7 и стадия 8. =  8. Затем определяли скорость (%) определенной стадии морфогенеза волос в общем количестве волосяных фолликулов и средний балл в каждой группе мышей.Оценка мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre сравнивалась с мышами Map3k7 fl/fl . Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различие * P <0,01 считалось статистически значимым.

    Стадию цикла роста каждого волосяного фолликула в каждой группе мышей оценивали, как описано ранее [27]. В каждой группе мышей (две мыши на группу) оценивали не менее 40 волосяных фолликулов. Оценка каждой стадии цикла роста волос определялась следующим образом: катаген I = 1, катаген II = 2, катаген III = 3, катаген IV = 4, катаген V = 5, катаген VI = 6, катаген VII = 7, катаген VIII = 8, телоген  = 9, анаген I = 10, анаген II = 11, анаген IIIa = 12, анаген IIIb = 13, анаген IIIc = 14, анаген IV = 15, анаген V = 16 и анаген VI17 =.Затем определяли долю (%) определенной стадии цикла роста волос в общем количестве волосяных фолликулов и средний балл в каждой группе мышей. Оценку мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, сравнивали с контрольными мышами. Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различие * P <0,01 считалось статистически значимым.

    Дистрофический катаген был определен в соответствии с предыдущим отчетом [28] как ранний дистрофический катаген, средний дистрофический катаген, поздний дистрофический катаген и дистрофический телоген.Затем в каждой группе мышей рассчитывали долю (%) определенной стадии волосяного фолликула в расчете на общее количество волосяных фолликулов. В каждой группе мышей (две мыши на группу) оценивали не менее 40 волосяных фолликулов.

    Результаты

    Нарушение морфогенеза волосяных фолликулов у мышей с дефицитом кератиноцитов TAK1

    Было получено

    кератиноцит-специфических TAK1-дефицитных мышей ( Map3k7 fl/fl K5-Cre), как описано ранее [12]. Мышей Map3k7 fl/fl использовали в качестве контроля.Гистологический анализ развития волосяного фолликула показан на рисунке 1А. Хотя ростки волос (предшественники фолликулов) и дермальные уплотнения появились у мышей обоих типов на E15.5, количество ростков волос у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre было значительно ниже, чем у мышей Map3k7 fl. /fl мышей (фиг. 1А). На E16.5 зачаток волоса далее прогрессировал до стадии морфогенеза волосяного фолликула у мышей Map3k7 fl/fl со скоростью, ожидаемой для мышей дикого типа [29], в то время как у мышей волосяные штифты практически отсутствовали. Мыши Map3k7 fl/fl K5-Cre.Точно так же на P1-6 развитие постнатальных волосяных фолликулов было серьезно нарушено у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre (Fig. 1A).

    Рисунок 1. Нарушение морфогенеза волосяных фолликулов у мышей с дефицитом кератиноцитов TAK1.

    (A) Гистологический анализ развития волосяных фолликулов от E14.5 до P6. Map3k7 fl/fl K5-Cre были кератиноцит-специфическими TAK1-дефицитными мышами [12]. Мышей Map3k7 fl/fl использовали в качестве контроля.Стрелки указывают на волосяные зародыши или волосяные штифты. Масштабная линейка, 100 мкм. (B) Стадию морфогенеза каждого волосяного фолликула в каждой группе мышей оценивали, как описано ранее [13]. Затем определяли скорость (%) определенной стадии морфогенеза волос в общем количестве волосяных фолликулов (левая панель) и средний балл в каждой группе мышей (правая панель). Оценка мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre сравнивалась с мышами Map3k7 fl/fl . Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни.* Р <0,01.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g001

    Морфогенез волосяного фолликула был проанализирован количественно. Стадия морфогенеза и средний балл каждой группы мышей показаны на рис. 1В. Показатели морфогенеза волосяных фолликулов были значительно отсрочены у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre, о чем свидетельствует их более низкий показатель морфогенеза волос по сравнению с мышами Map3k7 fl/fl на P3 и P6 (рис.1Б).

    Создание тамоксифен-индуцируемых кератиноцит-специфических TAK1-дефицитных мышей

    Поскольку нацеливание зародышевой линии на TAK1 сильно нарушало морфогенез волос и, таким образом, препятствовало осмысленному анализу последующего цикла волосяных фолликулов, мы затем использовали мышей с дефицитом TAK1, индуцируемых тамоксифеном, кератиноцитов ( Map3k7 fl/fl K14-Cre- ER T2 ), в котором Cre-ER T2 экспрессировался в эпидермисе под контролем промотора K14 [24].Саузерн-блоттинг продемонстрировал эффективную делецию аллеля floxed в эпидермисе обработанных тамоксифеном мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 (рис. 2).

    Рис. 2. Саузерн-блоттинг.

    Геномная ДНК, полученная из кожи ушей мышей, обработанных раствором тамоксифена (15 мкл/ухо) или этанолом в течение 5 дней подряд, расщепляли с помощью Xba I и Eco RI. Саузерн-блот-анализ делеции аллеля floxed Tak1 проводили, как описано ранее [1].Экспрессия Cre приводила к вырезанию аллеля floxed ( flox ) и формированию удаленного аллеля (Δ) Map3k7 .

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g002

    Хотя образец кожи для Саузерн-блоттинга содержал некератиноцитные клетки, такие как клетки Лангерганса, меланоциты или фибробласты, полоса обработанных тамоксифеном Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER Мыши T2 представляли собой одну рекомбинированную полосу.Поскольку большая часть этого образца кожи состоит из кератиноцитов, полоса флокса некератиноцитарных клеток может быть незаметна на этом пятне. У мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших этанол, также наблюдается незначительная полоса рекомбинации, предположительно из-за слабой утечки активности Cre-ER T2 .

    Делеция TAK1, специфичная для кератиноцитов, приводит к выпадению шерсти у мышей-подростков

    В первом эксперименте тамоксифен просто наносили на кожу спины 8-недельных мышей в течение 5 дней подряд.Через две недели после применения у мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, началось выпадение волосяных стержней, и этот процесс продолжался более 4 недель (рис. 3). Этот фенотип предполагает участие TAK1 в циклах волосяных фолликулов.

    Рисунок 3. Делеция TAK1, специфичная для кератиноцитов, приводит к выпадению шерсти у мышей-подростков.

    Тамоксифен местно наносили на кожу спины мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 в течение 5 дней подряд для удаления TAK1.Показан клинический вид мышей через 4 недели после применения. В качестве контроля, мышей Map3k7 fl/fl или мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 лечили тамоксифеном или этанолом соответственно.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g003

    Делеция TAK1, специфичная для кератиноцитов, задерживает прогрессирование волосяного цикла у мышей-подростков

    Для дальнейшего изучения роли TAK1 в циклах волосяных фолликулов был индуцирован синхронизированный активный рост волос (анаген) в покоящихся (телогеновых) волосяных фолликулах путем депиляции воском [26].За этим последовало местное нанесение тамоксифена на кожу спины для удаления TAK1 (рис. 4А). Через 2 недели после синхронизированной индукции анагена у контрольных мышей было отмечено образование волосяного стержня как макроскопический индикатор хорошо развитого анагена, в то время как рост волосяного стержня не наблюдался у получавших тамоксифен Map3k7 fl/fl K14 Мыши -Cre-ER T2 (фиг. 4В). Гистологический анализ показал, что прогрессирование анагена было серьезно задержано у мышей с делецией TAK1 на 1-3 неделе (рис.4С).

    Рисунок 4. Специфическая для кератиноцитов делеция TAK1 задерживает прогрессирование цикла роста волос у мышей-подростков.

    (A) График применения тамоксифена. Цикл волосяного покрова был синхронизирован с фазой анагена с помощью восковой депиляции, и тамоксифен был нанесен местно на кожу спины мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 для удаления TAK1. В качестве контроля, мышей Map3k7 fl/fl или мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 лечили тамоксифеном или этанолом соответственно.(B) Клинический вид в указанный момент времени после депиляции. Через 2 недели у контрольных мышей было отмечено формирование стержня волоса, в то время как у мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, рост волосяного стержня не наблюдался. (C) Гистологический анализ в указанный момент времени после депиляции. Прогрессирование анагена было серьезно задержано у мышей с делецией TAK1 на 1-3 неделе. Масштабная линейка, 100 мкм.

    https://doi.org/10.1371/журнал.pone.0011275.g004

    Количественная гистоморфометрия цикла роста волос и расчет показателей цикла роста волос (рис. 5) подтвердили, что индуцированное депиляцией прогрессирование анагена было серьезно задержано у мышей с делецией TAK1 через 1–3 недели, в то время как развитие анагена прогрессировало, как и ожидалось, у TAK1. -компетентные мыши. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что TAK1 является важным регулятором раннего развития анагена в телогеновых волосяных фолликулах, хотя TAK1, по-видимому, не является обязательным для индукции анагена.

    Рисунок 5.Количественный анализ цикла волос.

    Стадия цикла волос каждого волосяного фолликула в каждой группе мышей на рис. 4 оценивалась в соответствии с нашим предыдущим отчетом [27]. Затем определяли долю (%) определенной стадии цикла роста волос в общем количестве волосяных фолликулов (левая панель) и средний балл в каждой группе мышей (правая панель). Оценку мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, сравнивали с мышами, получавшими тамоксифен Map3k7 fl/fl , или мышами, получавшими этанол 15157 Map3k7. Мыши K14-Cre-ER T2 .Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни. * Р <0,01.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g005

    Хотя утечка Cre-ER T2 была отмечена в обработанном этанолом Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER

  • 7 T2 мышей (рис. 2), не было существенной разницы между мышами Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавшими лечение этанолом, и мышами Map3k7 fl/fl , получавшими тамоксифен.Таким образом, утечка активности Cre-ER T2 , по-видимому, оказывает минимальное влияние в этом эксперименте.

    Специфичная для кератиноцитов делеция TAK1 вызывает переход от анагена к дистрофическому катагену у мышей-подростков

    В третьей экспериментальной установке TAK1 был делетирован только через 1 неделю после индукции анагена (рис. 6А). Через 2 недели после депиляции у мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, повторный рост волос уменьшился по сравнению с контрольной группой.Гистологический анализ показал, что почти все волосяные фолликулы у получавших тамоксифен мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 преждевременно вступили в стадию регрессии цикла волосяных фолликулов, обусловленную апоптозом (т.е. катаген; рис. 6С).

    Рисунок 6. Специфическая для кератиноцитов делеция TAK1 вызывает переход от анагена к дистрофическому катагену у мышей-подростков.

    (A) График применения тамоксифена. Цикл волос был синхронизирован с фазой анагена с помощью восковой депиляции.На 7 сутки после депиляции применяли тамоксифен в течение 5 суток. (B) Клинический вид мышей через 2 недели после депиляции. (C) Гистологический анализ мышей через 2 недели после депиляции. (D) Большее увеличение обработанных тамоксифеном мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 на (C). Масштабная линейка, 100 мкм. (E) Дистрофический катаген был определен в соответствии с предыдущим отчетом [28]. Затем рассчитывали долю (%) определенной стадии волосяного фолликула в расчете на общее количество волосяных фолликулов.Количественные анализы подтвердили, что большинство волосяных фолликулов мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 , получавших тамоксифен, находились в позднем дистрофическом катагене, в то время как фолликулы контрольной группы находились в анагене.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g006

    Интересно, однако, что это ускоренное развитие катагена было связано с яркими пигментными признаками повреждения волосяного фолликула (дистрофия): множество крупных, эктопически расположенных скоплений меланина, часто крупнее ядер кератиноцитов, обнаруживались не только в их обычном расположении (т.е., прекортикальный матрикс волос), но также эксцентрично на периферии волосяной луковицы и в эпителиальном тяже инволютивных катагенных волосяных фолликулов (рис. 6D). Таким образом, делеция TAK1 индуцировала «дистрофический катаген», показатель серьезного повреждения волосяных фолликулов [28]. Количественный анализ (рис. 6E) подтвердил, что большинство волосяных фолликулов у получавших тамоксифен мышей Map3k7 fl/fl K14-Cre-ER T2 находились в позднем дистрофическом катагене, в то время как фолликулы контрольной группы находились в анагене.Эти данные свидетельствуют о том, что TAK1 необходим для поддержания функциональной фазы анагена.

    Обсуждение

    Здесь мы показываем с помощью экспериментов по геномике мышей и целевых делеций, что TAK1, член пути NF-κB, который в основном признан медиатором врожденного и адаптивного иммунитета [1], [2], [4]. , [5], [6], [30], также является ключевым компонентом молекулярного механизма, контролирующего рост мышиных волос. В соответствии с нашим предыдущим открытием, что TAK1 регулирует рост, дифференцировку и апоптоз кератиноцитов [12], теперь мы показываем, что селективная делеция TAK1 в кератиноцитах замедляет индукцию волосяных фолликулов, морфогенез и развитие анагена и необходима для поддержания нормального анагена. .Эта недавно идентифицированная роль TAK1 в развитии и циклировании волосяных фолликулов указывает на то, что TAK1 участвует в сложных событиях ремоделирования органов и эпителиально-мезенхимальных взаимодействиях, которые могут быть смоделированы мышиными волосяными фолликулами [11].

    Путь TAK1-NF-κB регулирует не только иммунные ответы [1], [30], но и функцию эпителия [12]. Поскольку путь NF-κB контролирует провоспалительные реакции, ожидалось, что делеция этого пути будет подавлять воспаление эпителия. Однако неожиданно было обнаружено, что делеция TAK1, IKK-β или IKK-γ приводит к тяжелому воспалению кожи (включая образование абсцесса) [12], [31], [32], [33].Точно так же отсутствие передачи сигналов NF-κB, вызванное условной абляцией IKKγ или IKKα и IKKβ в эпителии кишечника, вызывает тяжелое хроническое воспаление кишечника у мышей [34]. Это говорит о том, что непрерывный базовый уровень активации NF-κB может потребоваться для поддержания целостности эпителия и гомеостаза, а также для подавления чрезмерного воспаления кожи. В текущем исследовании мы добавляем к установленной роли TAK1 в коже мышей новую функцию контроля роста волос.

    Поскольку TAK1 регулирует функцию кератиноцитов [12], существует вероятность того, что дефекты волосяных фолликулов у мышей с дефицитом TAK1 могут быть связаны с такими аномальными способностями кератиноцитов, а не с отражением специфической функции TAK1 в регуляции волосяных фолликулов.Однако клинические фенотипы кожи и гистологические аномалии не проявлялись при рождении и начали появляться на P2 у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre [12]. С другой стороны, E15.5 — это момент времени, когда дефект развития волосяного фолликула стал очевидным (рис. 1). Следовательно, дефект развития волосяного фолликула в первую очередь связан с дефектом передачи сигналов TAK1 во время эмбриогенеза, а не с функциональным дефектом кератиноцитов.

    Недавно TAK1-связывающий белок (TAB) 2 был идентифицирован как партнер по связыванию EdaR-ассоциированного белка домена смерти (EDARADD) с использованием двухгибридного скрининга дрожжей [35].В клетках 293 эндогенные и сверхэкспрессированные TAB2, TRAF6 и TAK1 коиммунопреципитировали с EDARADD [35]. Кроме того, доминантно-негативные формы TAB2, TRAF6 и TAK1 блокировали активацию NF-κB, индуцированную EDARADD, в клетках 293 [35]. Следовательно, предполагается, что TAK1 участвует в развитии волосяных фолликулов. Однако фактическая роль TAK1 в волосяных фолликулах ранее не изучалась.

    Шерсть мышей содержит четыре основные субпопуляции волосяных фолликулов: остевые волосы, шиловидные и ушные волосы и зигзагообразные волосы.Формирование каждого вида волосяных фолликулов начинается на е14, е16 и е18-р3 соответственно, и регуляторные механизмы развития волосяных фолликулов у них немного различаются [7], [36]. Эпидермальная активность NF-κB впервые наблюдается в плакодах первичных остевых волос на ст. E14.5 [36]. В отсутствие активности NF-κB последующие события, такие как поддержание передачи сигналов Wnt и увеличение экспрессии Wnt10a, Wnt10b и Dkk4, нарушаются [8], и дальнейшего снижения роста плакод не происходит в первичных фолликулах остевого волоса [8]. 36].У мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre количество ростков волос было значительно снижено на ст. E15.5, что указывает на значительное нарушение развития первичных фолликулов остевого волоса. Нарушение развития первичных фолликулов остевого волоса на ст. E15.5 можно объяснить отсутствием активности NF-κB из-за дефицита TAK1, что согласуется с моделью, в которой TAK1 участвует в пути EdaA1/EdaR/NF-κB [35]. (см. рис. 7). Появление нескольких первичных волосяных плакод можно объяснить неполной делецией TAK1 на E15.5.

    Рисунок 7. Модель сигнальных путей, участвующих в развитии волосяных фолликулов.

    В развитии первичных волосяных плакод TAK1 участвует в пути Edar/NF-κB. Во вторичных волосяных плакодах NF-κB (TAK1)-независимые пути регулируют развитие волосяных плакод.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011275.g007

    Напротив, активность EdaR/NF-κB необязательна для индукции волосяных фолликулов шила/ошена, как показано на табби , даунлесс , и c IκBαΔN мышей, даже несмотря на то, что EdaR/NF-κB-дефектные, волосяные фолликулы шила/ошена впоследствии производят аномальные шиловидные волосяные стержни [36], [37].Для этого процесса необходима независимая от EdaR/NF-κB передача сигналов Wnt/β-catenin [8]. Таким образом, плакоды, которые стали видны у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre на ст. E16.5, скорее всего, представляют собой плакоды волосяных фолликулов типа owl/auchene. В недавнем исследовании анализ двойных мутантов Eda и гомолога EdaR Troy показал, что в дополнение к первичным фолликулам остевого волоса у этих мышей были дефектны фолликулы шиловидного/охенового волоса [38]. Это исследование показало, что EdaR и Troy избыточно активируют независимый от NF-κB путь через TRAF6 для развития плакод волосяных фолликулов типа awchene/auchene.Следовательно, возможно, что развитие плакод у мышей Map3k7 fl/fl K5-Cre контролируется этим NF-κB- (и TAK1)-независимым путем (Fig. 7).

    Помимо передачи сигналов NF-κB, недавние исследования указывают на участие TAK1 во множественных сигнальных путях, таких как MAP-киназы и передача сигналов AP1 [1], [39], подтверждая альтернативную возможность того, что, в дополнение к сигнальному пути NF-κB, множественные сигнальные пути также могут быть вовлечены в регуляцию волосяных фолликулов ниже уровня TAK1.Хотя некоторые семейства рецепторов TNF активируют путь JNK в дополнение к NF-κB, Edar демонстрирует лишь слабую активацию пути JNK/AP-1 [14], [20]. В отличие от Edar, Troy [40] приводит к сильной активации пути JNK, но слабой активации NF-kB [20], [40]. Следовательно, возможно, путь Troy/TAK1/JNK/AP-1 участвует в морфогенезе волос. Однако этот момент следует уточнить.

    Интересное различие наблюдалось между мышами Map3k7 fl/fl K5-Cre и полосатыми мышами , downless и c IκBαΔN мышами.В то время как мыши tabby , downless и c IκBαΔN продуцировали аномальные шиловидные волосяные стержни, мыши Map3k7 fl/fl K5-Cre демонстрировали удлиненный период морфогенеза и даже не развивали волосяные стержни. после трансплантации кожи нормальным контрольным мышам (неопубликованные предварительные данные). Это указывает на то, что делеция TAK1 также влияет на морфогенез вторичных волосяных фолликулов.

    Хотя многочисленные молекулярные игроки были идентифицированы как мощные регуляторы циклов волосяных фолликулов, точный молекулярный механизм, который управляет неуловимыми «часами цикла волос», остается неясным [29], [41], [42], [43].Например, известно, что IGF-1, HGF, глиальный нейротрофический фактор и VEGF продлевают продолжительность анагена, в то время как фактор роста фибробластов 5, TGFβ1 и TGFβ2, IL-1β, NT-3, опосредованная рецептором эстрогена передача сигналов, и IFN-γ, как известно, вызывают переход анаген-катаген [29], [41], [43], [44], [45]. Экспрессия регуляторных молекул контролируется восходящими сигналами, такими как сигналы, обеспечиваемые путями NF-κB, Wnt/β-catenin, костного морфогенетического белка (BMP) и Shh-Gli [29], [41], [42]. .На основании наших результатов TAK1 теперь следует рассматривать как часть молекулярного механизма индукции анагена.

    В настоящем исследовании мы показали, что делеция TAK1 сильно задерживает переход телоген-анаген, хотя и не подавляется полностью, в то время как делеция TAK1 в анагенных фолликулах преждевременно индуцирует катаген и нарушает нормальную функцию волосяных фолликулов. Таким образом, активность TAK1 важна, но не существенна для инициации и прогрессирования анагена, но необходима для поддержания зрелых фолликулов в анагене, при этом потеря активности TAK1 приводит к индукции катагена.Следующая задача состоит в том, чтобы проанализировать восходящие и нисходящие сигналы TAK1. Поскольку считается, что NF-κB является нижестоящим сигналом TAK1 в морфогенезе волос, и поскольку сильная активность NF-κB обнаруживается в анагеновом матриксе волосяных фолликулов взрослых мышей [37], NF-κB является основным кандидатом нижестоящего сигнала TAK1 в индукции анагена. Наоборот, EdaR является вероятным кандидатом вышестоящего сигнала от TAK1, поскольку уже было показано, что EdaA1 и EdaR участвуют в циклах волосяных фолликулов [9], [21], [22].

    После химического, биологического или физического повреждения в волосяных фолликулах развиваются аномалии, которые в совокупности называются дистрофией волосяных фолликулов [28]. Низкое повреждение фолликулов вызывает реакцию «дистрофического анагена». Тяжелое повреждение фолликулов вызывает реакцию «дистрофического катагена», характеризующуюся немедленным завершением анагена. На рис. 6 стадия волосяного фолликула была определена как «дистрофический катаген». Развитие «дистрофического катагена» указывает на то, что повреждение фолликулов, вызванное делецией TAK1, сравнительно выше и сходно с таковым при алопеции, вызванной высокими дозами циклофосфамида.Это предполагает, что дистрофический катаген, вызванный делецией TAK1, может быть моделью алопеции, вызванной химиотерапией.

    Приведенные здесь данные свидетельствуют о том, что TAK1, важный медиатор воспаления [1], [30], также участвует в морфогенезе волос и индукции анагена.

    Благодарности

    Мы благодарим Manabu Ohyama (Университет Кэйо, Токио, Япония), Teruko Tsuda и Eriko Tan (Университет Ehime) за предоставление существенной технической помощи.

    Вклад авторов

    Инициатива и разработка экспериментов: К.С. К.Х.Выполнены опыты: КС КК КС СС YH XD. Проанализированы данные: КС Ш ЮС ЮИТ РП ЮК. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: DM PC SA. Написал газету: КС РП.

    Каталожные номера

    1. 1. Сато С., Санджо Х., Такеда К., Ниномия-Цудзи Дж., Ямамото М. и др. (2005)Основная функция киназы TAK1 во врожденных и адаптивных иммунных реакциях. Нат Иммунол 6: 1087–1095.
    2. 2. Shim JH, Xiao C, Paschal AE, Bailey ST, Rao P, et al. (2005) TAK1, но не TAB1 или TAB2, играет существенную роль во многих сигнальных путях in vivo.Гены Дев 19: 2668–2681.
    3. 3. Ямагути К., Ширакабе К., Сибуя Х., Ириэ К., Оиси И. и др. (1995) Идентификация члена семейства MAPKKK в качестве потенциального медиатора передачи сигнала TGF-бета. Наука 270: 2008–2011.
    4. 4. Такаесу Г., Кисида С., Хияма А., Ямагути К., Сибуя Х. и др. (2000) TAB2, новый адаптерный белок, опосредует активацию TAK1 MAPKKK путем связывания TAK1 с TRAF6 в пути передачи сигнала IL-1. Мол Ячейка 5: 649–658.
    5. 5. Такаесу Г., Сурабхи Р.М., Пак К.Дж., Ниномия-Цудзи Дж., Мацумото К. и др. (2003) TAK1 имеет решающее значение для опосредованной киназой IkappaB активации пути NF-kappaB. Дж. Мол. Биол. 326: 105–115.
    6. 6. Ишитани Т., Такаесу Г., Ниномия-Цудзи Дж., Сибуя Х., Гейнор Р.Б. и др. (2003)Роль TAB2-родственного белка TAB3 в передаче сигналов IL-1 и TNF. Эмбо J 22: 6277–6288.
    7. 7. Шмидт-Ульрих Р., Паус Р. (2005)Молекулярные принципы индукции и морфогенеза волосяных фолликулов.Биоэссе 27: 247–261.
    8. 8. Zhang Y, Tomann P, Andl T, Gallant NM, Huelsken J, et al. (2009)Взаимные требования к сигнальным путям EDA/EDAR/NF-kappaB и Wnt/бета-катенин при индукции волосяных фолликулов. Ячейка разработчиков 17: 49–61.
    9. 9. Tong X, Coulombe PA (2006)Кератин 17 модулирует цикл волосяных фолликулов в зависимости от TNF-альфа. Гены Дев 20: 1353–1364.
    10. 10. Кортни Дж.М., Блэкберн Дж., Шарп П.Т. (2005)Сигнальные пути эктодисплазина и NFkappaB в одонтогенезе.Arch Oral Biol 50: 159–163.
    11. 11. Шнайдер М.Р., Шмидт-Ульрих Р., Паус Р. (2009)Волосяной фолликул как динамический мини-орган. Курр Биол 19: R132–142.
    12. 12. Саяма К., Ханакава Ю., Нагаи Х., Шираката Ю., Дай Х. и др. (2006) Трансформирующая бета-активируемая киназа фактора роста 1 необходима для дифференцировки и предотвращения апоптоза в эпидермисе. J Biol Chem 281: 22013–22020.
    13. 13. Паус Р., Мюллер-Ровер С., Ван Дер Вин С., Маурер М., Эйхмюллер С. и др.(1999) Полное руководство по распознаванию и классификации различных стадий морфогенеза волосяных фолликулов. J Invest Dermatol 113: 523–532.
    14. 14. Mikkola ML, Thesleff I (2003)Передача сигналов эктодисплазина в развитии. Фактор роста цитокинов, ред. 14: 211–224.
    15. 15. Кере Дж., Сривастава А.К., Монтонен О., Зонана Дж., Томас Н. и др. (1996) Х-сцепленная ангидротическая (гипогидротическая) эктодермальная дисплазия вызывается мутацией в новом трансмембранном белке.Нат Жене 13: 409–416.
    16. 16. Ferguson BM, Brockdorff N, Formstone E, Ngyuen T, Kronmiller JE, et al. (1997)Клонирование табби, мышиного гомолога человеческого гена EDA: свидетельство существования мембраносвязанного белка с коротким коллагеновым доменом. Хум Мол Генет 6: 1589–1594.
    17. 17. Шривастава А.К., Писпа Дж., Хартунг А.Дж., Ду Ю., Эзер С. и др. (1997) Фенотип тэбби вызывается мутацией в мышином гомологе гена EDA, которая обнаруживает новые экзоны мыши и человека и кодирует белок (эктодисплазин-А) с коллагеновыми доменами.Proc Natl Acad Sci U S A 94: 13069–13074.
    18. 18. Ян М., Ван Л.С., Химовиц С.Г., Шильбах С., Ли Дж. и др. (2000) Молекулярный переключатель из двух аминокислот в эпителиальном морфогене, который регулирует связывание с двумя разными рецепторами. Наука 290: 523–527.
    19. 19. Headon DJ, Emmal SA, Ferguson BM, Tucker AS, Justice MJ, et al. (2001) Дефект гена при эктодермальной дисплазии указывает на участие адаптера домена смерти в развитии. Природа 414: 913–916.
    20. 20. Kumar A, Eby MT, Sinha S, Jasmin A, Chaudhary PM (2001) Рецептор эктодермальной дисплазии активирует ядерный фактор-kappaB, JNK и пути гибели клеток и связывается с эктодисплазином A.J Biol Chem 276: 2668–2677.
    21. 21. Фессинг М.Ю., Шарова Т.Ю., Шаров А.А., Атоян Р., Бочкарев В.А. (2006) Участие передачи сигналов Edar в контроле инволюции волосяных фолликулов (катаген). Ам Дж. Патол 169: 2075–2084.
    22. 22. Мустонен Т., Писпа Дж., Миккола М.Л., Пуммила М., Кангас А.Т. и соавт. (2003)Стимуляция развития эктодермальных органов эктодисплазином-А1. Дев Биол 259: 123–136.
    23. 23. Тарутани М., Итами С., Окабе М., Икава М., Тэдзука Т. и др.(1997) Тканеспецифический нокаут мышиного гена Pig-a показывает важную роль GPI-заякоренных белков в развитии кожи. Proc Natl Acad Sci U S A 94: 7400–7405.
    24. 24. Ли М., Индра А.К., Варот Х, Брокард Дж., Мессаддек Н. и др. (2000)Кожные аномалии, вызванные временно контролируемыми мутациями RXRalpha в эпидермисе мыши. Природа 407: 633–636.
    25. 25. Индра А.К., Варот X, Брокард Дж., Борнерт Дж.М., Сяо Дж.Х. и др. (1999) Временно контролируемый сайт-специфический мутагенез в базальном слое эпидермиса: сравнение рекомбиназной активности рекомбиназ Cre-ER(T) и Cre-ER(T2), индуцируемых тамоксифеном.Нуклеиновые кислоты Рез. 27: 4324–4327.
    26. 26. Паус Р., Стенн К.С., Линк Р.Е. (1990) Телогеновая кожа содержит ингибитор роста волос. Бр Дж. Дерматол 122: 777–784.
    27. 27. Мюллер-Ровер С., Ханджиски Б., ван дер Вин С., Эйхмюллер С., Фойцик К. и др. (2001) Полное руководство по точной классификации волосяных фолликулов мышей на разных стадиях цикла роста волос. J Invest Dermatol 117: 3–15.
    28. 28. Хендрикс С., Ханджиски Б., Петерс Э.М., Паус Р. (2005)Руководство по оценке путей реакции на повреждение волосяного фолликула: уроки алопеции, вызванной циклофосфамидом у мышей.J Invest Dermatol 125: 42–51.
    29. 29. Паус Р., Фойцик К. (2004) В поисках «часов цикла волос»: экскурсия с гидом. Дифференциация 72: 489–511.
    30. 30. Сато С., Санджо Х., Цудзимура Т., Ниномия-Цудзи Дж., Ямамото М. и др. (2006) TAK1 незаменим для развития Т-клеток и предотвращения колита за счет образования регуляторных Т-клеток. Int Immunol 18: 1405–1411.
    31. 31. Стратис А., Паспаракис М., Маркур Д., Кнауп Р., Пофаль Р. и др.(2006)Локальное воспалительное заболевание кожи после индуцируемой абляции I каппа B киназы 2 в мышином эпидермисе. J Invest Dermatol 126: 614–620.
    32. 32. Макрис С., Годфри В.Л., Кран-Зенфтлебен Г., Такахаши Т., Робертс Д.Л. и др. (2000) У самок мышей, гетерозиготных по дефициту IKK gamma/NEMO, развивается дерматопатия, сходная с Х-сцепленным расстройством пигментной недержание мочи у человека. Мол Ячейка 5: 969–979.
    33. 33. Шмидт-Супприан М., Блох В., Куртуа Г., Аддикс К., Исраэль А. и др.(2000)Гамма-дефицитные мыши NEMO/IKK моделируют недержание пигмента. Мол Ячейка 5: 981–992.
    34. 34. Ненси А., Беккер С., Вулларт А., Гареус Р., ван Лоо Г. и др. (2007) Эпителиальный NEMO связывает врожденный иммунитет с хроническим воспалением кишечника. Природа 446: 557–561.
    35. 35. Morlon A, Munnich A, Smahi A (2005) TAB2, TRAF6 и TAK1 участвуют в активации NF-kappaB, индуцированной TNF-рецептором, Edar и его адаптером Edaradd. Хум Мол Генет 14: 3751–3757.
    36. 36.Шмидт-Ульрих Р., Тобин Д. Д., Ленхард Д., Шнайдер П., Паус Р. и др. (2006) NF-kappaB передает сигналы Eda A1/EdaR для активации экспрессии Shh и циклина D1 и контролирует рост волосяных плакод вниз после инициации. Развитие 133: 1045–1057.
    37. 37. Шмидт-Ульрих Р., Эбишер Т., Халскен Дж., Бирхмайер В., Клемм У. и др. (2001) Требование NF-kappaB/Rel для развития волосяных фолликулов и других эпидермальных отростков. Развитие 128: 3843–3853.
    38. 38.Pispa J, Pummila M, Barker PA, Thesleff I, Mikkola ML (2008)Сигнальные пути Edar и Troy действуют избыточно, чтобы регулировать инициацию развития волосяных фолликулов. Хум Мол Генет 17: 3380–3391.
    39. 39. Сакураи Х., Ниси А., Сато Н., Мизуками Дж., Миёси Х. и др. (2002)Слитый белок TAK1-TAB1: новая конститутивно активная митоген-активируемая протеинкиназа киназа киназы, которая стимулирует сигнальные пути AP-1 и NF-kappaB. Biochem Biophys Res Commun 297: 1277–1281.
    40. 40. Кодзима Т., Морикава Ю., Коупленд Н.Г., Гилберт Д.Дж., Дженкинс Н.А. и др. (2000) TROY, недавно идентифицированный член суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли, проявляет гомологию с Edar и экспрессируется в эмбриональной коже и волосяных фолликулах. J Biol Chem 275: 20742–20747.
    41. 41. Стенн К.С., Паус Р. (2001) Контроль цикла волосяных фолликулов. Physiol Rev 81: 449–494.
    42. 42. Алонсо Л., Фукс Э. (2006) Цикл волос. J Cell Sci 119: 391–393.
    43. 43. Ohnemus U, Uenalan M, Inzunza J, Gustafsson JA, Paus R (2006)Волосяной фолликул как цель и источник эстрогена. Эндокр Откр. 27: 677–706.
    44. 44. Мекленбург Л., Тобин Д.Дж., Мюллер-Ровер С., Ханджиски Б., Вендт Г. и др. (2000) Активный рост волос (анаген) связан с ангиогенезом. J Invest Dermatol 114: 909–916.
    45. 45. Линднер Г., Менрад А., Герарди Э., Мерлино Г., Велкер П. и др. (2000)Участие фактора роста/рассеяния гепатоцитов и передачи сигналов мет-рецепторов в морфогенез и цикличность волосяных фолликулов.Фасеб J 14: 319–332.

    Стволовые клетки зубных фолликулов облегчают воспаление, вызванное липополисахаридами, секретируя TGF-β3 и TSP-1, чтобы вызвать поляризацию макрофага M2 – Полный текст – Клеточная физиология и биохимия 2018, Vol. 51, No. 5

    Предыстория/цели: Все больше данных свидетельствует о новой роли мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в иммунотерапии. Однако трудности с приобретением этих клеток и возможные этические проблемы ограничивали их применение.Недавно мы выделили уникальную популяцию МСК из зубных фолликулов с мощными свойствами, подобными стволовым клеткам. Это исследование было сосредоточено на влиянии стволовых клеток зубных фолликулов (DFSC) на активацию и поляризацию макрофагов, чтобы определить их роль в иммуномодуляции и проверить, являются ли DFSC перспективным источником клеток для иммунотерапии на основе MSC. Методы: Модели острого повреждения легких (ALI) у крыс, индуцированного липополисахаридом (LPS), применяли для проверки иммуномодулирующего действия DFSC/DFSC-CM in vivo .Легочную проницаемость определяли по соотношению сухого/влажного веса левой верхней доли легкого. Гистопатологическое повреждение легких оценивали по шкале от 0 до 4+. И воспалительные цитокины в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) были протестированы с помощью ELISA. Затем мы установили LPS-индуцированные модели воспаленных макрофагов in vitro . Продукция воспалительных цитокинов и экспрессия маркера поляризации измерялись с помощью RT-qPCR, ELISA, вестерн-блоттинга и проточного цитометрического анализа в макрофагах после обработки DFSC-CM.Паракринные факторы в DFSC-CM были выявлены с помощью массива белков RayBiotech. После этого были проведены исследования нейтрализации, чтобы подтвердить потенциальные иммунные регуляторы в DFSC-CM. Результаты: DFSC/DFSC-CM не только ослаблял гистопатологические повреждения и легочную проницаемость, но также подавлял провоспалительные цитокины MCP-1, IL-1, IL-6 и TNF-α и усиливал противовоспалительный цитокин IL-10 в БАЛФ. Иммунофлуоресцентное окрашивание выявило повышенную экспрессию макрофагального маркера М2 Arg-1.Дальнейшее исследование in vitro показало, что макрофаги переключались на противовоспалительный фенотип М2 при совместном культивировании с DFSC-CM, характеризующийся подавлением продукции провоспалительных цитокинов MCP-1, IL-1, IL-6, TNF-α. и М1-поляризующие маркеры iNOS и CD86; и повышенная экспрессия противовоспалительного цитокина IL-10 и M2-поляризующих маркеров Arg-1 и CD163. Белковый массив RayBiotech выявил 42 дифференциально экспрессируемых (> 2 раза) паракринных фактора в DFSC-CM по сравнению с бессывороточной средой Ham’s F-12K, среди которых TGF-β3 и тромбоспондин-1 (TSP-1) были усилены 18 – и в 105 раз соответственно.Исследования нейтрализации подтвердили иммунорегуляторную роль TGF-β3 и TSP-1 в активации и поляризации макрофагов. Заключение: Эти результаты показали, что DFSC могут перепрограммировать макрофаги в противовоспалительный фенотип M2, паракринные факторы TGF-β3 и TSP-1 могут быть одним из основных механизмов. Это исследование подтверждает гипотезу о том, что DFSC перспективны для иммунотерапии на основе MSC.

    © 2018 Автор(ы). Опубликовано S. Karger AG, Базель

    Введение

    Макрофаги присутствуют практически во всех тканях.Они являются клеточными компонентами врожденной иммунной системы, поглощающими и разрушающими мертвые клетки, мусор и чужеродный материал и организующими воспалительные процессы [1-3]. Они играют решающую роль в тканевом гомеостазе, ключевых иммунологических процессах и развитии различных заболеваний [4, 5]. Активированные макрофаги имеют решающее значение для уничтожения вторгшихся патогенов и их токсических продуктов и классифицируются по типам М1 и М2 [6]. Макрофаги M1, которые продуцируют высокие уровни провоспалительных цитокинов, оксида азота (NO) и активных форм кислорода [7], участвуют в инициировании и поддержании воспаления.Однако подтип М2 генерирует высокие уровни противовоспалительных цитокинов, таких как IL-10, TGF-β1 и PDGF [8], и способствует противовоспалительной активности [1]. Баланс между макрофагами M1 и M2 необходим для гомеостаза, а переход от макрофагов, богатых M1, к макрофагам, богатым M2, облегчает воспалительные процессы и способствует восстановлению и регенерации тканей [9, 10]. Следовательно, индуцирование переключения с М1 на М2 в макрофагах может иметь жизненно важное значение и иметь многообещающие применения в иммунотерапии.

    МСК представляют собой гетерогенную популяцию веретенообразных стромальных клеток, обладающих свойствами самообновления, колониеобразующими свойствами и мультипотентной способностью к дифференцировке [11].МСК обладают уникальной способностью находить очаги воспаления под управлением различных факторов роста и цитокинов, что позволяет восстанавливать ткани [12, 13]. Недавно было показано, что МСК регулируют иммунный ответ, подавляя пролиферацию и активацию Т- и В-клеток, и способствуют образованию регуляторных Т-клеток, проявляя иммунодепрессивные функции [13, 14]. Кроме того, МСК вызывают фенотипическое переключение макрофагов М1 на М2 in vitro [15, 16], а также на животных моделях острого повреждения почек [17], экспериментального колита [18], повреждения спинного мозга [19] и кожные раны [1].МСК воздействуют на соседние иммунные клетки преимущественно посредством прямого межклеточного контакта и/или различных растворимых факторов [12-14, 20]. Эти новые свойства указывают на то, что МСК являются многообещающими кандидатами в клеточной терапии различных иммунных и связанных с воспалением заболеваний [12-14]. Проведено несколько клинических испытаний МСК для лечения иммунных и связанных с воспалением заболеваний, таких как красная волчанка (NCT03171194), первичные иммунодефицитные заболевания (NCT02579967), воспалительное заболевание кишечника (NCT01851343), остеоартрит (NCT02666443), ишемическая болезнь (NCT03225625) и так далее.Костный мозг в настоящее время является наиболее распространенным источником МСК [21]. Однако трудности с приобретением этих клеток и возможные этические проблемы ограничивали их применение. Поэтому необходимо срочно найти альтернативы с легким доступом и меньшим ущербом.

    В последнее время в полости рта все больше внимания уделяется получению соматических стволовых клеток, так как хирургам проще забирать ткани без чрезмерной травмы пациентов [22, 23]. Среди них одонтогенные стволовые клетки получают из удаленных зубов в стоматологии, таких как молочные, ортодонтические зубы и зубы мудрости.Их гораздо легче собирать, и они не причиняют вторичного вреда людям. Следовательно, возникает меньше этических проблем. Существует много видов одонтогенных стволовых клеток, таких как стволовые клетки пульпы зуба (DPSC), стволовые клетки зубных фолликулов (DFSC), стволовые клетки отслоившихся молочных зубов человека (SHED) и так далее. Растущее число исследований показало иммуномодулирующие способности перорально полученных стволовых клеток, особенно DPSC и SHED. Например, исследователи применяли среду, кондиционированную SHED, для лечения экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита [24], ревматоидного артрита [25] и системной красной волчанки [26, 27].Результаты показали, что SHED значительно уменьшили повреждение тканей, вызванное аутоиммунными заболеваниями. Возможные механизмы трансплантации SHED напрямую регулируют долю клеток Th27 в Т-клетках; с другой стороны, паракринные факторы SHED напрямую ингибируют воспалительные реакции или косвенно облегчают макрофагам M2 осуществление воспалительной регуляции. Тем не менее, DFSC проявляли повышенную способность к дифференцировке и могли индуцировать повышенное количество клеток CD4 + FoxP3 + Treg и подавлять пролиферацию мононуклеарных клеток периферической крови по сравнению с DPSC и SHED [28], что позволяет предположить, что DFSC также могут обладать мощным иммунным -возможность регулирования или даже лучше.Однако влияние DFSC на поляризацию макрофагов остается неизвестным, что может быть важным фактором при определении того, можно ли использовать DFSC в качестве новых альтернативных клеток для иммунотерапии на основе MSC.

    В последнее время во многих исследованиях сообщалось, что модель острого повреждения легких (ALI), индуцированного липополисахаридом (LPS) [29, 30], которое является прогрессирующим клиническим заболеванием с высокой смертностью и характеризуется чрезмерной и неконтролируемой воспалительной реакцией, может быть применена на животных. для проверки иммуномодулирующего действия in vivo .Теория заключается в том, что при развитии ОЛИ активируются нейтрофилы и макрофаги для устранения патогенов, однако это приводит к повреждению тканей за счет одновременного высвобождения противомикробных соединений [31]. И лечение, такое как МСК или цитокины, может изменить весь процесс, например, способствовать поляризации макрофагов М2 [32].

    В нашем предыдущем исследовании мы успешно выделили DFSC из зубных фолликулов и продемонстрировали, что они высоко экспрессируют маркеры перепрограммирования Oct-4, Sox-2 и MYC [33].Мы также изучали модуляцию и дифференцировку DFSC [34-37]. Чтобы всесторонне изучить иммуномодулирующие свойства DFSC, здесь мы исследовали иммуномодулирующее действие DFSC на активацию и поляризацию макрофагов в условиях воспаления в моделях ALI крыс, индуцированных LPS, а также в клеточной линии макрофагов крысы. Кроме того, мы исследовали возможные иммуномодулирующие паракринные факторы, чтобы прояснить потенциальные механизмы переключения поляризации макрофагов под действием DFSC.

    Материалы и методы

    Выделение и культивирование DFSC

    DFSC выделяли и культивировали, как описано ранее [38]. Вкратце, ткани зубных фолликулов собирали у 7-дневных крыс Sprague-Dawley (S-D), которые были приобретены в Центре лабораторных животных Университета Сунь Ятсена. Изолированные ткани зубных фолликулов промывали и мелко измельчали ​​на кусочки размером 1 мм, а затем инкубировали в 3 мг/мл коллагеназы I (Sigma-Aldrich, США) и 4 мг/мл диспазы II (Sigma-Aldrich, США) в течение 30 мин при 37°С. °С.Затем экспланты переносили в колбы для клеточных культур Т25 и культивировали в минимальной основной среде α (α-MEM, Gibco, США), с добавлением 20% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS, Gibco, США), 100 ЕД/мл пенициллина (Gibco, США). ) и 100 мг/мл стрептомицина (Gibco, США) при 37°C во влажной атмосфере с 5% CO 2 . Среду меняли каждые три дня. В следующих экспериментах использовали ПСК на третьем-пятом пассажах.

    Иммуноцитохимический анализ

    Иммуноцитохимический анализ проводили в соответствии со стандартными протоколами.Вкратце, клетки третьего пассажа помещали в 24-луночные планшеты (Corning, США), среду удаляли после того, как клетки достигали ≥ 80% слияния, и планшеты трижды промывали 1×PBS. Затем клетки фиксировали 4% параформальдегидом (Sigma-Aldrich, США) в течение 15 мин при комнатной температуре. После фиксации клетки пермеабилизировали 0,5% раствором Triton X-100 (Sigma-Aldrich, США) в течение 10 мин при комнатной температуре. Далее клетки инкубировали в блокирующем буфере (5% БСА, Thermo Fisher Scientific, США) в течение 60 мин.Планшеты снова промывали и затем инкубировали с антителом против цитокератина 1 (номер по каталогу: ab93652, Abcam, США) и антителом против виментина (номер по каталогу: ab92547, Abcam, США) в течение ночи при 4°C. Затем клетки инкубировали со вторичными антителами (мышиные антикроличьи IgG; Proteintech, США; 1:100) в течение 45 мин при комнатной температуре. Изображения были получены с помощью инвертированного микроскопа (Carl Zeiss, Германия). Отрицательные контроли инкубировали с PBS вместо первичных антител.

    Проточный цитометрический анализ поверхностных маркеров DFSC

    Фенотип DFSC определяли с помощью проточного цитометрического анализа.Коктейль для фенотипирования МСК включал как положительные (CD29-FITC, CD44/CD90-PE, BD Bioscience, США), так и отрицательные (CD34/CD45-PE, BD Bioscience, США) моноклональные антитела, конъюгированные с флуорохромом. В качестве контроля использовали изотипы IgG1-FITC и IgG1-PE (BD Bioscience, США). СККК третьего пассажа суспендировали до концентрации 1 ? a MOFlo TM Высокопроизводительный сортировщик клеток (Beckman Coulter, США).

    Оценка остеогенных и адипогенных возможностей DFSC

    DFSC загружали в 6-луночные планшеты (Corning, США) при плотности клеток 1 × 10 5 клеток на лунку и культивировали в α-MEM с добавлением 10% ФБС. После того, как клетки достигли 80% слияния, среду меняли на остеогенную среду (α-MEM с добавлением 10% FBS, 5 мМ β-глицерофосфата, 100 нМ дексаметазона и 50 мг/мл аскорбиновой кислоты) или коммерческую адипогенную среду для дифференцировки (Cyagen Biosciences, Китай) в течение следующих 7 или 14 дней, в то время как в контрольной группе использовали α-MEM с добавлением 10% FBS.Через 7 или 14 дней инкубации клетки дважды промывали PBS и фиксировали в 4% параформальдегиде (Sigma-Aldrich, США) в течение 30 мин с последующим окрашиванием ализариновым красным (Cyagen Biosciences, Китай) для выявления отложений кальция или Oil Red. O (Sigma-Aldrich, США) для оценки адипогенной дифференцировки. Клетки визуализировали с помощью системы флуоресцентного инверсионного микроскопа (Carl Zeiss, Германия).

    Получение CM из DFSC

    Когда DFSC достигли 70% слияния, клетки дважды промывали PBS, а затем культуральную среду заменяли на бессывороточную среду Ham’s F-12K (Kaighn’s).Супернатант собирали с 24-часовыми интервалами. После центрифугирования в течение 5 мин при 1000×g и фильтрации через сито 0,22 мкм (Millipore, США) собранную среду сразу же хранили при -80°С. Его смешивали с равным объемом бессывороточной среды Хэма F-12K при использовании в качестве DFSC-CM.

    Острое повреждение легких, вызванное ЛПС

    Восьминедельным самцам крыс SD (n ≥ 6 в группе) анестезировали 10% раствором хлоралгидрата и вводили через хвостовую вену 2,5 мг/кг ЛПС [29] ( Escherichia coli , Сигма-Олдрич, США).Через четыре часа после инъекции ЛПС крыс повторно анестезировали и им внутривенно инстиллировали 50 мкл хвоста DFSC, DFSC-CM или среды Хэма F-12K. Мы обеспечили эквивалентность лечения на основе DFSC и на основе CM, используя такое же количество клеток (400 000 клеток/50 мкл среды), которое произвело 50 мкл концентрированного DFSC-CM. Крыс умерщвляли внутрибрюшинной инъекцией избытка хлоралгидрата через 24 часа после LPS для следующих оценок.

    Гистологический анализ легких

    Для гистологического исследования легкие фиксировали 4% раствором формальдегида, заливали парафином, делали серийные срезы толщиной 4 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином (ГЭ).Изображения были получены с помощью микроскопа Leica CTRMIC, десять полей высокой мощности на легкое были выбраны случайным образом и слепо оценены на основе ранее опубликованного протокола [39]. Соответственно, образцы были оценены следующим образом: 0, что означает нормальный, что составляет < 15% пространства, занятого тканью, и > 85% пространства, занятого альвеолярным пространством. 1+, 15-25% занято тканью и 75-85% занято альвеолярным пространством. 2+, 25%~50% занято тканью и 50%~75% занято альвеолярным пространством. 3+, 50%~75% занято тканью и 25%~50% занято альвеолярным пространством; и 4+, 75%~100% занято тканью и 0%~25% занято альвеолярным пространством.

    Оценка проницаемости легких

    Отек легких из-за повышения проницаемости легких, вызванного липополисахаридом, измеряли путем расчета отношения сухого/влажного веса верхней доли левого легкого в соответствии с ранее описанным методом [40]. Вкратце, свежесобранные легкие взвешивали (влажный вес), затем помещали в сушильный шкаф при 55℃ на 48 часов, записывали сухой вес и рассчитывали соотношение веса сухого/влажного легких.

    Анализ жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ)

    Легкие перфузировали путем инъекции 2.5 мл ледяного PBS с шагом 0,5 мл через катетер 20-го калибра, вставленный в трахею. БАЛ центрифугировали при 400 g в течение 10 мин и определяли концентрации MCP-1, IL-1β, IL-6, TNF-α и IL-10 в супернатантах с помощью набора ELISA (номер по каталогу: ab179886, ab100768, ab100772, ab100785, ab100765, Abcam, Великобритания), в соответствии с инструкциями производителя. Поглощение при 450 нм измеряли с помощью устройства для считывания микропланшетов (ImmunoMini NJ1000). Были проведены три реакции и три отдельных эксперимента.

    Иммунофлуоресцентное окрашивание легких

    Легкие удаляли, заливали компаундом ОСТ (Sakura Finetek) и разрезали на срезы толщиной 10 мм в криостате (Leica). Затем срезы пермеабилизировали 0,5% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, США) в течение 20 мин при комнатной температуре, инкубировали в блокирующем буфере (5% BSA, Thermo Fisher Scientific, США) в течение 60 мин. Срезы снова промывали и затем инкубировали со следующими первичными антителами: CD11b (1:100, № по каталогу: ab8879, Abcam, США) и Arg-1 (1:50, № по каталогу: 93668S, CST, США).В качестве вторичного антитела использовали анти-кроличий IgG-Alexa Fluor 594 и анти-мышиный IgG-Alexa Fluor 488. Изображения получали с помощью флуоресцентного микроскопа (Carl Zeiss, Германия). Среднее соотношение двойных положительных клеток Arg-1/CD11b определяли путем подсчета десяти случайных неперекрывающихся полей при 200-кратном увеличении. В каждой группе использовали не менее пяти животных.

    Количественная ПЦР в реальном времени

    Для экспериментов по экспрессии генов клеточную линию крысиных макрофагов NR8383 (Xiangf Bio, Шанхай, Китай) загружали в 6-луночные планшеты (Corning, США) при плотности клеток 1 × 10 5 клеток на лунку и культивировали в среде Хэма F-12K с добавлением 20% FBS.После достижения клетками 80% слияния среду меняли на среду Ham’s F-12K или DFSC-CM с добавлением или без LPS (0,5 мг/л, Sigma-Aldrich, США). Клетки визуализировали с помощью системы инвертированного микроскопа (Carl Zeiss, Германия). Затем выделяли тотальную РНК с использованием TRIzol (Invitrogen, США) с 12-часовыми интервалами и синтезировали кДНК первой цепи, используя 2 мкг тотальной РНК и набор TaKaRa RNA PCR. Праймеры для ПЦР перечислены в Таблице 1. Условия проведения ПЦР: 95°C в течение 5 минут, затем 40 циклов при 95°C в течение 15 с и 60°C в течение 30 с.Были проведены три реакции и три отдельных эксперимента.

    Таблица 1.

    Последовательности праймеров, использованные в количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени

    ELISA

    Супернатанты культивируемых макрофагов собирали после стимуляции LPS (0,5 мг/л; Sigma-Aldrich, США) в течение 24 ч, и концентрации MCP-1, IL-1β, IL-6, TNF-ɑ и IL-10 оценивали с помощью коммерчески доступных наборов ELISA, упомянутых выше.

    Проточный цитометрический анализ маркера поляризации макрофагов

    Для иммуномечения клетки инкубировали с FITC-конъюгированными моноклональными антителами к CD86 (№ по каталогу: 11-0860-82, ThermoFisher eBioscience, США) и PE-конъюгированными моноклональными антителами к CD163 (№ по каталогу: MA5- 16657, Invitrogen, США) при 4°С в течение 30 мин.После инкубации клетки трижды промывали PBS, ресуспендировали в FACS-буфере и анализировали на клеточном сортере MOFloTM Highperformance (Beckman Coulter, США). В качестве контроля использовали изотип IgG1-FITC (ThermoFisher eBioscience, США) и IgG1-PE (BD Bioscience).

    Вестерн-блоттинг

    Вестерн-блоттинг проводили по стандартным протоколам. Вкратце, клетки лизировали реагентом RIPA (Pierce, США), содержащим 1% ингибитора протеиназы (Thermo Fisher Scientific, США), на льду в течение 30 мин.Супернатанты собирали после центрифугирования в течение 30 мин при 12 000×g. Для оценки содержания общего белка использовали метод бицинхониновой кислоты (BCA; Biocolors, Китай). Белки денатурировали и разделяли в 10% SDS-полиакриламидных гелях и переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Millipore, США). Мембраны блокировали в 5% коммерческом обезжиренном молоке при комнатной температуре в течение 1 ч и зондировали первичными антителами к Arg-1 (Cell Signaling Technology, США) и iNOS (Millipore, США) в соотношении 1:1000 или β-актином (Abcam, США) в разведении 1:5000 при 4°С в течение ночи, отмывали и инкубировали со вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (Cell Signaling Technology, США), при комнатной температуре в течение 1 часа.Мембраны визуализировали с помощью усиленной хемилюминесценции (ECL; Millipore, США), а денситометрию выполняли с помощью программного обеспечения ImageJ (версия 1.50i, США).

    Белковый анализ DFSC-CM

    Белки, секретируемые DFSC в CM, анализировали с помощью белкового массива в соответствии с инструкцией производителя (RayBiotech, США). Вкратце, мембраны массива белков блокировали в блокирующем буфере в течение 30 минут, а затем инкубировали со средой DFSC-CM или бессывороточной средой Ham’s F-12K (Sigma-Aldrich, США) при 4°C в течение ночи.После промывки промывочным буфером мембраны инкубировали с антителами, конъюгированными с биотином, при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем реагировали с конъюгированным с ПХ стрептавидином (разведение 1:1000) при комнатной температуре в течение 2 ч. После инкубации с буфером для детекции в темноте мембраны подвергали воздействию рентгеновской пленки и проявляли изображение с помощью пленочного сканера. Интенсивность сигнала количественно оценивали с помощью денситометрии. Рассчитывали кратность изменения экспрессии белка.

    Измерение и проверка цитокинов DFSC-CM

    Уровни TSP-1 и TGF-β3 в DFSC-CM были дополнительно подтверждены с помощью ELISA (№ по каталогу: CSB-E08764r и CSB-E17325r, Cusabio, Китай).Для истощения TSP-1 и/или TGF-β3 из DFSC-CM, анти-TSP-1 (каталожный номер: NB100-2059, Novus Biologicals, США) и/или анти-TGF-β3 (каталожный номер: AF-243 -NA, R&D, США) антитела добавляли к DFSC-CM. Количественный анализ ПЦР был проведен для измерения уровней экспрессии мРНК IL-6, TNF-α и IL-10, чтобы определить влияние двух факторов на транскрипцию воспалительных факторов из макрофагов. Затем был проведен вестерн-блот-анализ для проверки влияния двух факторов на уровни экспрессии Arg-1 и iNOS в макрофагах при воспалительных состояниях.

    Статистический анализ

    Данные представлены как среднее значение ± SEM не менее трех независимых экспериментов. Для попарных сравнений были проведены t-критерии Стьюдента. Для множественных сравнений использовали однофакторный дисперсионный анализ с поправкой Бонферрони. Статистическую значимость определяли как P  < 0,05 или 0,01 (обозначены как * или ** соответственно). Программное обеспечение PRISM (версия 6.0, GraphPad Inc., La Jolla, CA) использовалось для анализа данных.

    Результаты

    Культивирование и идентификация макрофагов и DFSC

    Клеточная линия альвеолярных макрофагов крыс показала прилипший и приостановленный рост со сферическими клетками (рис.1А). DFSC были успешно выделены из тканей зубных фолликулов крысы и культивированы до третьего пассажа. DFSC росли слипающимся образом с типичной формой веретена (рис. 1B). Иммуногистохимический анализ показал, что DFSC были положительными в отношении маркера MSC виментина (рис. 1C) и отрицательными в отношении цитокератина (рис. 1D), который является маркером эпителиальных клеток. Проточный цитометрический анализ показал, что DFSC экспрессировали высокие уровни маркеров MSC CD29 (99,97%), CD44 (99,71%) и CD90 (99,99%) и были отрицательными для гемопоэтических маркеров CD34 (0,99%).41%) и CD45 (0,64%) (рис. 1I). Кроме того, после индукции в остеогенной среде в течение 7 дней и 14 дней DFSC образовывали минерализованные узелки, которые визуализировались с помощью окрашивания ализариновым красным (рис. 1E и 1F). После культивирования в адипогенной индукционной среде в течение 7 дней и 14 дней DFSC образовали липидные капли, визуализированные с помощью окрашивания Oil Red O (рис. 1G и 1H). Эти результаты продемонстрировали мультипотентную способность DFSC к дифференцировке.

    Рис. 1.

    Выделение и идентификация DFSC и макрофагов.Репрезентативные изображения макрофагов (A) и DFSC (B). Экспрессия виментина (C) и цитокератина (D) в DFSC была обнаружена с помощью иммуногистохимического анализа. После культивирования DFSC под минерализующим раствором в течение 7 дней (E) и 14 дней (F) минерализованные узелки были обнаружены с помощью окрашивания ализариновым красным. DFSC сформировали липидные кластеры, которые окрашивались положительно на Oil Red O через 7 дней (G) и 14 дней (H) адипогенной индукции. Масштабная линейка: 100 мкм. (I) Репрезентативные результаты проточного цитометрического анализа, показывающие характер экспрессии маркера CD в P3 DFSC.Верхняя панель: соответствующие контроли изотипов; средняя панель: MSC-негативные маркеры CD; нижняя панель: MSC-положительные маркеры CD.

    Лечение DFSC/DFSC-CM ослабляло воспаление легких при ALI, индуцированном LPS

    Гистологический анализ показал, что LPS значительно увеличивал воспалительные инфильтраты по сравнению с неповрежденной группой. Этот воспалительный приток был ослаблен лечением DFSC/DFSC-CM (рис. 2A-2H). Количественная гистопатологическая оценка подтвердила это явление (рис. 2J). Мы также обнаружили, что лечение DFSC/DFSC-CM предотвращало проницаемость сосудов легких при ALI, что оценивалось по соотношению сухой/влажный (рис.2И). Те же тенденции наблюдались для уровней воспалительных цитокинов в ЖБАЛ. Через 24 ч после введения ЛПС уровни MCP-1, IL-1, IL-6 и TNF-α были значительно повышены. При лечении DFSC/DFSC-CM уровень IL-10 заметно повышался, а уровни MCP-1, IL-1 и TNF-α снижались, что указывает на ослабление воспаления (рис. 2K-2O). В соответствии с этими наблюдениями иммунофлуоресцентный анализ выявил повышенное накопление макрофагов CD11b + Arg-1 + M2 в группах лечения DFSC/DFSC-CM (рис.2P и 2Q). Статистической разницы между группами лечения DFSC и DFSC-CM не было, что свидетельствует о том, что большинство терапевтических эффектов, опосредованных DFSC, проявлялись через паракринные механизмы.

    Рис. 2.

    Лечение DFSC/DFSC-CM ослабляло воспаление легких при ОЛИ, вызванном ЛПС. (A-H) Изображения окрашивания HE легких, инфицированных LPS, после лечения DFSC / DFSC-CM. Нижняя панель находится под большим увеличением, чем верхняя. Масштабная линейка: 100 мкм. (I) Оценка проницаемости легких по соотношению сухого/влажного веса.(J) Количественная гистологическая оценка по шкале повреждения легких. Уровни провоспалительных цитокинов MCP-1 (K), IL-1β (L), IL-6 (M) и TNF-α (N) и противовоспалительного цитокина IL-10 (O) в ЖБАЛ моделей ALI крыс, получавших среду DFSC/DFSC-CM или Ham’s F-12K в течение 24 ч, оценивали с помощью ELISA. (P) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания макрофагов в легких моделей ALI крыс через 24 часа после воздействия LPS. Обратите внимание, что макрофаги легких CD11b + в группе лечения DFSC-CM экспрессировали Arg-1 + .Масштабная линейка: 50 мкм. (Q) Количественные оценки макрофагов CD11b + Arg-1 + M2 в контроле и легких, обработанных LPS + αMEM/DFSC/DFSC-CM. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0,05, **P<0,01, нс, достоверных различий нет.

    DFSC-CM индуцированная поляризация макрофагов M2

    Чтобы более тщательно выявить появление DFSC-CM-индуцированной альтернативной активации макрофагов in vivo , мы использовали модель воспаления in vitro с использованием макрофагов NR8383.Макрофаги демонстрируют резкие изменения морфологии клеток в различных поляризациях in vitro ; в частности, М2-поляризованные клетки имеют удлиненную форму по сравнению с М1-поляризованными клетками [41]. Мы обнаружили, что макрофаги, культивируемые в среде Хэма F-12K, сохраняли сферическую форму клеток, тогда как макрофаги, культивируемые с DFSC-CM, имели удлиненную форму с инфекцией LPS или без нее (рис. 3A). Инфекция LPS увеличивала транскрипцию и секрецию провоспалительных цитокинов MCP-1, IL-1, IL-6 и TNF-α, а также противовоспалительных цитокинов IL-10 в течение 12 или 24 часов соответственно.Лечение DFSC-CM ингибировало выработку провоспалительных цитокинов MCP-1, IL-1, IL-6 и TNF-α, тогда как стимулировало выработку противовоспалительного цитокина IL-10 (рис. 3B-3K). Кроме того, проточный цитометрический анализ показал, что LPS повышал экспрессию M1-поляризующего поверхностного маркера CD86, тогда как обработка DFSC-CM подавляла ее (рис. 4A). Точно так же LPS подавлял экспрессию M2-поляризующего поверхностного маркера CD163, тогда как обработка DFSC-CM повышала ее (рис.4Б). Поляризация макрофагов была дополнительно исследована с использованием ПЦР в реальном времени и вестерн-блоттинга для прототипических маркеров M1 и M2, индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS) и Arg-1 [42]. При культивировании в среде DFSC-CM со стимулами ЛПС макрофаги демонстрировали значительную активацию Arg-1 и снижение экспрессии iNOS, тогда как макрофаги, культивируемые в среде Ham’s F-12K с инфекцией ЛПС, экспрессировали высокие уровни iNOS, но не Arg-1 как на транскрипционном, так и на транскрипционном уровне. трансляционные уровни (рис. 4C ~ 4G).

    Рис.3.

    DFSC-CM регулировал воспалительное состояние макрофагов in vitro. (A) Изображения макрофагов. Макрофаги, культивируемые в F12K, сохраняли сферическую форму, тогда как макрофаги, культивируемые в DFSC-CM, демонстрировали удлиненный фенотип с LPS или без него. Масштабная линейка: 50 мкм. Уровни мРНК провоспалительных цитокинов MCP-1 (B), IL-1β (D), IL-6 (E) и TNF-α (F) и противовоспалительного цитокина IL-10 (G) в макрофаги, обработанные средой DFSC-CM или Ham’s F-12K с LPS или без нее в течение 12 часов, оценивали с помощью RT-qPCR.Через 24 ч совместного культивирования стимулированных ЛПС макрофагов со средой DFSC-CM или Ham’s F-12K секреция MCP-1 (C), IL-1β (H), IL-6 (I), TNF-α (J) и IL-10 (K) в культуральной среде оценивали с помощью ELISA. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, *P<0,05, **P<0,01, нс, достоверных различий нет.

    Рис. 4.

    DFSC-CM индуцировал поляризацию макрофагов до фенотипа M2. (A, B) Проточный цитометрический анализ M1-поляризующего поверхностного маркера CD86 и M2-поляризующего поверхностного маркера CD163 на макрофагах, обработанных DFSC-CM или средой Ham’s F-12K с LPS или без него в течение 6 часов.Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0,05, **P<0,01. (C, D) RT-qPCR для Arg-1 и iNOS в макрофагах, обработанных средой DFSC-CM или Ham’s F-12K с LPS или без него, в течение 3 ч, 6 ч и 12 ч. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0,05. (E ~ G) Вестерн-блот-анализ Arg-1, iNOS и β-актина в макрофагах, обработанных средой DFSC-CM или Ham’s F-12K с LPS или без него в течение 12 часов. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0,05, **P<0,01.

    Матрица белков идентифицировала потенциально эффективные факторы

    Мы выполнили массив белков, чтобы определить потенциально эффективные растворимые факторы, участвующие в эффектах DFSC-CM, со средой Хэма F-12K в качестве контроля.Результаты показали, что между двумя группами было 42 дифференциально экспрессируемых белка (рис. 5A ~ 5C), включая факторы роста, цитокины, хемокины, матрицеллюлярные белки, трансмембранные белки и нейротрансмиттеры (таблица 2). Среди 42 белков TGF-β3 и тромбоспондин-1 (TSP-1), уровень которых был значительно выше в DFSC-CM, чем в среде Ham F-12K (в 18 и 105 раз соответственно, рис. 5C), ранее было показано, что они обладают важной иммуномодулирующей активностью [43-46].

    Таблица 2.

    Дифференциальная экспрессия (более чем в 2 раза) растворимых факторов в DFSC-CM по сравнению со средой Ham’s F-12K

    Рис. 5.

    Анализ белков DFSC-CM с помощью RayBiotech Protein Array. (A) Кластерный анализ дифференциально экспрессируемых белков между DFSC-CM и средой Хэма F-12K. (B) После инкубации со стрептавидином, конъюгированным с HRP, сигналы визуализировались с помощью хемилюминесценции. ( C ) Массив белков выявил 42 дифференциально экспрессируемых (> 2-кратных) белка в DFSC-CM по сравнению со средой Ham F-12K, среди которых TSP-1 и TGF-β3 были активированы в 105 раз и 18 раз, соответственно. .

    TSP-1 и TGF-β3 играют модулирующую роль в поляризации макрофагов M2

    Мы дополнительно подтвердили результаты массива, выполнив ИФА на TSP-1 и TGF-β3, и исследовали роль TSP-1 и TGF-β3 в макрофагах. поляризация. Специфические нейтрализующие антитела TSP-1 и TGF-β3 были добавлены к DFSC-CM, и эффекты нейтрализации были подтверждены с помощью ELISA (фиг. 6A и 6B). Количественные анализы ПЦР показали, что ингибирующее действие DFSC-CM на транскрипцию IL-6 ослаблялось нейтрализующим антителом TGF-β3, но не нейтрализующим антителом TSP-1 (фиг.6C), тогда как TNF-α не изменялся при использовании нейтрализующего антитела TSP-1 или TGF-β3 (рис. 6D). Интересно, что опосредованное DFSC-CM усиление экспрессии IL-10 частично ингибировалось при использовании нейтрализующих антител как к TSP-1, так и к TGF-β3 (рис. 6E). Вестерн-блоттинг показал, что DFSC-CM повышает уровень Arg-1 в макрофагах. Однако этот эффект ослаблялся при добавлении нейтрализующих антител либо к TSP-1, либо к TGF-β3, и значительно подавлялся при добавлении обоих антител (рис.6Ф). Хотя нейтрализующие антитела не оказывали очевидного влияния на экспрессию iNOS (рис. 6G), наши результаты предоставили убедительные доказательства того, что TSP-1 и TGF-β3 положительно связаны с поляризацией макрофагов M2.

    Рис. 6.

    Проверка потенциальных действующих факторов в DFSC-CM. Количественное определение TSP-1 (A) и TGF-β3 (B) с помощью ELISA в среде DFSC-CM и Ham’s F-12K до и после добавления специфических нейтрализующих антител. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0.05, **Р<0,01. RT-qPCR для IL-6 (C), TNF-α (D) и IL-10 (E) в макрофагах, обработанных DFSC-CM с нейтрализующими антителами против TSP-1 и/или TGF-β3 после стимуляции LPS. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0,05, **P<0,01, нс, достоверных различий нет. Типичный вестерн-блот макрофагов, обработанных DFSC-CM с нейтрализующими антителами против TSP-1 и/или TGF-β3 после стимуляции LPS, показывает уровни белка Arg-1 (F) и iNOS (G) через 12 часов. Значения представляют собой среднее ± SEM, *P<0.05, **P<0,01, нс, достоверных различий нет.

    Обсуждение

    В настоящем исследовании мы приводим доказательства того, что терапевтические преимущества DFSC обусловлены паракринными механизмами. Внутривенное введение DFSC-CM уменьшило отек легких и воспалительное повреждение in vivo , этот эффект был сравним с введением эквивалентного количества DFSCs. И DFSC-CM индуцировал противовоспалительную трансляцию M2 макрофагов, подвергшихся воздействию LPS in vitro и in vivo .Мы также идентифицировали ранее неизвестный набор M2-подобных индукторов макрофагов, TGF-β3 и TSP-1, с помощью секретомного анализа DFSC-CM.

    При развитии ОЛИ происходит активация нейтрофилов и макрофагов для элиминации патогенов, однако это приводит к повреждению тканей за счет одновременного высвобождения антимикробных соединений [31]. Моноцитарный хемоаттрактантный белок-1 (MCP-1), также известный как CCL2, тесно связан с рекрутированием макрофагов в легкие [47] и длительным повышением уровня воспалительных цитокинов при ОПЛ [48].В настоящем исследовании MCP-1 подавлялся in vitro в макрофагах и в крысиных моделях ALI после лечения DFSC-CM, что должно способствовать уменьшению инфильтрации воспалительных клеток in vivo . Наши результаты хорошо согласуются с предыдущими исследованиями, демонстрирующими, что МСР-1 необходим для воспалительной инфильтрации при ОПЛ [47, 48], и другими отчетами, показывающими, что лечение МСК заметно снижает показатель повреждения и нейтрофильную инфильтрацию в легких [30, 49].Наши данные продемонстрировали противовоспалительное действие DFSC и DFSC-CM, по крайней мере, в некоторой степени, основанное на их способности ингибировать воспалительную инфильтрацию.

    Настоящее исследование предполагает, что DFSC и DFSC-CM способствуют трансляции противовоспалительных макрофагов M2. Ионеску и др. . сообщили, что активация макрофагов М2 является одним из механизмов, с помощью которых МСК облегчают повреждение легких [32]. В соответствии с их отчетами мы обнаружили, что альвеолярные макрофаги из легких, обработанных DFSC и DFSC-CM, имели повышенную экспрессию специфического для макрофагов M2 маркера Arg-1 по сравнению с таковым у крыс, не получавших ЛПС.Наше дальнейшее исследование также показало, что в модели воспаления in vitro с использованием макрофагов NR8383 лечение DFSC-CM снижало высвобождение провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-6 и TNF-α и увеличивало высвобождение анти- воспалительный цитокин IL-10 при стимуляции ЛПС. Кроме того, когда обработанные ЛПС макрофаги подвергались воздействию DFSC-CM, уровни экспрессии специфических для макрофагов М2 маркеров CD163 и Arg-1 увеличивались, тогда как экспрессия специфических для макрофагов М1 маркеров CD86 и iNOS снижалась.Насколько нам известно, мы впервые продемонстрировали здесь, что DFSC способствуют поляризации макрофагов в сторону фенотипа M2 посредством паракринных эффектов.

    Действительно, паракринный тип МСК открывает новые терапевтические перспективы. Различные растворимые факторы, секретируемые МСК, включая IL-4 [50], IL-13 [51], простагландин E2 (PGE2) [52] и ген/белок 6, индуцированный фактором некроза опухоли-α (TSG-6) [53]. ], играют критическую роль в модулировании воспалительных процессов и поляризации макрофагов в сторону фенотипа М2 на животных моделях сепсиса [54], острого повреждения почек [17], экспериментального колита [18], повреждения спинного мозга [19], кожные раны [1].Чтобы определить ключевые факторы, ответственные за поляризацию макрофагов в сторону фенотипа М2, индуцированную DFSC-CM, мы выполнили массив белков, который показал, что rDFSC могут высвобождать многие секретируемые белки, включая иммуномодулирующие факторы, факторы роста, цитокины, хемокины и нейротрофические факторы, таким образом предоставление полезной информации для будущих исследований. Аналогичным образом Шинкёте и др. [55]. проанализировали секреторный профиль МСК человека, чтобы получить первый широкий спектр факторов, которые они секретируют, и разделили их на функциональные группы: иммуносупрессивные, ангиогенные, антиапоптотические и пролиферативные факторы.Интересно, что среди факторов, которые могут объяснить преобразование полярности макрофагов, мы обнаружили, что DFSC-CM не содержит классических M2-индукторов. На основании биоинформатического анализа предполагалось, что TGF-β3 и TSP-1 являются молекулами-кандидатами для дальнейших исследований.

    Исследования показали как про-, так и противовоспалительные функции TGF-β3 [56, 57], указывая на его особый вклад в иммунологическую активность. TGF-β3 может способствовать восстановлению без рубцов при заживлении ран, что подчеркивает его противовоспалительный эффект и терапевтический потенциал [58-60].Наше настоящее исследование показало, что DFSC-CM был богат TGF-β3 и ингибировал выработку IL-6 обработанными LPS макрофагами через него in vitro , что согласуется с предыдущим исследованием, показывающим, что TGF-β3 значительно подавляет как IL-6, так и транскрипты и секреция в фибробластах расщелины губы и неба человека [61]. Интересно, что уровни IL-6 не были значительно снижены после лечения DFSC/DFSC-CM in vivo , что противоречит недавнему выводу о том, что лечение МСК снижает уровни IL-6 в ЖБАЛ после S.pneumoniae индуцировал ОЛИ [62]. Мы предполагаем, что это может быть связано с тем, что влияние МСК на продукцию IL-6 варьируется в зависимости от вида бактерий [63]. Другая возможная причина заключается в том, что условия in vitro отражают только ответы макрофагов, а другие клетки, такие как нейтрофилы [64], также могут способствовать продукции IL-6 in vivo , что приводит к различиям между in vitro и in vivo Результаты. Кроме того, наши данные о том, что инкубация DFSC-CM с нейтрализующим антителом против TGF-β3 снижала экспрессию маркера поляризации M2 Arg-1, указывали на то, что TGF-β3 может играть роль в поляризации M2 макрофагов, направляемой DFSC-CM. даже несмотря на то, что экспрессия маркера поляризации M1 iNOS не была затронута.Необходимы дальнейшие исследования, чтобы выявить основные механизмы. Насколько нам известно, настоящее исследование было первым, в котором была раскрыта потенциальная роль секретируемого DFSC TGF-β3 в переключении поляризации макрофагов.

    TSP-1, член матрицеллюлярного семейства белков TSP, секретируется различными нормальными и трансформированными клетками [65]. Значительно высокий уровень TSP-1 наблюдался в DFSC-CM. Нацеливание на TSP-1 с помощью специфического нейтрализующего антитела оказало заметное влияние на экспрессию Arg-1 в макрофагах, что согласуется с предыдущими исследованиями Чена и его коллег, показывающими, что отсутствие TSP-1 приводит к увеличению соотношения Arg-1. Макрофаги -CD68+ M1 в модели аутоиммунного увеоретинита у мышей [44].Эти результаты предполагают, что TSP-1 может способствовать экспрессии Arg-1, но конкретный механизм еще не раскрыт. Кроме того, предыдущие исследования показали, что, нарушая взаимодействие между CD47 и CD14 на макрофагах человека, TSP-1 ограничивает активацию NF-kB/AP-1 с помощью LPS, что приводит к ингибированию продукции воспалительных цитокинов [43]. Однако в настоящем исследовании добавление нейтрализующих антител против TSP-1 к DFSC-CM мало влияло на уровни экспрессии IL-6, TNF-α и iNOS макрофагов, что может быть связано с различными регуляторными эффектами TSP. -1 в различных средах [43, 66, 67].Интересно, что мы обнаружили, что экспрессия IL-10 существенно не снижалась при добавлении нейтрализующих антител к TGF-β3 или TSP-1, но IL-10 значительно ингибировалась при добавлении обоих нейтрализующих антител к DFSC-CM. Эти данные показали, что TGF-β3 и TSP-1 могут оказывать синергетическое действие на экспрессию IL-10 макрофагами. Йехуалаешет и др. . продемонстрировали, что TSP-1 может взаимодействовать с латентным TGF-β1 и преобразовывать его в активный TGF-β1 [68], что указывает на взаимодействие между TSP-1 и TGF-β1.Поскольку TGF-β3 и TGF-β1 имеют схожую структуру, сайт связывания лиганда и биологические особенности [69], также может существовать взаимодействие между TGF-β3 и TSP-1, которое синергетически способствует экспрессии IL-10.

    Примечательно, что DFSC-CM также содержал значительно повышенные уровни потенциальных защитных факторов, что позволяет предположить, что другие механизмы могут объяснить терапевтические преимущества DFSC-CM в этой модели. TIMP-1 был увеличен в 87 раз в DFSC-CM по сравнению с контрольной средой. TIMP-1 является основным эндогенным регулятором матриксной металлопротеиназы, играющим важную роль в улучшении заживления ран благодаря его пролиферативным и антиапоптозным эффектам [70].Уровень другой молекулы, TRAIL, увеличивался в 23 раза в DFSC-CM по сравнению с контрольной средой. TRAIL опосредует противовоспалительные эффекты путем ингибирования пролиферации и активации Т-клеток в периферической иммунной системе [71, 72]. Мы также обнаружили, что AMPK-α1 был увеличен в 10 раз в DFSC-CM по сравнению с контрольной средой. AMPK-α1 имеет решающее значение в регуляции метаболизма [73]. Недавнее исследование показывает, что метформин облегчает повреждение капилляров во время ЛПС-индуцированного ОПЛ посредством AMPK-α1 [74]. В DFSC-CM ccx наблюдалось 3-кратное увеличение FGF-2 по сравнению с контрольной группой.У мышей, обработанных фибрином, конъюгированным с гепарином, нагруженным FGF-2, наблюдалось значительное снижение воспаления и усиление неоваскуляризации [75]. воспалительные эффекты при DFSC-CM, хотя он все еще нуждается в дальнейшем изучении.

    Заключение

    В совокупности наши данные предоставляют прямые in vivo и in vitro доказательства того, что DFSC оказывают свое терапевтическое действие паракринным путем.Мы идентифицировали новый набор индукторов M2, TSP-1 и TGF-β3, из DFSC-CM. Эти результаты подтверждают гипотезу о том, что DFSCs, уникальная популяция МСК дентального происхождения с доступным тканевым источником, легкостью выделения и быстрой пролиферацией, являются многообещающим источником клеток для иммунотерапии на основе МСК.

    Благодарности

    Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (81670983), Программой научно-технического плана провинции Гуандун (2015A020212004) и Фондом естественных наук провинции Гуандун (2017A030308011).

    Заявление о раскрытии информации

    Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

    Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License (CC BY-NC-ND). Использование и распространение в коммерческих целях, а также любое распространение измененного материала требует письменного разрешения. Дозировка препарата: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор препарата и дозировка, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, в связи с продолжающимися исследованиями, изменениями в правительственных постановлениях и постоянным потоком информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на лекарства, читателю настоятельно рекомендуется проверять вкладыш в упаковке для каждого лекарства на предмет любых изменений в показаниях и дозировке, а также для дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендуемый агент является новым и/или редко используемым лекарственным средством. Отказ от ответственности: заявления, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и участникам, а не издателям и редакторам.Появление рекламы и/или ссылок на продукты в публикации не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор(ы) отказываются от ответственности за любой ущерб людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в содержании или рекламе.

    Причины, симптомы и варианты лечения

    Что такое прыщи?

    Акне — распространенное кожное заболевание.Это вызвано воспалением волосяных фолликулов и сальных (сальных) желез кожи.

    Волосяные фолликулы — это крошечные структуры, из которых растут волосы в коже головы. Сальные железы вырабатывают кожное сало. На участках, где развиваются угри, сальные железы окружают волосяные фолликулы. Сочетание сальных желез и волосяных фолликулов представляет собой «волосато-сальную единицу», где развиваются угри и кисты. Кожное сало увлажняет волосы и кожу. Каждый волос проталкивается через поверхность кожи вместе с кожным салом.

    Акне часто начинается в период полового созревания. Это происходит, когда сальные железы в коже чрезмерно стимулируются к выработке кожного сала, а клетки кожи не отделяются нормально. Эти липкие клетки блокируют волосяные фолликулы кожи, задерживая кожное сало.

    Заблокированный, заполненный маслом фолликул вызывает размножение бактерий, обычно находящихся в волосяных фолликулах. Это приводит к воспалению, покраснению и появлению прыщей (пустул).

    У подростков вспышки акне, вероятно, связаны с естественным повышением уровня андрогенных гормонов в подростковом возрасте.Эти андрогены стимулируют сальные железы вырабатывать избыток кожного сала. Наследственные факторы также способствуют возникновению проблемы.

    Другие факторы, которые могут привести к акне, включают: 

    • Масляная косметика
    • Влажность
    • Сильное потоотделение
    • Проблемы с яичниками или надпочечниками
    • Наркотики, такие как:
      • Литий
      • Стероиды, как рецептурные, так и потенциально вредные для бодибилдинга

    Акне не связано с диетой или плохой гигиеной.На самом деле, слишком частое мытье может привести к обострению акне.

    Симптомы

    Акне может вызвать:

    • Прыщи (пустулы). Это воспаленные волосяные фолликулы. Бактерии в фолликуле размножаются, привлекая борющиеся с инфекцией клетки. Они выделяют вещества, вызывающие раздражение и покраснение.Затем фолликул разрывается и выплескивает содержимое на окружающую кожу. Это вызывает большее воспаление.

    • Узлы и кисты. Это более крупные инфекции волосяных фолликулов. Они проникают глубже в кожу, образуя твердые глубокие бугорки и припухлости. Как и прыщи, они вызваны повышенной выработкой кожного сала и ростом бактерий, которые вызывают раздражение и покраснение.

    У девочек и женщин акне часто обостряется в определенные моменты менструального цикла.

    Диагностика

    Ваш врач обычно может диагностировать акне на основе простого физического осмотра. Он или она будет искать комедоны, пустулы, узелки и кисты на вашем лице, груди, спине, плечах и плечах.

    Ваш врач задаст вопросы о вашей истории болезни, чтобы попытаться определить сопутствующие факторы.Вас спросят о вашем: 

    • Менструальный анамнез 
    • Модели роста волос
    • Косметика 
    • Очищающие средства для лица  
    • Лекарства 

    Ожидаемая продолжительность

    Обострения акне могут возникать в любое время после полового созревания. Они чаще встречаются в подростковом возрасте.

    Профилактика

    Акне нельзя предотвратить.

    Акне развивается у большинства людей.Это нормальная часть взросления. Тем не менее, некоторые люди более склонны к развитию прыщей.

    Лечение

    Акне можно лечить с помощью: 

    • Смывки с салициловой кислотой. Эти средства для умывания помогают очистить комедоны от кожного сала.
    • Гели пероксида бензоила. Эти препараты наносятся на кожу в виде тонкой пленки. Они:
      • Высушите и очистите кожу
      • Борьба с ростом бактерий
      • Помощь в очищении заблокированных волосяных фолликулов

    Некоторые из них доступны в виде более слабых безрецептурных лосьонов.Если они не работают, более сильные и эффективные гелевые формы доступны по рецепту.

    • Крем с азелаиновой кислотой. Для начала наносите на чистую сухую кожу два раза в день. Затем можно уменьшить до одного раза в день. Улучшение обычно занимает несколько недель. Это помогает бороться с бактериями и может уменьшить образование комедонов.
    • Третиноин (Ретин-А). Наносится на кожу в виде крема, геля или жидкости. Это помогает очистить кожу от закупоренных фолликулов, увеличивая оборот клеток кожи.Он также повышает чувствительность кожи к солнечному свету. Поэтому третиноин следует использовать с солнцезащитным кремом.
    • Антибиотики. Некоторые антибиотики можно наносить непосредственно на кожу, чтобы уменьшить рост вызывающих акне бактерий.

    Если эти местные методы лечения не помогают, затем прыщи лечат пероральными антибиотиками. Однако эти лекарства могут иметь побочные эффекты. Они доступны только по рецепту.

    Некоторые пероральные антибиотики могут вызывать врожденные дефекты.Сексуально активные женщины, принимающие эти антибиотики, должны использовать противозачаточные средства. Им необходимо быть абсолютно уверенными, что они не забеременеют ни во время лечения, ни в течение одного месяца после лечения.

    В тяжелых случаях можно рассмотреть пероральный прием изотретиноина. Это лекарство может быть очень эффективным, но также может вызывать серьезные побочные эффекты, включая серьезные врожденные дефекты. Должны соблюдаться строгие протоколы. Ежемесячные встречи с лечащим врачом должны проводиться в течение всего периода лечения, чтобы следить за любыми побочными эффектами.У женщин детородного возраста протокол включает две формы контроля над рождаемостью. Период лечения обычно составляет пять месяцев.

    Варианты лечения

    Следующий список лекарств так или иначе связан с этим заболеванием или используется для его лечения.

    Посмотреть другие варианты лечения

    Когда следует обратиться к специалисту

    Позвоните своему врачу, если у вас или у вашего ребенка есть прыщи, которые не контролируются безрецептурными моющими средствами или гелями. Даже небольшое количество прыщей может смущать молодых людей и вызывать у них психологическую боль.Акне может привести к образованию рубцов.

    Прогноз

    Акне почти всегда можно контролировать с помощью лекарств. Однако результаты могут не проявляться в течение нескольких недель или месяцев. Большинство актуальных лекарств действуют в течение четырех-восьми недель. Третиноин может показать пиковые результаты через три-шесть месяцев.

    Узнайте больше о прыщах

    Варианты лечения
    Руководства по уходу
    Руководства Medicine.com (внешние)

    Внешние ресурсы

    Национальный институт артрита, заболеваний опорно-двигательного аппарата и кожи
    http://www.niams.nih.gov/

    Дополнительная информация

    Всегда консультируйтесь со своим поставщиком медицинских услуг, чтобы убедиться, что информация, отображаемая на этой странице, применима к вашим личным обстоятельствам.

    Медицинский отказ от ответственности

    Воспаленные волосяные фолликулы – Лечение фолликулита головы / кожи головы

    Воспаленные волосяные фолликулы могут возникнуть у любого человека в любое время. Начинают появляться болезненно очевидные скопления бугорков, казалось бы, из ниоткуда. Раздражение кожи, инфекции и видимые язвы следуют их примеру.Если вовремя не лечить, это может привести к разрушительной и необратимой потере волос и привести к более серьезным инфекциям.

    Волосяные фолликулы — это части кожи, которые содержат и защищают отдельные пряди волос и играют важную роль в защите кожи от окружающей среды. Правильный уход за фолликулами может быть самым важным шагом в поддержании пышной шевелюры.

    Со временем фолликулы подвергаются воздействию ряда факторов риска развития фолликулита.Воспаление может возникнуть в результате любой комбинации:

    • Бактериальная инфекция
    • Грибковая инфекция
    • Воздействие химических раздражителей
    • Неправильная техника бритья
    • Закупорка из-за сочетания кожного сала, омертвевшей кожи и грязи

    Это откровенно распространенное заболевание, для точного решения которого требуется диагностика у медицинского работника. Подумайте о том, чтобы связаться с Advanced Hair Studio сегодня для бесплатной расширенной проверки волос.

    Типы фолликулита

    Наиболее распространенными видами фолликулита являются:

    • Бактериальный фолликулит: один из наиболее распространенных, возникает при заражении бактериями золотистого стафилококка
    • Порезы от бритвы: при слишком близком бритье у мужчин и женщин могут появиться вросшие волосы, что, в свою очередь, может привести к образованию порезов от бритвы
    • Pityrosproum фолликулит: появление зудящих красных пустул, возникающих в результате дрожжевой инфекции

    Симптомы воспаления волосяных фолликулов

    Причины фолликулита разнообразны, и симптомы тоже будут.Эти симптомы, которые могут проявляться по всему телу, могут включать:

    • Пятна болезненных красноватых бугорков
    • Опухшая, нежная кожа
    • Белые язвы с мокнущим гноем
    • Участки неприглядной, покрытой корками кожи
    • Карбункулы, фурункулы с мокнущим гноем

    Как мы можем помочь позаботиться о ваших фолликулах

    Варианты лечения подбираются в зависимости от причины воспаления. Поддержание области в чистоте и здоровье с помощью питательной диеты и активного ухода за кожей — это первый шаг к преодолению фолликулита.

    Кремы, таблетки и другие средства местного действия могут использоваться для борьбы с бактериальными и грибковыми инфекциями, а также с возникающим отеком. Будьте осторожны, чтобы избежать дальнейшего раздражения кожи, в том числе при бритье на этапе восстановления.

    Мы знаем, что здоровые волосы являются важной частью нашего социального опыта и нашей личности. Заболевания, поражающие волосы, могут привести к серьезным разрушительным последствиям для вашей уверенности в себе и харизмы. Если его не остановить, это может нанести ущерб вашей уверенности в себе и личным отношениям.

    Advanced Hair Studio раскрыла секреты поддержания здоровья волосяных фолликулов. Лечение выпадения волос не просто реактивное, оно может и должно быть профилактическим. У нас есть ответы на простые вопросы о выпадении волос; пора тебе вернуть свой внешний вид.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.